摘要
以三球悬铃木为试验材料,通过对影响AFLP反应体系的各主要因素的研究,建立了悬铃木AFLP分析技术的体系.结果表明,悬铃木AFLP最佳酶切体系(20μL)为模板DNA1 000ng,PstI和MseI各为3 U,在37℃下双酶切3 h;在20μL最佳连接体系中,15μL酶切产物为3U,T4连接酶,0.25μmol·L-1PstI接头,2.5μmol·L-1MseI接头,1μL 10×T4buffer,在22℃下连接12 h;在20μL最佳预扩反应体系中稀释15倍的连接产物5μL,2.0 mmol·L-1Mg2+,2 UTaq酶,200μmol·L-1dNTP,0.5μmol·L-1PstI和M seI引物(P+AGA/M+ATC);在20μL最佳选择性扩增反应体系中5μL稀释15倍的预扩增产物,2.0 mmol·L-1的Mg2+,2 UTaq酶,200μmol·L-1dNTP,0.5μmol·L-1PstI和M seI引物(P+AGA/M+ATC).最后,利用上面的体系筛选出了92对适宜于悬铃木AFLP分析的引物.
Optimization of AFLP reaction system and its primer selection were investudied with Platanus orientalis as experimental materials in this paper.The results showed that the optimal digestion system（20 μL） included 100 ng the template DNA,3 U both Pst I and Mse I each digesting at 37 ℃ for 3 h;The best connection system（20 μL） was 15 μL digestion products 3 U,T4 ligase,0.25 μmol·L-1 Pst I adaptor,2.5 μmol·L-1 Mse I adaptor,1 μL 10×T4 buffer connecting at 22 ℃ for 10 h;The optimal pre-amplification system（20 μL） included 5μL 1/15 of the connection products,2.0 mmol·L-1 Mg2＋,2 U Taq enzyme,200 μmol ·L-1 dNTP,0.5 μmol·L-1 Pst I and Mse I primer（P＋AGA/M＋ATC）;The optimal selective amplification system（20 μL） was 5 μL 1/15 pre-amplification products,2.0 mmol·L-1of Mg2＋,2 U Taq enzyme,200 μmol·L-1 dNTP,0.5 μmol·L-1 Pst I and Mse I primers（P＋AGA/M＋ATC）.Moreover,screening of 92 pairs of primers was suitable for the AFLP analysis of Platanus orientalis with the optimized AFLP system.
出处
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期402-406,410,共6页
Journal of Henan Agricultural University
基金
国家公益性林业行业科研专项(201004002)
关键词
三球悬铃木
AFLP
体系优化
引物筛选
Platanus orientalis
AFLP
optimization of system
primer selection
