普罗布考对PAN致足细胞损伤模型中mTOR及氧化应激水平影响

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作者 刘丽秋 傅文 +1 位作者 韩润鸿 王淑娟 《青岛大学医学院学报》 CAS 2016年第6期651-654,共4页

目的观察普罗布考对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)致小鼠永生化足细胞损伤模型哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及氧化应激水平的影响,探讨普罗布考的肾脏保护作用机制。方法 PAN刺激体外培养的足细胞24h,建立足细胞损伤模型。采用CCK-8方法检... 目的观察普罗布考对氨基核苷嘌呤霉素(PAN)致小鼠永生化足细胞损伤模型哺乳类动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及氧化应激水平的影响,探讨普罗布考的肾脏保护作用机制。方法 PAN刺激体外培养的足细胞24h,建立足细胞损伤模型。采用CCK-8方法检测不同浓度普罗布考作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。将足细胞随机分为正常组、PAN组(PAN 50mg/L)、普罗布考组(PAN 50mg/L+普罗布考40μmol/L),予以相应药物刺激24h。采用荧光酶标仪检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞中活性氧(ROS)水平的变化。采用荧光显微镜检测DCFH-DA荧光探针标记的足细胞荧光强度的变化。采用Western-blot方法检测各组足细胞mTOR蛋白表达水平。结果 CCK-8方法检测结果显示,PAN造成足细胞损伤后加入浓度为20、40、100μmol/L普罗布考均使足细胞活性上升,与0μmol/L普罗布考组比较,差异有显著性(F=1 959.00,P<0.05),其浓度为40μmol/L时作用最明显。荧光显微镜检测结果显示,PAN组足细胞内荧光强度增强。DCF荧光强度检测结果显示,PAN组细胞内ROS生成明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=33 525.19,P<0.05);普罗布考组ROS生成明显减少,与PAN组比较,差异有显著性(P<0.05)。Western-blot方法检测结果显示,PAN可使mTOR表达水平明显升高,与正常组比较,差异有显著性(F=179.55,P<0.05);普罗布考40μmol/L共处理细胞后,mTOR表达水平下降,与PAN组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论普罗布考可通过下调PAN导致的mTOR激活,降低ROS生成,减轻氧化应激水平,从而抑制足细胞损伤。 展开更多

关键词 普罗布考 嘌呤霉素 足细胞 他克莫司结合蛋白质类 氧化性应激

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雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中自噬作用的影响 被引量：14

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作者 刘丽秋 王珂 +1 位作者 韩润鸿 宋起 《中国中西医结合肾病杂志》 2015年第12期1056-1058,I0010,共4页

目的:通过观察雷公藤甲素对氨基核苷嘌呤霉素(puromycin amino nucleotide,PAN)损伤足细胞的m TOR通路及自噬水平的影响,探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR-自噬通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:体外培养的小鼠足细胞系(M... 目的:通过观察雷公藤甲素对氨基核苷嘌呤霉素(puromycin amino nucleotide,PAN)损伤足细胞的m TOR通路及自噬水平的影响,探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR-自噬通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)为研究对象,PAN分别不同时间(0 h、1 h、3 h、4 h、6 h、24 h)刺激小鼠足细胞,检测p-m TOR、Beclin1、synaptopodin表达含量的变化,成功构建PAN致足细胞损伤模型。后将足细胞随机分为以下4组:(1)对照组(Con组);(2)PAN组(PAN组,PNA 50μg/ml);(3)雷帕霉素(rapamycin,Rap)组(Rap组,PNA 50μg/ml+RAP 200 ng/ml);(4)PAN+TP组(TP组,PNA 50μg/ml+TP 10 ng/ml)。各组培养时间均为4 h;采用western blot检测足细胞p-m TOR、p-Akt、p-ULK1、LC3、Beclin-1、Synaptopodin蛋白表达量。结果:PAN处理不同的时间梯度,与Con组相比,PAN处理4 h后,诱导p-m TOR的表达、减少Beclin1、synaptopodin表达(P<0.05),成功建立PAN作用致体外足细胞损伤模型。与PAN组比较,雷公藤甲素可使p-m TOR、p-ULK1及p-Akt的表达明显上调(P<0.05),而LC3、Beclin1及Synaptopodin的表达明显下降(P<0.05)。结论:实验表明足细胞损伤可能与足细胞内自噬水平的变化有关,PAN刺激可能呈时间依赖性通过m TOR通路降低足细胞自噬水平,诱导足细胞损伤;雷公藤甲素可能通过作用m TOR通路调节足细胞自噬水平,从而对足细胞起保护作用。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 足细胞损伤 自噬 PAN MTOR

