摘要
核苷二磷酸激酶A(nucleoside diphosphate kinase A,NDPK-A)有广泛的生物学活性,在肿瘤转移和调控中起重要作用.单独抑制NDPK-A中任何1个Cys所形成的二硫键,不会降低NDPK-A的磷酸转移酶活性和DNase活性.本实验通过构建C4/109/145S突变体并研究其生物学效应,为NDPK-A结构与功能的研究提供参考.用定点突变法将NDPK-A的4位、109位和145位Cys突变为Ser,构建pBV220-NDPK-A C4/109/145S和pEGFP-NDPK-A C4/109/145S两种重组质粒.在大肠杆菌中高效表达NDPK-A C4/109/145S突变体,纯化后可获得均一的重组NDPK-A C4/109/145S突变体蛋白.HPLC法和DNA消化法测定发现,C4/109/145S突变体磷酸转移酶活性低于野生型NDPK-A,而DNase活性高于野生型NDPK-A.以A549细胞作为模式细胞的流式细胞仪周期检测表明,C4/109/145S突变体与野生型NDPK-A一致,均可将细胞周期延滞在S期和G2/M期.这些结果证实,NDPK-A结构异构与其磷酸转移酶活性密切相关,其酶活性至少需要1个Cys残基存在,NDPK-A结构中的二硫键也可能是其DNase活性的负调控机制之一,胞内NDPK-A的氧化还原异构可能对细胞周期无显著影响.
Nucleoside diphosphate kinase A（NDPK-A） is bi-functional with both phosphotransferase activity and DNase activity and plays an important role in tumor migration and regulation.The breakage of any single disulfide bond of NDPK-A will not change its phosphotransferase or DNase activities.We created a NDPK-A C4/109/145S mutant by site-directed mutagenesis,sequencing confirmed,and
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第3期260-266,共7页
Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology
基金
国家自然科学基金面上项目(No.30873082)
暨南大学科研教育与创新基金(No.21610709
No.21610506)资助~~
关键词
核苷二磷酸激酶A
定点突变
磷酸转移酶活性
DNA酶活性
细胞周期
nucleoside diphosphate kinase A
site-directed mutagenesis
phosphotransferase activity
DNase activity
cell cycle
