摘要
构建拟南芥自噬相关基因ATG8e的原核表达载体p GEX-4T-1-ATG8e,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导得到融合蛋白GST-ATG8e。GST-ATG8e蛋白首先用谷胱甘肽琼脂糖凝胶树脂亲和纯化,然后用凝血酶酶切去除谷胱甘肽S移换酶(glutathione S-transferase,简称GST)标签,最后十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,简称SDS-PAGE)割胶纯化,用纯化后14 ku的ATG8e蛋白免疫家兔4次得到抗血清,纯化抗血清制备高效ATG8e多克隆抗体。提取野生型拟南芥和ATG8e超表达植株叶片总蛋白做免疫印迹检测,结果在2种基因型植物叶片蛋白样品中均能检测到与ATG8e分子量大小一致的条带,且ATG8e超表达植物中ATG8e积累量明显高于野生型。成功制备了拟南芥ATG8e蛋白多克隆抗体,为研究ATG8e在自噬中的作用奠定了试验基础。
出处
《江苏农业科学》
2018年第18期47-51,共5页
Jiangsu Agricultural Sciences
基金
陕西省自然科学基金(编号:2015JM3081)