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高糖对足细胞转分化和Smad7表达的影响 被引量：8

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作者 徐晶 刘丽秋 杨堃 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第12期1062-1064,I0011,共4页

目的:通过观察高糖刺激下的足细胞表达synaptopodin、desmin和Smad7的变化,探讨高糖对足细胞的损伤机制。方法:将培养的小鼠足细胞分为正常糖组、高糖组、甘露醇组。倒置显微镜下观察足细胞的形态变化,采用RT-PCR和Western印迹技术分别... 目的:通过观察高糖刺激下的足细胞表达synaptopodin、desmin和Smad7的变化,探讨高糖对足细胞的损伤机制。方法:将培养的小鼠足细胞分为正常糖组、高糖组、甘露醇组。倒置显微镜下观察足细胞的形态变化,采用RT-PCR和Western印迹技术分别检测synaptopodin、desmin、Smad7mRNA和蛋白的表达。结果:高糖刺激48h后的足细胞形态发生改变,并且synaptopodin、Smad7mRNA和蛋白表达较对照组减少,desmin mRNA和蛋白表达较对照组增加(P<0.01)。结论:高糖能够诱导足细胞发生转分化,并且这一作用可能与Samd7表达减少有关。 展开更多

关键词 高糖足细胞Smad7糖尿病肾病

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肾上腺髓质素与器官保护及肾脏病研究进展 被引量：7

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作者 曹彩霞 周丽敏 邢广群 《中国中西医结合肾病杂志》 2005年第9期556-558,共3页

关键词 肾上腺髓质素 器官保护 肾脏病 降钙素基因相关肽 嗜铬细胞瘤细胞 peptide 氨基酸组成 11号染色体 血管扩张剂

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缬沙坦对尿酸性肾病大鼠肾间质纤维化的干预机制研究 被引量：6

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作者 孔翠文 闫慧 +2 位作者 李靖 杨堃 王艳 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期644-648,共5页

目的观察尿酸性肾病大鼠肾脏血小板反应蛋白-1(TSP-1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及缬沙坦对其影响,探讨缬沙坦对尿酸性肾病大鼠肾间质纤维化的干预机制。方法选取雄性健康Wistar大鼠36只为研究对象,适应性喂养1周后,采用随机数... 目的观察尿酸性肾病大鼠肾脏血小板反应蛋白-1(TSP-1)和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及缬沙坦对其影响,探讨缬沙坦对尿酸性肾病大鼠肾间质纤维化的干预机制。方法选取雄性健康Wistar大鼠36只为研究对象,适应性喂养1周后,采用随机数字表法分为正常组、模型组和缬沙坦组,每组12只。采用酵母和腺嘌呤建立尿酸性肾病模型,造模同时给予缬沙坦干预。于入组3周和5周时观察3组大鼠血尿酸(UA)、血肌酐(Scr)及肾脏病理变化,采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测肾脏TSP-1和HIF-1α的表达。结果 3组大鼠3周和5周时测得的体质量、UA、Scr水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和缬沙坦组大鼠3周、5周时的体质量低于正常组大鼠,UA、Scr水平高于正常组大鼠,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组大鼠3周和5周时的体质量低于缬沙坦组,Scr水平高于缬沙坦组,差异均有统计学意义(P<0.01)。3组大鼠3周和5周时RT-PCR测得的TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组和缬沙坦组3周和5周时TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA的表达量均高于正常组(P<0.01),模型组3周和5周时TSP-1 mRNA、HIF-1αmRNA的表达量亦均高于缬沙坦组,差异有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠3周和5周时肾组织TSP-1 mRNA与HIF-1αmRNA的表达分别呈正相关(r值分别为0.821和0.736,P<0.05)。结论尿酸性肾病的发展存在缺氧状态;缬沙坦可能通过下调TSP-1及HIF-1α的表达改善肾脏纤维化程度。 展开更多

关键词 尿酸性肾病 肾间质纤维化 缺氧诱导因子-1Α 血小板反应蛋白-1 缬沙坦

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雷公藤甲素对PAN致足细胞损伤中mTOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响 被引量：6

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作者 刘丽秋 任帆 +1 位作者 韩润鸿 赵娜 《中国中西医结合肾病杂志》 2016年第2期110-113,共4页

