摘要
目的立足于小泛素化相关修饰蛋白（SUMO）化修饰这一蛋白质翻译后修饰的全新角度，通过研究丙泊酚对细胞蛋白SUMO化修饰和钙内流的变化探讨丙泊酚的全身麻醉机制。方法采用Western印迹法观察丙泊酚对神经母细胞瘤细胞系（SHSYSY）SUM01化水平变化的影响。并通过脂质体转染法将SUMO特异性蛋白酶（SENP）1导入3×Flag—SUMOlSHSY5Y细胞系降低SUM01化水平，以观察丙泊酚对细胞钙内流变化的影响。采用Fluo一3AM钙离子荧光测定法测定细胞内钙离子浓度。结果以50“mol／L丙泊酚分别孵育3×Flag—SUM01一SHSY5Y细胞系0、30、60、120rain，随着处理时间的延长，SUMO化水平升高，且与蛋白结合状态的SUMO增加，游离态SUMO减少。以5、10、25、50ffmol／L丙泊酚孵育细胞60rain，细胞蛋白SUMO化水平随丙泊酚浓度增加而升高。临床浓度丙泊酚（50Ⅱtool／L）引起细胞钙内流呈双向性变化，在加入丙泊酚的最初数分钟，细胞内钙离子迅速增加，约10～15min达到峰值，后逐渐降低，以45～60min为转折点，随后逐渐低于对照组，与细胞内SUMO化水平变化趋势相同。与0umol／L相比，50、37．5、25ffmol／I。丙泊酚作用60min后细胞内钙离子荧光值显著降低（P值均d0．05），细胞内钙离子浓度明显受到抑制。转入野生型SENPl的细胞中丙泊酚（50~mol／L）对其钙内流影响的双向性消失，细胞内钙离子荧光值与溶剂对照组的差异无统计学意义（P〉O．05）；而在表达突变体SENPl和空载体的细胞中，丙泊酚对钙内流的抑制性影响仍然存在，细胞内钙离子荧光值均显著低于溶剂对照组（P值均d0．05）。结论丙泊酚通过诱导3×Flag—SUM01一SHsY5Y细胞系SUMO化水平表达增加抑制细胞钙内流变化，这也许是丙泊酚发挥抑制效应的全身麻醉机制之一。
Objective To explore the general anesthesia mechanisms based on effects of propofol on posttranslational modification by small ubiquitin-like modifier （SUMO） protein and calcium influx in neuroblastoma cell lines （SHSY5Y）. Methods 3 x Flag-SUMO1-SHSY5Y cell lines were incubated by different concentrations of propofol （0, 5, 10, 25 and 50 iJmol/L） for 0, 30, 60 and 120 min. Western blot was used to detect the effect of propofol on protein sumoylation in 3 x Flag-SUMO1-SHSYSY cell lines. Cells were transfected with wild type SENP, mutant SENP and vehicle （as control）, respectively, to observe SUMO1 modification. Intracellular calcium concentration was monitored by fluo-3AM continuous fluorometry. Results Propofol increased conjugated SUMO1 modification and decerased free SUMOs in a time-dependent and concentration-dependent manner. After application of propofol （50 μmol/L）, calcium influx peaked at 10- 15 min, and began to decrease at 45-60 min, which was similar to the change of SUMO1 modification. The result of fluorometry showed that propofol significantly decreased calcium influx in concentration-dependent manner （50, 37. 5 and 25μmol/L, all P 〈 0. 05）. Over- expression of SENP1 wild type （P 〈 0. 05） but not SENP1 mutant or vehicle （both P〈0. 05） significantly prevented propofol-induced calcium influx inhibition compared with control group. Conclusion Propofol can inhibit calcium influx by promoting protein sumoylation in 3 × Flag-SUMO1-SHSY5Y cell lines, which may represent the anesthesia mechanism of propofol. （Shanghai Med J, 2013, 36 ： 823-827）
出处
《上海医学》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期823-827,共5页
Shanghai Medical Journal
