摘要
根据海洋来源链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023基因组测序结果设计特异引物,通过PCR扩增获得1条全长为1 788 bp的糖苷水解酶15家族蛋白新成员完全编码区DNA片段,该片段编码1个595个氨基酸残基、分子量为66.2 k D的预测蛋白。利用基因工程技术将该片段重组入原核表达质粒p ET32a并转化宿主菌BL21(DE3)ply Ss,IPTG诱导融合蛋白表达,表达的包涵体融合蛋白经纯化、复性后利用DNS法测定其在不同温度、p H条件下催化不同底物产生还原糖的活性。结果表明,该酶能够水解纤维素、淀粉等多种底物产生还原糖活性,且对不同底物表现不同的最适p H和最适反应温度。
SoGA, a predicted glucoamylase encoded by a full-length 1 788 bp gene consists of 595 amino acids was cloned from Streptomyces olivaceus strain FXJ7.023 genomic DNA by PCR. Heterologous expression of SoGA in Escherischia coli strains BL21（DE3）plysS was performed and a fusion protein with molecular weight of 83.22 kD was obtained. The novel recombinant glucoamylase showed multifunctional catalytic activity of hydrolyze carboxymethylcellulose and starch under different temperature and pH.
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第2期160-166,共7页
Biotechnology Bulletin
基金
国家自然科学基金项目(31160004)
国家重点基础科学研究计划(2011CB808800)
贵州省教育厅特色重点实验室建设项目(黔教合KY字[2012]011号)
贵州省科技学技术基金项目(黔科合J字[2010]2156号
黔科合J字[2012]2348号
黔科合SY字[2013]3013号)
关键词
链霉菌
葡糖淀粉酶
基因克隆
蛋白表达
酶活
streptomycetes
glucoamylase
gene clone
protein expression
enzyme activity