目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同... 目的:探讨雷公藤甲素(triptolide,TP)对m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路的影响及其保护足细胞的可能机制。方法:氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleoside,PAN)刺激体外培养的足细胞24 h建立模型。细胞增殖检测试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度雷公藤作用下PAN损伤足细胞的细胞存活率。后将足细胞随机分组:(1)对照组;(2)PAN组(PAN组,PAN 50μg/ml);(3)TP组(PAN 50μg/ml+TP 10 ng/ml),予以相应刺激24 h。采用实时荧光定量PCR检测足细胞m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt、synaptopodin mRNA表达量,western blot检测足细胞p-mTOR、p-4EBP1、p-p70S6K、p-Akt、synaptopodin蛋白表达量。结果:(1)CCK-8结果显示,PAN造成足细胞损伤时加入浓度为3、10 ng/ml雷公藤甲素浓度均使足细胞活性上升,10 ng/ml时作用最明显(均P<0.05)。(2)PAN增加m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达量,减少synaptopodin mRNA及蛋白表达水平(均P<0.05)。(3)雷公藤甲素共处理细胞后,m TOR、4EBP1、p70S6K、Akt mRNA及蛋白的表达水平明显下降,而synaptopodin mRNA及蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。结论:雷公藤甲素可能通过抑制m TOR/p70S6K/4EBP1信号通路,减轻足细胞损伤。 展开更多

关键词 雷公藤甲素 足细胞损伤 PAN mTOR/p70S6K/4EBP1

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中性粒细胞细胞外网络在ANCA相关性小血管炎患者肾组织中的表达及意义 被引量：5

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作者 邢广群 李敏 魏志敏 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第11期960-962,I0003,共4页

目的:研究中性粒细胞细胞外网络(NETs)在ANCA相关性小血管炎(AASV)患者肾组织中的表达并初步探讨其在AASV中的可能致病机制。方法:采用免疫组织化学技术,分别检测NETs(以瓜氨酸化的组蛋白H3为标志)在8例ANCA相关性小血管炎患者,8例微小... 目的:研究中性粒细胞细胞外网络(NETs)在ANCA相关性小血管炎(AASV)患者肾组织中的表达并初步探讨其在AASV中的可能致病机制。方法:采用免疫组织化学技术,分别检测NETs(以瓜氨酸化的组蛋白H3为标志)在8例ANCA相关性小血管炎患者,8例微小病变型肾病综合征患者,3例健康对照的肾小球、肾间质及肾小管的表达,同时检测相应部位B淋巴细胞(CD19做标志)的浸润。结果:(1)AASV患者肾小球中NETs表达较微小病变组患者和健康对照组肾小球中NETs表达明显增多[(0.354±0.347)vs(0±0),P<0.05],在AASV肾脏病理损害严重部位,如中、重度系膜细胞增生的肾小球(0.485±0.721),有炎症细胞浸润的肾间质(2.575±2.99)、肾小管(1.417±2.888)中浸润的NETs明显增多。(2)B淋巴细胞(CD19)的表达:AASV患者肾小球球周B淋巴细胞表达较健康对照组[(3.123±4.411)vs(0±0)]、微小病变组[(3.123±4.411)vs(0±0)]表达明显增多,与微小病变组相比差异有统计学意义(P<0.05)。在AASV患者肾组织中主要分布于硬化的肾小球球周(4.024±7.457)、中重度系膜细胞增生的肾小球球周(2.673±2.948),在肾间质炎细胞浸润的区域常成簇聚集(9.625±8.961),而在肾小球内基本无表达。结论:NETs在AASV患者肾组织广泛表达,肾小球中浸润的NETs可能参与了AASV患者的肾损害。 展开更多

关键词 小血管炎 中性粒细胞细胞外网络 B淋巴细胞

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依托考昔和秋水仙碱对高尿酸血症大鼠肾间质纤维化的影响 被引量：4

8

作者 李靖 任伟 +1 位作者 王艳 李长贵 《中国中西医结合肾病杂志》 2012年第1期62-64,I0007,共4页

目的:探讨依托考昔和秋水仙碱对高尿酸血症大鼠肾间质纤维化的防治作用。方法:将大鼠分为正常组、模型组、依托考昔组和秋水仙碱组,用酵母和腺嘌呤造模,分别同时给予上述药物治疗。5周后观察大鼠血尿酸、肌酐、尿素氮、校正肌酐清除率... 目的:探讨依托考昔和秋水仙碱对高尿酸血症大鼠肾间质纤维化的防治作用。方法:将大鼠分为正常组、模型组、依托考昔组和秋水仙碱组,用酵母和腺嘌呤造模,分别同时给予上述药物治疗。5周后观察大鼠血尿酸、肌酐、尿素氮、校正肌酐清除率和肾脏病理改变,免疫组织化学技术测定肾组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达。结果:与正常组相比,模型组血尿酸升高,肾间质纤维化,TGF-β1、PAI-1、IL-1β的表达明显增加(P<0.01)。与模型组相比,依托考昔组肾间质纤维化改善,TGF-β1、PAI-1和IL-1β表达显著下调(P<0.01或P<0.05);秋水仙碱组肾间质纤维化面积及TGF-β1和IL-1β的表达明显降低(P<0.05)。结论:依托考昔和秋水仙碱可能通过下调TGF-β1、PAI-1、IL-1β的表达改善高尿酸血症大鼠肾间质纤维化。 展开更多

