摘要
目的探讨香烟烟雾浓缩物(CSC)对人类支气管上皮细胞系(16-HBE)表达4-羟基壬烯醛(4-HNE)的影响以及银杏内酯 B 的干预作用;并观察4-HNE 对中性粒细胞的趋化作用。方法采用免疫细胞化学和 Western blot 方法。(1)不同浓度(1、10μg/ml CSC)CSC 刺激16-HBE 细胞4h后4-HNE 加成蛋白的表达水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(2)10μg/ml CSC 刺激不同时间(1、4、8、12、24、30h)后,16-HBE 中4-HNE 加成蛋白的水平,设正常对照组(无血清培养基代替 CSC);(3)用100μmol/L 银杏内酯 B 孵育16-HBE 后,CSC 刺激1、4、8、12h,检测4-HNE 加成蛋白表达的变化,设正常对照组(无银杏内酯 B 孵育);(4)以趋化实验检测0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞的趋化作用。结果(1)1、10μg/ml CSC 刺激4h 后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白水平(免疫化学为2.12±0.38、2.69±0.42,Western blot 为100.2±6.3、72.3±6.1)均较正常对照组显著增加(免疫化学为1.25±0.37,Western blot 为122.4±4.2,P 均<0.01)。(2)10μg/ml CSC 刺激1、4、8、12、24、30h后,16-HBE 细胞表达4-HNE 加成蛋白(免疫化学为2.67±0.46、2.69±0.42、2.71±0.48、2.72±0.56、2.93±0.11、2.92±0.20,Western blot 为73.2±8.3,72.3±6.4,72.6±9.2,71.5±8.1,54.4±3.6,56.7±4.4)较正常对照组(免疫化学为1.25±0.35,Western blot 为122.4±4.1)显著增加(P 均<0.01),刺激24h 和30h,细胞内4-HNE 加成蛋白较其他时间点增加。(3)50、100μmol/L 银杏内酯 B 孵育后再以 CSC 刺激时,16-HBE 细胞内4-HNE 加成蛋白表达水平(Westernblot 为84.6±4.4、101.2±4.4)明显低于未以内酯 B 孵育组,但高于正常对照组(Western blot 为72.5±6.4,P 均<0.01)。(4)0.1、1、10μmol/L 4-HNE 对兔中性粒细胞趋化数目(92±12、104±16、131±12)较正常对照组(72±12)均显著增加,10 μmol/L 4-HNE 趋化数目显著高于0.1和1μmol/L4-HNE,差异均有统计学意义(P 均<0.01)。结论香烟所引起肺中性粒细胞趋化的结果可能与其促
Objective To explore the expression of 4-hydroxy-2-nonenal （4-HNE） in human bronchial epithelial cells（16-HBE） caused by cigarette smoke condensate（CSC） ,and to study the effects of ginkgolid B on 4-HNE expresssion and the role of 4-HNE on neutrophils ehemotaxis. Methods Immunohistochemieal and Western blot method were used to estimate the expression of 4-HNE-modified protein in 16-HBE of different groups（control group,1μg/ml or 10 μg/ml CSC stimulation for 4 h,and 10 μg/ml CSC stimulation for 1,4,8,12,24 or 30 h）. 16-HBE were incubated with 100μmol/L ginkgolid B for 24 h before CSC（ 10μg/ml） stimulation,and the expression of 4-HNE-modified protein were recorded at 1, 4,8 and 12 h after CSC stimulation. The ehemotaxis of neutrophils was measured in different concentrations of 4-HNE（0. 1,1 and 10μmol/L）. Results （1）The expression of 4-HNE-modified protein was elevated significantly in CSC stimulating groups （ immunihistochemistry ： 2. 12±0. 38,2. 69 ±0.42, Western blot： 100. 2±6. 3,72. 3±6. 1 ） compared with the group without CSC stimulation （ immunihistochemistry： 1.25±0. 37 ,Western blot： 122.4±4. 2, all P 〈 0. 01 ）. （ 2 ） The expression of 4-HNE-modified protein in groups treated with 10 μg/ml CSC in different times（ 1,4,8,12,24,30 h,immunocbemistry：2. 67±0. 46,2. 69±0. 42,2.71±0. 48,2.72±0. 56,2. 93±0. 11,2. 92±0. 20, Western blot： 73, 2±8. 3,72. 3±6. 4,72. 6±9. 2,71.5±8. 1,54. 4 ±3.6,56. 7±4. 4） were higher than the control group（ immunochemistry： 1.25±0. 35, Western blot： 122.4±4. 1, all P 〈 0. 01 ）. The expression of 4-HNE-modified protein in the 10μg/ml CSC for 24 and 30 h was significantly higher than other groups. （ 3 ） There was a lower expression level of 4-HNE-modified protein in the groups with ginkgolid B（ 50,100μmol/L） pre-ineubated for 24 h before 10 μg/ml CSC stimulation for 4 h（ Western blot：84. 6±4.4,101.2±4. 4） than those without pre-ineubated with ginkgolid B （Western blot： 72
出处
《中华结核和呼吸杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第4期247-251,共5页
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
基金
广东省自然基金团队项目(05200239)
