摘要
目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件，再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件，比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸、25μmol／L还原型辅酶Ⅱ（NADPH＋H^＋）、50．0μmol／LCaCl2、45．0μmol／L二硫苏糖醇（DTT）、36．0μmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）、1．8μmol／L苯甲磺酰氯（PMSF）、80μmol／L尼克酰胺、1μg／ml钙调蛋白（CalM）和10μg/ml蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS（iNOS）抑制剂N^W-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS（cNOS）。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ（NADP^＋）采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸（6PG）脱氢生成的大量NADPH＋H^＋，其放大倍数约为70～80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。
Objective To improve the method of detection of nitric oxide synthase（NOS） activity in serum. Methods Improvlng the experimental conditions of Wang＇method and combining it with enzymatic double cycle. Results Reagent for tNOS composed of phenylmethylsulfonyl fluoride （PMSF） 1.8 μmol/L, Nicotinamlde 80 μmol/L,dithiothreitol （ DTF ） 45. 0 μmol/L, ethylenedlnitrolotetraacetic acid （ EDTA ） 36.0 μmol/L, CaCl2 50. 0 μmol/L, L-arginine 20 mmol/L, NADPH ＋ H ＋ 25 μmol/L,CalM 1μg/ml and antlpain 10 μg/ml. For assaying cNOS the reagent was added N^W-D-arglnine was used. With enzymatic double cycle method,the NADP^＋ produced from NOS combining with the 6-Pgluconate dehydrogen produced a large quantity of NADPH ＋ H^＋ and increased sensitivity 70-80 times. Conclusions The improved method makes the test more sensitive.
出处
《检验医学》
CAS
北大核心
2006年第1期35-38,共4页
Laboratory Medicine
基金
湖北省卫生厅基金资助项目(2001WJ01593)
关键词
一氧化氮合酶
酶双循环法
辅酶Ⅱ
灵敏度
Nitric oxide synthase
Enzymatic double cycle method
Nicotinamlde adenine dinucleotide phosphate
Sensitivity
