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流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序方法研究

Pyrosequencing Assay for Detection of Epizootic hematopoietic necrosis virus
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摘要 为建立流行性造血器官坏死病毒的焦磷酸测序检测方法,本研究针对流行性造血器官坏死病毒ORF65基因的保守区域进行分析,设计扩增引物及测序引物,经PCR扩增后对PCR产物进行焦磷酸测序,通过对反应条件和反应体系的优化,成功建立了该检测方法。试验结果显示,该方法扩增基因片段长度为137 bp,焦磷酸测序长度为38 bp,能够特异性检测出流行性造血器官坏死病毒,最低核酸检测限为0.5 pg/μL,与常规PCR检测方法的符合率达100%。本研究建立的流行性造血器官坏死病毒焦磷酸测序检测方法特异性强、灵敏度高、重复性好,为流行性造血器官坏死病毒的快速检测提供了一种可行方法。 A pyrosequencing method was established for detection of Epizootic hematopoietic necrosis virus(EHNV)by amplification primers and sequencing primer designed based on the conserved region of ORF65 gene in EHNV,and by optimization of the PCR reaction system and conditions.The results showed that the PCR product was comprised of 137 bp,and sequencing length of 38 bp,indicating a specific identification of EHNV,with the minimum nucleus acid detection limit of 0.5 pg/μL,and the coincidence rate of 100%with conventional PCR detection method.The method established in this study has high sensitivity and stability for detection of EHNV,which is applicable for fast detection of EHNV and helpful to epizootic hematopoietic necrosis control.
作者 王娜 张旻 张舟 景宏丽 任彤 张利峰 吴绍强 WANG Na;ZHANG Min;ZHANG Zhou;JING Hongli;REN Tong;ZHANG Lifeng;WU Shaoqiang(Chinese Academy of Inspection and Quarantine,Beijing 100176,China;Beijing Customs Technical Center,Beijing 101113,China)
出处 《水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期721-725,共5页 Fisheries Science
基金 国家科技部“十二五”科技支撑计划项目(2013BAD12B02)
关键词 流行性造血器官坏死病毒 焦磷酸测序 PCR 检测 Epizootic hematopoietic necrosis virus pyrosequencing PCR detection
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