关键词 高尿酸血症 肾间质纤维化 依托考昔 秋水仙碱 IL-1Β

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高糖诱导足细胞Smad7表达改变及骨形成蛋白7的干预作用 被引量：1

9

作者 徐晶 刘丽秋 徐跃磊 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期223-224,共2页

糖尿病肾病（DKD）是引起终末期肾病的常见原因，高糖血症可以导致足细胞的损伤，出现足细胞的转分化（EMT）Smad7是TGF—β—Smad信号途径中的重要负反馈调节因子，在DKD的发病过程中，Smad7表达失衡可能是致病环节之一。本研究探讨高... 糖尿病肾病（DKD）是引起终末期肾病的常见原因，高糖血症可以导致足细胞的损伤，出现足细胞的转分化（EMT）Smad7是TGF—β—Smad信号途径中的重要负反馈调节因子，在DKD的发病过程中，Smad7表达失衡可能是致病环节之一。本研究探讨高糖对足细胞synaptopodin、 展开更多

关键词 SMAD7 高糖诱导 足细胞 骨形成蛋白7 干预作用 SYNAPTOPODIN 终末期肾病 糖尿病肾病

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自噬对肾小球疾病的影响 被引量：1

10

作者 韩润鸿 刘丽秋 《国际泌尿系统杂志》 2015年第1期139-143,共5页

肾小球疾病可导致肾功能进行性下降且是终末期肾病的重要原因.足细胞是毒物、免疫、代谢和氧化应激等的最基本作用靶点,其损伤与丢失是肾小球疾病进展和肾衰竭的重要原因.本文旨在介绍以自噬为维持肾小球内稳态机制的相关研究.

关键词 肾小球 自噬 足细胞

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肾上腺髓质素拮抗胰岛素抵抗

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作者 邢广群 赵秀珍 +1 位作者 刘丽秋 下泽达雄 《中华内分泌代谢杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期457-458,共2页

为研究氧化应激与高血压和胰岛素抵抗的关系 ,应用 8周龄雄性的肾上腺髓质素基因敲除小鼠与野生型小鼠对照 ,经血管紧张素Ⅱ刺激 2 8天 ,并给予一种超氧化物岐化酶拟似物— 4 羟基 2 ,2 ,6,6 四甲基六氢吡啶 N 氧 (羟基 TEMPOL) ,结... 为研究氧化应激与高血压和胰岛素抵抗的关系 ,应用 8周龄雄性的肾上腺髓质素基因敲除小鼠与野生型小鼠对照 ,经血管紧张素Ⅱ刺激 2 8天 ,并给予一种超氧化物岐化酶拟似物— 4 羟基 2 ,2 ,6,6 四甲基六氢吡啶 N 氧 (羟基 TEMPOL) ,结果发现 。 展开更多

关键词 胰岛素抵抗 肾上腺髓质素 拮抗 血管紧张素Ⅱ 高血压 氧化应激 对照 雄性 基因敲除小鼠 超氧化物岐化酶

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改善维持性血液透析患者氧化应激状态的研究进展

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作者 许朕 徐岩 《国际泌尿系统杂志》 2015年第2期269-272,共4页

维持性血液透析患者体内普遍存在氧化应激状态,而且大量研究显示,氧化应激状态与心血管系统疾病密切相关,严重影响患者生活质量及生存时间.因此,改善血液透析患者氧化应激状态对改善患者预后、提高患者生活质量具有重要意义.目前,许多... 维持性血液透析患者体内普遍存在氧化应激状态,而且大量研究显示,氧化应激状态与心血管系统疾病密切相关,严重影响患者生活质量及生存时间.因此,改善血液透析患者氧化应激状态对改善患者预后、提高患者生活质量具有重要意义.目前,许多研究显示,维生素C、维生素E、锌离子、中药等对改善血液透析患者氧化应激状态具有重要作用. 展开更多

关键词 肾透析 氧化性应激

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