人巨细胞病毒p52蛋白基因的克隆及表达 被引量：1

1

作者 梅英 葛银林 +1 位作者 苏冬梅 邵济钧 《青岛医学院学报》 1998年第4期237-239,共3页

目的制备人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ｐ５２蛋白特异性抗原。②方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｐ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱... 目的制备人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）ｐ５２蛋白特异性抗原。②方法用ＰＣＲ技术扩增ＨＣＭＶｐ５２蛋白ＩｇＭ抗原决定簇编码区ＤＮＡ片段，克隆到表达载体ｐＢＶ２２０中，转化Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α株，用氨苄青霉素抗性和质粒酶切图谱分析法筛选阳性克隆，经温控诱导其表达。③结果重组克隆能有效表达天然蛋白ｐ５２，ＥＬＩＳＡ检测重组ｐ５２蛋白具良好的抗原特异性。④结论通过基因工程制备的重组ｐ５２蛋白可作为ＨＣＭＶ血清学诊断的良好抗原。 展开更多

关键词 巨细胞病毒 基因克隆 P53基因 基因表达

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大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定 被引量：1

2

作者 葛银林 邹承淑 +1 位作者 闫梅英 邵济钧 《青岛医学院学报》 1998年第4期235-236,共2页

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然... 目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。 展开更多

关键词 纯化 大肠杆菌 聚合酶链反应 耐热DNA聚合酶

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胃癌组织中PTEN基因突变的研究 被引量：6

3

作者 邹明瑾 张兰 +2 位作者 罗兵 杨晓静 王立水 《山东大学学报（医学版）》 CAS 2004年第5期577-579,共3页

目的:研究抑癌基因PTEN突变高发区外显子5穴exon5雪和外显子8穴exon8雪在胃癌组织中的突变频率,探讨其突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期的关系。方法:应用聚合酶链反应鄄单链构像多态性分析(PCR鄄SSCP)方法检测胃癌组织和相应癌... 目的:研究抑癌基因PTEN突变高发区外显子5穴exon5雪和外显子8穴exon8雪在胃癌组织中的突变频率,探讨其突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期的关系。方法:应用聚合酶链反应鄄单链构像多态性分析(PCR鄄SSCP)方法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中PTEN基因的突变,并对突变样本的PCR产物进行测序分析。结果:42例胃癌组织中检测到PTEN基因突变3例,其中exon5突变1例,exon8突变2例,突变率为7.14%(3/42);42例相应癌旁正常组织未检测到突变,二者差异无统计学意义(P>0.05)。对42例胃癌进行组织学分级,低分化腺癌突变率为12.00%(3/25),中、高分化腺癌突变率为0(0/17),二者差异无统计学意义(P>0.05)。对42例胃癌临床病理分期,Ⅰ、Ⅱ期突变率为5.88%(1/17)熏Ⅲ、Ⅳ期突变率为8.00%(2/25),二者差异无统计学意义(P>0.05)。结论:胃癌组织中存在PTEN基因突变;主要发生在低分化腺癌中;而PTEN基因突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期之间无明显相关性。 展开更多

关键词 胃肿瘤 基因 抑制 外显子 突变 聚合酶链反应 多态现象 单链构像

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1型血管紧张素Ⅱ受体基因多态性与中国人脑梗死的关系 被引量：4

4

作者 张晨 王慧源 罗兵 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第3期164-166,共3页

1目的　观察 1型血管紧张素 受体 (AT1 R)基因多态性与中国人脑梗死 (CI)和原发性高血压(HTN)的关系 ,并探讨 CI的发病机制。2方法　应用聚合酶链反应、限制性内切酶酶解、电泳分型的方法 ,分析了196例中国人 AT1 R基因中 3′- UTR的 1... 1目的　观察 1型血管紧张素 受体 (AT1 R)基因多态性与中国人脑梗死 (CI)和原发性高血压(HTN)的关系 ,并探讨 CI的发病机制。2方法　应用聚合酶链反应、限制性内切酶酶解、电泳分型的方法 ,分析了196例中国人 AT1 R基因中 3′- UTR的 116 6 C变异的多态性分布情况。3结果　 CI组中 116 6 A/ 116 6 A,116 6 A/116 6 C,116 6 C/ 116 6 C基因型频率为 0 .5 32 3,0 .30 6 5 ,0 .16 13;HTN组中分别为 0 .5 45 5 ,0 .40 0 0 ,0 .0 5 45 ;对照组中分别为 0 .75 95 ,0 .2 15 2 ,0 .0 2 5 3.CI组基因型频率与对照组比较差异有显著性 (χ2 =11.3992 ,P<0 .0 1) ,HTN组与对照组比较差异也有显著意义 (χ2 =6 .75 93,P<0 .0 5 )。CI组 116 6 C突变频率为 0 .3145 ,HTN组为 0 .2 5 45 ,对照组为 0 .132 9,CI组与对照组比较差异有显著性 (χ2 =13.6 797,P<0 .0 1) ,HTN组与对照组比较差异有显著性(χ2 =6 .42 18,P<0 .0 5 )。女性病人 CI组 116 6 C等位基因频率为 0 .3333,HTN组为 0 .3333,对照组为 0 .10 2 6 ,CI组与对照组比较差异有显著性 (χ2 =11.5 433,P<0 .0 1) ,HTN组与对照组比较差异有显著性 (χ2 =11.16 6 8,P<0 .0 1)。4结论　 AT1 R基因的多态性可能参与 CI发病 ,尤其是女性病人 CI的发病。 展开更多

