摘要
目的探讨细胞外调节蛋白激酶(ERK)/SMAD家族(Smad)通路在骨形态蛋白(BMP)-2诱导的人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖、分化中的调节作用。方法将前磨牙hDPSCs分为空白组、荧光蛋白(GFP)组、BMP2组(80 ng/ml)、BMP2+ERK通路抑制剂(U0126)组(80 ng/ml+25μmol/L);空白组正常培养不做任何处理,GFP组转染重组腺病毒空载体溶液作为对照,BMP2组转染BMP2重组腺病毒溶液,BMP2+U0126组在BMP2组基础上加入U0126溶液进行干预培养。各组均培养7 d后,用CCK-8检测hDPSCs细胞的增殖能力;用碱性磷酸酶(ALP)染色法及茜素红染色法检测其分化能力;用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测BMP2、Runt转录因子蛋白(Runx)2、牙本质涎磷蛋白(DSPP)和骨唾液蛋白(BSP)基因表达;用蛋白Western印迹法检测各组细胞中ERK1/2及其磷酸化(p)-ERK1/2、Smad1/5/8及其磷酸化蛋白(p-Smad1/5/8)、Runx2、DSPP、BSP蛋白表达水平。结果hDPSCs分离培养的第3代hDPSCs呈长梭形且阳性表达CD29、CD44及波形蛋白,阴性表达CD34及角蛋白。与空白组比较,BMP2组细胞ALP染色区域所占百分比、矿化结节能力和BMP2、Runx2、DSPP、BSP mRNA表达水平及p-ERK1/2/ERK1/2、p-Smad1/5/8/Smad1/5/8、Runx2、DSPP、BSP蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与BMP2组比较,BMP2+U0126组除BMP2 mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05)外,其余上述指标均明显降低(P<0.05);GFP组和空白组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论ERK/Smad通路在BMP2介导的hDPSCs细胞增殖、分化作用中处于激活活化状态,发挥重要作用。
出处
《中国老年学杂志》
CAS
北大核心
2023年第3期688-693,共6页
Chinese Journal of Gerontology
基金
吴阶平医学基金会临床科研专项基金项目(320.6750.18418)。
