摘要
采用ＰＣＲ技术克隆得到嗜热细菌Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｔｈｅｒｍｏｈｙｄｒｏｓｕｌｆｕｒｉｃｕｍ木糖异构酶（ｘｙｌｏｓｅｉｓｏｍｅｒａｓｅＸＩ）基因ｘｙｌＡ，将该基因连接于酵母表达载体ｐＭＡ９１的磷酸甘油激酶（ＰＧＫ）启动子下，得到重组质粒ｐＢＸ１。通过ＬｉＡｃ完整细胞转化法将重组质粒转移至酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｈ１５８受体菌中，得到重组酵母转化子Ｈ６１２，酶活测定结果表明，成功地在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达。ＳＤＳＰＡＧＥ电泳结果显示出明显的特异性表达产物带，单体分子量为４３ｋＤ。由酿酒酵母重组子Ｈ６１２产生的木糖异构酶最高酶活条件与其在自然状态下的一致，均为８５℃，ｐＨ７０，在这一条件下酶的比活力为１０Ｕ／ｍｇ蛋白，而在接近酵母最适生长温度的３０℃和４０℃时，其相对酶活分别下降３７％和１１％。研究结果显示在酿酒酵母中得到木糖异构酶的活性表达，为进一步在酿酒酵母菌中建立新的木糖代谢途径打下了基础。
The Clostridium thermohydrosulfuricum xylA gene encoding xylose(glucose)isomerase was cloned in the yeast expression vector pMA91 under the control of the PGK promoter,resulting in pBX 1,and transformed into Saccharomyces cerevisiae. Production of recombinant xylose isomerase was seen in the a Coomassie stained SDS PAGE gel and the molecular mass was estimated to be 43kD.The recombinant xylose isomerase showed the highest activity at 85℃ and pH7 The specific activity under these condition was 1 0U/mg protein.At 30℃ and 40℃,the relative activity was reduced to 3 7% and 11%,respectively,of the maximum.
出处
《微生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
1999年第1期49-54,共6页
Acta Microbiologica Sinica
基金
山东省自然科学基金
关键词
木糖代谢
木糖异构酶
XYLA
酿酒酵母
Xylose metabolism,Xylose isomerase, xylA Saccharomyces cerevisiae