关键词 基因多态性 中国人 脑梗死 血管紧张素Ⅱ受体 聚合酶链反应 发病机制 CI

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山东省丙型肝炎病毒分离株NS5区核苷酸序列分析 被引量：3

5

作者 王芹 张文卿 +3 位作者 于红 王笑峰 张健 邵济钧 《中华传染病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期363-366,共4页

目的　了解山东省丙型肝炎病毒 (HCV)分离株的基因型及其基因的变异情况。方法　应用德国UBIHCVEIA 4 .0诊断试剂盒筛选山东省部分地区 64例临床检验为抗 HCV阳性的血清标本 ,有 54例阳性。随意抽取其中 2 8例 ,应用逆转录套式 聚合酶... 目的　了解山东省丙型肝炎病毒 (HCV)分离株的基因型及其基因的变异情况。方法　应用德国UBIHCVEIA 4 .0诊断试剂盒筛选山东省部分地区 64例临床检验为抗 HCV阳性的血清标本 ,有 54例阳性。随意抽取其中 2 8例 ,应用逆转录套式 聚合酶链反应 (RT nested PCR)扩增3 1 9bp的HCVNS5区基因片段 ,结果 1 2例出现特异性条带。随后将这 1 2个NS5区片段直接进行T载体克隆 ,并用Sanger法对克隆成功的 1 0个NS5区基因片段进行序列测定。将所得到的 1 0个序列与GenBank中所有的HCV分离株进行同源性比较。结果　 1 0例山东省部分地区HCV分离株的基因型均属于HCV 1b型。对获得的 1 0个NS5区片段进行变异性分析发现 ,所有的核苷酸变化都是由于替代作用引起的 ,没有碱基的插入和缺失 ;大部分的突变都属于同义突变 ,占突变总数的 74 %。RNA 依赖性RNA聚合酶的G D D基序和所有的半胱氨酸都完全保守。结论　本研究证明了HCV 展开更多

关键词 肝炎病毒 丙型 基因型 NS5区 序列

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云南瑞丽静脉药瘾人群HIV1感染者毒株env基因V3区序列测定研究 被引量：4

6

作者 王斌 鲁晓晴 +4 位作者 路永波 邵一鸣 陈筝 赵全壁 曾毅 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期297-300,共4页

为了解云南瑞丽静脉药瘾人群HIV1感染者毒株的分子流行病学特征 ,运用套式聚合酶链反应 (nestedPCR)对来自云南静脉药瘾人群的 16株HIV1env基因V3区进行扩增 ,并对扩增片段进行DNA序列测定和分析。结果显示 ,与本地区共享序列相比 ,16株... 为了解云南瑞丽静脉药瘾人群HIV1感染者毒株的分子流行病学特征 ,运用套式聚合酶链反应 (nestedPCR)对来自云南静脉药瘾人群的 16株HIV1env基因V3区进行扩增 ,并对扩增片段进行DNA序列测定和分析。结果显示 ,与本地区共享序列相比 ,16株HIV1膜蛋白V3区氨基酸序列的株间变异为 0 %～ 2 3% ,平均为 7%。HIV1云南株膜蛋白V3区氨基酸共享序列与HIV1SF2株及美欧株共享序列同源性在 90 %以上 ,而与海地、日本及非洲等地的代表毒株同源性较低。结果表明 ,在进化上这16株HIV1毒株间有非常密切的关系。这一地区的流行毒株在这一时期以美欧株、HIV1SF2株及其衍生株为主。 展开更多

关键词 静脉药瘾者 分子流行病学 艾滋病 HIV1

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严重急性呼吸综合征病毒的研究进展

7

作者 闫志勇 钱冬萌 王斌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2003年第2期111-113,共3页

关键词 严重急性呼吸综合征病毒 研究进展 病原体 追踪研究 生物学特征 实验室检测 免疫学方法 分子检测方法

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山东省HCV分离株C区及NS5区核苷酸序列分析及其基因分型 被引量：3

