摘要
目的研究胰岛素样生长因子结合蛋白-6(IGFBP-6)在细胞中的定位。方法用重叠PCR法构建IGFBP-6的核定位序列缺失体(pEGFP-C1-BP6ΔNLS)及突变体(pEGFP-C1-BP6-Mut)质粒,与野生型IGFBP-6质粒分别转染PC-3M细胞,激光扫描共聚焦显微镜观察绿色荧光融合蛋白在细胞中的分布,并计算这些转染阳性细胞中绿色荧光强度的核质比(Fn/c)。结果激光扫描共聚焦显微镜观察显示,野生型IGFBP-6绿色荧光信号在细胞核内聚集分布,与转染EGFP空载体的对照组相比,Fn/c差异具有显著性(P<0.05)。过表达pEGFP-C1-BP6ΔNLS的细胞中,绿色荧光信号在细胞核内聚集的现象消失,在整个细胞呈均匀分布;过表达pEGFP-C1-BP6-Mut的细胞中,细胞核内绿色荧光信号也有所减弱;两者的Fn/c与转染野生型IGFBP-6的细胞相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论IGFBP-6可以定位于细胞核内,它在细胞核内的分布与其核定位序列相关,为进一步研究IGFBP-6不依赖于胰岛素样生长因子的生物学活性提供了新的实验依据。
Objective To study the nuclear localization of insulin-like growth factor binding protein-6(IGFBP-6) in PC-3M cells.Methods The two fragments of the nuclear localization sequence(NLS)-deleted IGFBP-6 and the NLS-mutated IGFBP-6 were obtained by overlapping PCR,and then the fragment was inserted into a pEGFP-C1 vector.PC-3M cells were transfected with the expression constructs containing wild-type IGFBP-6 or the two mutants(pEGFP-C1-BP6ΔNLS and pEGFP-C1-BP6-Mut),and the different distribution of the three EG...
出处
《中国医学科学院学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第6期735-739,801,共6页
Acta Academiae Medicinae Sinicae
