摘要
目的探讨p53凋亡刺激蛋白2（apoptosis stimulating protein 2 of p53，ASPP2）对饥饿诱导的大肠癌HCTll6p53-/-（p53缺失）细胞自噬和凋亡的影响。方法实验分3组：（1）绿色荧光蛋白腺病毒（green fluorescent protein adenovirus，rAd-GFP）感染组（对照组）；（2）自噬抑制剂LY294002处理组；（3）ASPP2腺病毒（ASPP2adenovirus，rAd-ASPP2）感染组。无血清培养基分别培养0、24、48h诱导细胞自噬和凋亡。利用calcein／PI吸收试验观察各组细胞凋亡水平。细胞转染红色荧光蛋白自噬质粒Lc3（cerisefluorescentproteinautophagyplasmidLc3，CFP-Lc3），在荧光显微镜下观察各组细胞自噬水平。结果rAd—GFP感染组饥饿24h细胞的自噬水平升高显著（0h：1．04±0．24；24h：12．17±0．86，P〈0．05），而凋亡水平改变差异无统计学意义（0h：2．01％4-0．06％；24h：3．23％±0．34％，P〉0．05）；饥饿时间延长至48h，自噬水平（0h：1．044-0．24；48h：21．094-3．32）和凋亡水平（0h：2．01％4-0．06％；48h：30．20％-I-3．18％）升高，差异均具有统计学意义（均P〈0．05）。使用LY294002抑制细胞自噬，饥饿24h细胞凋亡显著增多（rAd—GFP组：3．23％±0．34％；LY294002组：15．68％±1．24％，P〈0．01），而饥饿48h凋亡显著减少（rAd—GFP组：30．20％±3．18％；LY294002组：25．44％4-3．01％，P〈0．05）。rAd—ASPP2感染组饥饿24h自噬显著降低（rAd．GFP组：12．17±0．86；ASPP2组：1．454-0．45，P〈0．01），而凋亡显著升高（rAd—GFP组：3．23％±0．34％；ASPP2组：10．45％±0．81％，P〈0．05）；饥饿48h自噬（rAd—GFP组：21．09±3．32；ASPP2组：29．93±3．48）和凋亡（rAd．GFP组：30．20％±3．18％；ASPP2组：36．72％±2．74％）水平均显著升高（均P〈0．05）。结论ASPP2通过对自噬的双向调节促进饥饿诱导的大肠癌HCTl16p53。一细胞凋亡。
Objective To investigate the role of ASPP2 （ apoptosis stimulating protein 2 of p53, ASPP2） in starvation-induced autophagy and apoptosis of colorectal cancer HCTll6 p53-/- （p53 gene deletion） cell line. Methods The study included three experiment groups： green fluorescent protein adenovirus （rAd-GFP） infection group, autophagy inhibitor LY294002 treatment group and ASPP2 adenovirus （rAd-ASPP2） infection group. Celluar autophagy and apoptosis were induced by cocuhuring with serum-free medium for 0 h, 24 h, 48 h. Apoptosis level was detected by CalceirdPI uptaking test. Autophagy level was observed under the fluorescence microscope via transfeetion with cerise fluorescent protein autophagy plasmid CFP-Lc3. Results In control group, starvation for 24 hours significantly promoted autophagy of HCTll6 cells （0 h： 1.04 _＋0. 24; 24 h： 12. 17 ＋0. 86,P 〈0. 05）, while apoptosis was not increased （0 h： 2.01% ±0.06% ; 24 h： 3.23% ±0.3d% , P 〉0.05）. With 48 h starvation, autophagy（0 h： 1, 04 ＋0. 24; 48 h： 21.09 ~3.32） and apoptosis（0 h：2.01% ±0. 06% ; 48 h：30. 20% ± 3.18% ）of HCT116 inereased（P 〈 0. 05）. With the use of LY294002 apoptosis induced by 24 h starvation significantly increased （ rAd-GFP group： 3.23% ± O. 34% ; LY294002 group： 15.68% _＋ 1.24% , P 〈0. 01 ） , but aopotosis under 48 h starvation decreased （ rAd-GFP group： 30. 20% _＋ 3.18% ; LY294002 group： 25.44% -＋ 3.01%, P 〈 0.05 ）. With ASPP2 transfection, autophagy under 24 h starvation significantly declined （ rAd-GFP group： 12. 17 ＋ 0. 86, ASPP2 group： 1.45 ＋ O. 45, P 〈 0. 01 ） , and apoptosis increased（ rAd-GFP group： 3.23% -＋ 0. 34% ; ASPP2 group： 10. 45% _＋ O. 81% , P 〈 O. 05 ）. Both autophagy （rAd-GFP group： 21.09-＋ 3.32; ASPP2 group： 29. 93 ＋ 3.48） and apoptosis （rAd-GFP group： 30. 20% -＋3.18% ; ASPP2 group： 36.72% -＋2. 74% ） were higher than that in controls under 48 h starvation （P 〈 0. 05 ）, Conclusion
出处
《中华普通外科杂志》
CSCD
北大核心
2013年第2期129-133,共5页
Chinese Journal of General Surgery
基金
国家自然科学基金资助项目（30870853、30770742）
