摘要
目的:研制抗草鱼免疫球蛋白IgM的单克隆抗体(mAb)并进行免疫学特性分析。方法:制备草鱼免疫球蛋白IgM,以其为抗原免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,3～4次免疫后取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA法对杂交瘤进行筛选,并鉴定mAb的生物学特性。结果:各株阳性克隆经3次亚克隆后,共获得5株抗草鱼IgM的mAbs,分别命名为4B3、2B11、4D5、3F2和4E6,它们的细胞上清ELISA效价为1∶3200～1∶6400,其中4D5的细胞上清及腹水效价分别为1∶6400和1∶256000,经亚类鉴定结果表明5株mAb均为IgG1。交叉反应结果表明5株mAb均不与台湾甲鱼、泰国甲鱼、日本甲鱼和中华鳖的血清反应,除mAb4B3外,其余4株均与草鱼、青鱼、鲢鱼、鳊鱼和花鱼骨的血清有明显的交叉反应,而与鲫鱼、鳗鱼的血清只有微弱的反应。mAb4B3只与草鱼和青鱼的血清有反应,而与其他鱼类血清反应很弱。免疫印迹实验结果表明mAb4D5能在变性条件下识别草鱼IgM的重链。ELISA检测mAb4D5对草鱼IgM的敏感性达10μg/L。结论:制备的抗草鱼IgMmAb可用于草鱼免疫球蛋白的结构分析、免疫应答水平监测和病原诊断等,具有广阔的应用前景。
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第9期808-810,共3页
Chinese Journal of Cellular and Molecular Immunology
基金
浙江省科技厅重点项目(2007C22052)
