摘要
目的观察无机砷的活性中间产物-甲基亚砷酸（MMA^Ⅲ）对牛主动脉血管内皮细胞（BAEC）的内皮型一氧化氮合酶（eNOS）磷酸化以及活性氧自由基（ROS）产生的影响。方法培养的BAEC分别暴露于MMA^Ⅲ（0．75／μmol／L，0-15min）；亚砷酸钠（iAs^Ⅲ，100／μmol／L，0～60min）；或N-乙酰半胱氨酸（NAC，1mmol／L）预处理2h后，再暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L，0-15min）。收获细胞悬液进行eNOS磷酸化蛋白的westem blot分析；应用二氰二乙酰荧光素法（H2DCFDA）观测细胞内的ROS产生。结果BAEC暴露于MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）15min后，eNOSser1179磷酸化显著增加（P〈0．05），NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象；MM^Ⅲ暴露也能够诱导eNOSser1179磷酸化（P〈0．05），但是需要高浓度和更长的暴露时间（100μmol／L，30min）；MMA^Ⅲ（0．75μmol／L）暴露能够诱导BAEC产生ROS，NAC预处理（1mmol／L）能够抑制这一现象。结论MMA^ Ⅲ暴露能够诱导细胞内产生ROS以及ROS依赖性eNOS磷酸化。
Objective To observe the effects of monomethylarsonous acid（ MMA^Ⅲ ）on eNOS phosphorylation and reactive oxygen species（ROS） generation in bovine aortic endothelial cells（BAEC）. Methods Cultured BAEC was exposed to MMA^Ⅲ （0.75 μmol/L, 0 - 15 min） without or with acetylcysteine （NAC） pretreatment （ 1 mmol/L, 2 h）, or iAs^Ⅲ （ 100 μmol/L, 0 - 60 min）. Westem blot was done with the specific antibodies for phospho-eNOSsr1179. Intracellular ROS generation was assessed with the fluorescent probe, 2＇, 7＇ -dichlorodihydrofluorescein diacetate（H2DCFDA） Results MMA^Ⅲ （0.75 μmol/L）caused a rapid increase in phosphorylated eNOSser11 79 at 15 min after exposure（ P 〈 0.05）. In contrast, up to 100 μmol/L iAs^Ⅲ caused the increase of phosphorylated eNOSser1179 at 30 min（ P 〈 0.05 ）. MMA^Ⅲ stimulated the ROS production in live cells. Both the MMA^Ⅲ -induced eNOser1179 phosphorylation and ROS generation were blocked by NAC pretreatment（ 1 mmol/L, 2 h）. Conclusion MMA^Ⅲ exposure can induce ROS generation and ROS-dependent eNOS phosphorylation.
出处
《中国公共卫生》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第1期98-99,共2页
Chinese Journal of Public Health
