摘要
采用正交设计方法,对影响铜鱼(Coreius heterodon(Bleeker))ISSR-PCR扩增结果的5个因素,如Mg2+、dNTP、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA的浓度,在4个水平上进行了比较优化,建立了适合铜鱼的最佳ISSR-PCR反应体系:在25μL反应体系中含有1.5 mmol/L Mg2+,0.16 mmol/L dNTP,0.2μmol/L引物,1UTaqDNA聚合酶和140 ng模板DNA.检验结果表明,采用该反应体系对铜鱼进行ISSR-PCR扩增可获得多态性高,稳定性和重复性好的电泳条带.
The method of orthogonal design was used to optimize five factors,i.e.concentration of Mg2＋,dNTP,primer,Taq DNA polymerase and DNA temple,which affect ISSR-PCR amplification results of Coreius heterodon（Bleeker）,each at four levels,and an optimal ISSR-PCR reaction system for C.heterodon（Bleeker） was established： an ISSR-PCR reaction system with a total volume of 25 μL containing 1.5 mmol/L Mg2＋,0.16 mmol/L dNTP,0.2 μmol/L primer,1U Taq DNA polymerase and 140 ng DNA temple.The testing results of the reaction system confirmed that it can produce stable and reproducible electrophoretic bands with high polymorphism of ISSR-PCR for C.heterodon（Bleeker）.
出处
《西南大学学报（自然科学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期56-61,共6页
Journal of Southwest University(Natural Science Edition)
基金
重庆市自然科学基金资助项目(CSTC2007BA7029)
关键词
铜鱼
ISSR-PCR
正交设计
优化
Coreius heterodon（Bleeker）
ISSR-PCR
orthogonal design
optimization
