以青藏高原有机牦牛为研究对象,采用超声波破碎法提取生鲜和冷藏有机牦牛背最长肌肌肉蛋白,Bradford法进行蛋白质定量后,进行双向电泳,通过PD Quest凝胶图像分析软件筛选3倍或3倍以上的差异斑点进行基质辅助激光解析串联飞行时间质谱（m...以青藏高原有机牦牛为研究对象,采用超声波破碎法提取生鲜和冷藏有机牦牛背最长肌肌肉蛋白,Bradford法进行蛋白质定量后,进行双向电泳,通过PD Quest凝胶图像分析软件筛选3倍或3倍以上的差异斑点进行基质辅助激光解析串联飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight to time of fight,MALDI-TOF-TOF）,并用Mascot软件鉴定差异蛋白,以建立青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异蛋白质组学研究方法。结果表明：经双向电泳图谱分析所获得的青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷鲜肉背最长肌肌肉蛋白斑点数分别为1 840±181和2 034±86,分布于pH 3.0~10.0之间,PD Quest软件筛选青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异3倍或3倍以上蛋白质斑点36个,其中生鲜肉相比冷藏肉有机牦牛背最长肌肌肉蛋白上调的有12个点,下调的有24个点,质谱鉴定有意义的差异蛋白质点7个（蛋白质得分〉65）（P〈0.05）,其中2种蛋白质表达量上调,5种蛋白质表达量下调。展开更多
为了建立青藏高原有机牦牛肉背最长肌双向电泳（2 - D E ）体系,本研究对肌肉样品的处理、蛋白质的提取以及等电聚焦方式等进行了研究.结果表明：（1） 用超声波裂解肌肉蛋白质的检出率及蛋白分离效果明显优于用液氮研磨;（2） 用直接...为了建立青藏高原有机牦牛肉背最长肌双向电泳（2 - D E ）体系,本研究对肌肉样品的处理、蛋白质的提取以及等电聚焦方式等进行了研究.结果表明：（1） 用超声波裂解肌肉蛋白质的检出率及蛋白分离效果明显优于用液氮研磨;（2） 用直接裂解法（7 M 尿素,2 M 硫脲,4%CHAPS（w/v） ,0 . 5 % 两性电解质pH3-10,100mmol/L DTT（w/v）,60mmol/LTris,20μL蛋白酶抑制剂）提取肌肉组织全蛋白获得的蛋白质量、凝胶图谱斑点数目、匹配率和图像分辨率最好,尤其适合提取小分子蛋白;（3 ） 采用间隔式等电聚焦方式,蛋白质的分离效果明显优于普通升压方式,且横条纹较少,蛋白点数量增多.结论：本研究建立的2 - D E 体系,能提高有机耗牛背最长肌总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,为后续进行有机耗牛肉品质评价的蛋白质组学研究,更好地解析青藏高原有机牦牛肉品质形成的遗传调控机制奠定了基础.展开更多
文摘以青藏高原有机牦牛为研究对象,采用超声波破碎法提取生鲜和冷藏有机牦牛背最长肌肌肉蛋白,Bradford法进行蛋白质定量后,进行双向电泳,通过PD Quest凝胶图像分析软件筛选3倍或3倍以上的差异斑点进行基质辅助激光解析串联飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight to time of fight,MALDI-TOF-TOF）,并用Mascot软件鉴定差异蛋白,以建立青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异蛋白质组学研究方法。结果表明：经双向电泳图谱分析所获得的青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷鲜肉背最长肌肌肉蛋白斑点数分别为1 840±181和2 034±86,分布于pH 3.0~10.0之间,PD Quest软件筛选青藏高原有机牦牛生鲜肉和冷藏肉背最长肌差异3倍或3倍以上蛋白质斑点36个,其中生鲜肉相比冷藏肉有机牦牛背最长肌肌肉蛋白上调的有12个点,下调的有24个点,质谱鉴定有意义的差异蛋白质点7个（蛋白质得分〉65）（P〈0.05）,其中2种蛋白质表达量上调,5种蛋白质表达量下调。
文摘为了建立青藏高原有机牦牛肉背最长肌双向电泳（2 - D E ）体系,本研究对肌肉样品的处理、蛋白质的提取以及等电聚焦方式等进行了研究.结果表明：（1） 用超声波裂解肌肉蛋白质的检出率及蛋白分离效果明显优于用液氮研磨;（2） 用直接裂解法（7 M 尿素,2 M 硫脲,4%CHAPS（w/v） ,0 . 5 % 两性电解质pH3-10,100mmol/L DTT（w/v）,60mmol/LTris,20μL蛋白酶抑制剂）提取肌肉组织全蛋白获得的蛋白质量、凝胶图谱斑点数目、匹配率和图像分辨率最好,尤其适合提取小分子蛋白;（3 ） 采用间隔式等电聚焦方式,蛋白质的分离效果明显优于普通升压方式,且横条纹较少,蛋白点数量增多.结论：本研究建立的2 - D E 体系,能提高有机耗牛背最长肌总蛋白双向电泳的分辨率和重复性,为后续进行有机耗牛肉品质评价的蛋白质组学研究,更好地解析青藏高原有机牦牛肉品质形成的遗传调控机制奠定了基础.
