目的建立检测索马鲁肽原料中N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxy succinimide,NHS)残留量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证。方法筛选色谱柱并优化流动相条件(磷酸盐浓度与有...目的建立检测索马鲁肽原料中N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxy succinimide,NHS)残留量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证。方法筛选色谱柱并优化流动相条件(磷酸盐浓度与有机相比例),建立检测索马鲁肽原料中NHS残留量的RP-HPLC法,并验证方法的专属性、适用性、准确度、重复性和稳定性,确定线性范围及定量限、检测限。用建立的方法检测3批索马鲁肽中NHS含量。结果确定的色谱条件如下:色谱柱为CAPCELL PAK ADME(4.6 mm×150 mm,3μm);流动相A为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(98∶2),流动相B为70%乙腈溶液;洗脱梯度为0 min 0%B,10 min 0%B,19 min 90%B,19.1 min 0%B,25 min 0%B;流速为0.8 mL/min;检测波长为260 nm;柱温为30℃。建立的方法在0.2~3.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,R^(2)=1.0000,检测限和定量限分别为4.8和9.6 ng;专属性、系统适用性良好;3种不同浓度NHS加样样品回收率的相对标准偏差(RSD)为0.58%,准确度良好;6份供试品溶液中NHS含量的RSD为0.16%,重复性良好;室温放置0、4、8、12、16、20和24 h NHS峰面积的RSD为0.34%,稳定性良好。3批索马鲁肽中均未检出NHS。结论建立的RP-HPLC法简单、灵敏度高,可用于索马鲁肽原料中NHS含量的测定。展开更多
文摘目的建立检测索马鲁肽原料中N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxy succinimide,NHS)残留量的反相高效液相色谱(reverse phase-high performance liquid chromatography,RP-HPLC)法,并进行验证。方法筛选色谱柱并优化流动相条件(磷酸盐浓度与有机相比例),建立检测索马鲁肽原料中NHS残留量的RP-HPLC法,并验证方法的专属性、适用性、准确度、重复性和稳定性,确定线性范围及定量限、检测限。用建立的方法检测3批索马鲁肽中NHS含量。结果确定的色谱条件如下:色谱柱为CAPCELL PAK ADME(4.6 mm×150 mm,3μm);流动相A为0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈(98∶2),流动相B为70%乙腈溶液;洗脱梯度为0 min 0%B,10 min 0%B,19 min 90%B,19.1 min 0%B,25 min 0%B;流速为0.8 mL/min;检测波长为260 nm;柱温为30℃。建立的方法在0.2~3.0μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系,R^(2)=1.0000,检测限和定量限分别为4.8和9.6 ng;专属性、系统适用性良好;3种不同浓度NHS加样样品回收率的相对标准偏差(RSD)为0.58%,准确度良好;6份供试品溶液中NHS含量的RSD为0.16%,重复性良好;室温放置0、4、8、12、16、20和24 h NHS峰面积的RSD为0.34%,稳定性良好。3批索马鲁肽中均未检出NHS。结论建立的RP-HPLC法简单、灵敏度高,可用于索马鲁肽原料中NHS含量的测定。
