摘要
目的 观察熊果酸对血小板衍生生长因子（PDGF）诱导的大鼠活化型肝星状细胞株（HSC-T6）还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX）活化及下游信号通路激活的影响.方法 取大鼠HSC-T6,分为空白对照组（不予处理）、熊果酸对照组（50 μmol/L）、PDGF组（10 μg/L）、熊果酸干预组（50 μ mol/L熊果酸＋10μg/L PDGF）、二联苯碘干预组（20μmol/L二联苯碘＋10 μg/L PDGF）、SB203580干预组（10 μmol/L SB203580＋ 10 μg/LPDGF）、LY294002干预组（10 μmol/L LY294002＋10 μg/L PDGF）、活性氧阳性对照组（5μg/mL活性氧试剂rosup）.采用荧光定量-PCR法检测除活性氧阳性对照组外的其余各组细胞中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平.采用Western印迹法检测膜蛋白NOX亚基p47phox（除外活性氧阳性对照组）、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K,除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组）、磷酸化蛋白激酶B（p-Akt,除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（除外活性氧阳性对照组和LY294002干预组）的表达.采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测除SB203580干预组和LY294002干预组外的其余各组细胞内荧光强度.组间比较行单因素方差分析和LSD检验.结果 Ⅰ型胶原mRNA表达水平,PDGF组（3.74±0.32）高于空白对照组（1.00土0.00）,熊果酸对照组（0.21±0.02）低于空白对照组,熊果酸干预组（1.02±0.12）、二联苯碘干预组（1.09±0.21）、SB203580干预组（1.18±0.27）、LY294002干预组（1.15±0.26）均低于PDGF组,差异均有统计学意义（t=15.667、-4.501、-15.553、-15.154、-14.642、-14.813,P均＜0.05）.p47phox蛋白表达水平,PDGF组（1.98±0.53）高于空白对照组（1.00±0.00）,熊果酸对照组（0.48±0.10）低于空白对照组,熊果酸干预组（0.95±0.26）、二联苯碘干预组（0.99±0.28）、SB203580干预组（0.93±0.31）、LY294002干预组（1.07±0.19）均低于PDG
Objective To observe the effects of ursolic acid （UA） on the activation of nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase （NOX） and the downstream signaling pathways in platelet derived growth factor （PDGF） activated rat hepatic stellate cell （HSC-T6）.Methods Rat HSC-T6 cells were divided into blank control group （no treatment）,UA control group （50 μmol/L UA）,PDGF group （10 μg/L PDGF）,UA intervention group （50 μmol/L UA ＋ 10 μg/L PDGF）,diphenyleneiodonium intervention（DPI） group （20 μmol/L DPI＋ 10 μg/L PDGF）,SB203580 （p38 mitogen-activated protein kirase（p38MAPK） inhibitor） intervention group （10 μmol/L SB203580 ＋ 10 μg/LPDGF）,LY294002 （phosphatidylinositop 3 kinase（PI3K） inhibitor） intervention group （10 μmol/L LY294002 ＋ 10 μg/L PDGF） and rosup positive control group （5 μg/mL rosup）.Except rosup positive control group,the expression of type Ⅰ collagen at mRNA level of each group was detected by fluorescence quantitavepolymerase chain reaction （RT-PCR）.The expression of membrane protein p47phox （except rosup positive control group）,PI3K（except rosup positive control group and SB203580 intervention group）,p-protein kinase B （p-AKT,except rosup positive control group and SB203580 intervention group） and phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase （p-p38MAPK,except rosup positive control group and LY294002 intervention group） were tested by Western blot.Except SB203580 intervention group and LY294002 intervention group,the fluorescence intensity in the cells of each group was analyzed with active oxygen detection kit and fluorescence microplate reader.Single factor analysis of variance and LSD test were performed for comparison between groups.Results Type Ⅰ collagen at the mRNA level of PDGF group （3.74±0.32） was higher than that of blank control group （1.00±0.00） ; Type Ⅰ collagen at the mRNA level of UA group （0.21 ±0.02） was lower than that of blank control group,UA interve
出处
《中华消化杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期110-115,共6页
Chinese Journal of Digestion
基金
国家自然科学基金（81160061,81260082）