8

作者 张文卿 于红 +4 位作者 王笑峰 王芹 吕锐 王海青 邵济钧 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期219-221,共3页

目的　研究山东省丙型肝炎病毒 (HCV)流行株的基因型别。方法　用反转录套式聚合酶链反应 (PCR)方法分别扩增山东省HCV流行株C区 (4 32bp)NS5区 (319bp)的两个基因片段 ,将其克隆入T载体上并自动测序 ,进行同源性分析及基因型别鉴定。... 目的　研究山东省丙型肝炎病毒 (HCV)流行株的基因型别。方法　用反转录套式聚合酶链反应 (PCR)方法分别扩增山东省HCV流行株C区 (4 32bp)NS5区 (319bp)的两个基因片段 ,将其克隆入T载体上并自动测序 ,进行同源性分析及基因型别鉴定。结果　 4株HCVC区基因片段有 3株为 1b基因亚型 ,1株为 2a基因亚型 ,10株NS5区的基因片段分析均为 1b基因亚型 ,并且与GenBank中多个 1b亚型代表株核苷酸序列同源性达 90 %以上。结论　山东省HCV流行株以 1b亚型为主 ,兼有 2a亚型。同一亚型中也有较大的变异 ,NS5区 1b亚型中基因离散率可达 5 %以上。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 碱基序列 基因型 山东

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1990～1997年云南IDUs HIV-1B亚型分离株膜蛋白V3环顶端四肽基因序列的变化趋势 被引量：2

9

作者 吴虹 王斌 +3 位作者 方荣 路永波 钱冬萌 曾毅 《中华微生物学和免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2000年第5期462-464,共3页

目的　观察云南静脉药瘾 (IDUs)HIV 1分离株env基因V3环顶端四肽氨基酸和相应核苷酸序列随时间推移的变化。方法　根据 1990～ 1997年间 6 2株HIV 1分离株env基因C2 V3区DNA序列 ,对HIV 1膜蛋白V3环顶端四肽基因序列 (基序 )及其编码... 目的　观察云南静脉药瘾 (IDUs)HIV 1分离株env基因V3环顶端四肽氨基酸和相应核苷酸序列随时间推移的变化。方法　根据 1990～ 1997年间 6 2株HIV 1分离株env基因C2 V3区DNA序列 ,对HIV 1膜蛋白V3环顶端四肽基因序列 (基序 )及其编码核苷酸进行分析 ,并探讨其随时间推移的变化趋势。结果　 1990～ 1997年间 6 2株HIV 1毒株膜蛋白V3环顶端四肽基序有程度不同的氨基酸变异 ,主要表现在第四位氨基酸的改变 ,变异呈现一定的趋向性。 6 2株云南标本中有 46例(74 2 % )为GPGR ,10例 (16 1% )为GPGQ ,4例 (6 4% )为GPGK ,另有 2例 (3 3% )为GPER且四肽基序编码核苷酸的变异主要表现为A→G的改变。结论　 1990～ 1997年这一时期内 ,云南IDUs特定感染者范围内HIV 1分离株膜蛋白V3环顶端四肽序列已表现出较大的趋向性 ,符合HIV 展开更多

关键词 V3环顶端四肽基因序列 静脉药瘾 艾滋病毒

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HSV-1包膜糖蛋白G重组蛋白的纯化与抗原性分析 被引量：1

10

作者 徐翮飞 罗兵 陈庆峰 《青岛大学医学院学报》 CAS 2002年第2期130-132,共3页

①目的　纯化原核表达的HSV 1包膜糖蛋白G重组蛋白并对其抗原性进行分析。②方法　应用亲和层析法纯化重组蛋白 ,Western印迹和ELISA法检测分析其抗原性。③结果　Western Blot检测 15份HSV 1IgM阳性血清 ,其中 12份血清可与重组蛋白发... ①目的　纯化原核表达的HSV 1包膜糖蛋白G重组蛋白并对其抗原性进行分析。②方法　应用亲和层析法纯化重组蛋白 ,Western印迹和ELISA法检测分析其抗原性。③结果　Western Blot检测 15份HSV 1IgM阳性血清 ,其中 12份血清可与重组蛋白发生反应 ;ELISA法检测 5 35份血清 ,与商品化同类试剂盒相比符合率为 89.7% .④结论　该重组蛋白检测HSV 1活动性感染有较高的应用价值。 展开更多

关键词 重组蛋白质类 纯化 酶联免疫吸附测定

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运用SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达 被引量：2

11

作者 苏乃伦 牟文凤 王斌 《中国医学创新》 CAS 2010年第2期65-67,共3页

目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h... 目的运用SELDI(Surface Enhanced Laser Desorption/Ionization)蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制奠定基础。方法常规培养Vero细胞,感染HSV-1,孵育12 h、24 h、48 h后用细胞裂解液裂解细胞。裂解上清经蛋白定量后应用IMAC3(固定金属亲和)和WCX2(弱阳离子交换)芯片,SELDI-TOF-MS技术检测细胞感染HSV-1前后蛋白质表达的差异。结果感染24 h细胞出现明显细胞病变效应(CPE),感染12 h质谱分析即可见蛋白的差异表达。共19个蛋白表达水平发生变化,其中IMAC3芯片发现差异峰9个,WCX2芯片发现差异峰10个。结论 SELDI蛋白质芯片技术检测Vero细胞感染HSV-1后蛋白质的差异表达方法简便,敏感性高,从而为从蛋白质水平研究HSV-1感染的致病机制,HSV-1与宿主细胞的相互作用,及抗感染治疗靶位的寻找奠定了一定的基础。 展开更多

关键词 SELDI蛋白质芯片 VERO细胞 HSV-1 蛋白表达

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透析对糖尿病肾衰竭病人外周血单个核细胞TGF-β_1 mRNA表达的影响 被引量：1

12

作者 庄文青 刘美荣 王斌 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第2期104-106,共3页

1目的　探讨透析对糖尿病肾衰竭病人转化生长因子 (TGF- β1 )表达的影响。2方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)半定量技术 ,对糖尿病肾衰竭不同治疗组病人外周血单个核细胞 (PBMC) TGF- β1 m RNA的表达进行检测。 3结果　糖尿病... 1目的　探讨透析对糖尿病肾衰竭病人转化生长因子 (TGF- β1 )表达的影响。2方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)半定量技术 ,对糖尿病肾衰竭不同治疗组病人外周血单个核细胞 (PBMC) TGF- β1 m RNA的表达进行检测。 3结果　糖尿病肾衰竭透析病人 TGF- β1 m RNA的表达明显高于对照组 (t=12 .5 30 ,P<0 .0 1) ,且血液透析病人 TGF- β1 m RNA的表达较腹膜透析病人高 (t=2 .134 ,P<0 .0 5 )。 4结论　血液透析可使糖尿病肾衰竭病人 TGF- β1 展开更多

关键词 TGF-Β1 mRNA 糖尿病肾病 肾功能衰竭 透析疗法

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EB病毒相关胃癌研究进展 被引量：2

13

作者 孙坚萍 罗兵 《国外医学（病毒学分册）》 2004年第2期56-59,共4页

世界范围内约 1 0 %的胃癌组织中可检测到EBV ,研究显示 :EBV感染能使原代培养的正常胃上皮细胞永生化 ,EBV相关胃癌是由一个EBV感染的细胞单克隆增殖形成 ,提示EBV感染在EBV相关胃癌的发展中起重要作用。本文就EBV相关胃癌的诊断、病... 世界范围内约 1 0 %的胃癌组织中可检测到EBV ,研究显示 :EBV感染能使原代培养的正常胃上皮细胞永生化 ,EBV相关胃癌是由一个EBV感染的细胞单克隆增殖形成 ,提示EBV感染在EBV相关胃癌的发展中起重要作用。本文就EBV相关胃癌的诊断、病毒存在形式和基因表达、影响其发生发展的协同因素以及EBV对上皮细胞的生长促进作用作一综述。 展开更多

关键词 EB病毒 胃癌 肿瘤 抗体 癌组织

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人类免疫缺陷病毒1型云南株外膜蛋白原核表达克隆的构建 被引量：1

14

作者 王斌 鲁晓晴 +1 位作者 邵一鸣 曾毅 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期29-32,共4页

目的为研究我国云南１型人类免疫缺陷病毒（Ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＩＶ－１）流行株外膜蛋白（ｇｐ１２０）的有关抗原表位。方法采用套式聚合酶链式反应，以来自云南流行区ＨＩＶ－１感... 目的为研究我国云南１型人类免疫缺陷病毒（Ｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓｔｙｐｅ１，ＨＩＶ－１）流行株外膜蛋白（ｇｐ１２０）的有关抗原表位。方法采用套式聚合酶链式反应，以来自云南流行区ＨＩＶ－１感染者的外周血单核巨噬细胞基因组为模板，进行云南流行株外膜蛋白基因（ｅｎｖ）片段的扩增，并将ｅｎｖ基因片段与原核表达载体ｐＢＶ２２０进行重组，构建成质粒ｐＹＮｅｎｖ并在大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ１０ｂ）中获得表达。采用限制性内切酶分析进行重组质粒的鉴定。结果含重组质粒的宿主菌经３０℃２０小时培养后，转入４２℃培养５小时，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ蛋白电泳分析有重组蛋白的表达。经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ反应证实，该重组蛋白可与来自该流行区的ＨＩＶ－１感染者血清（含多克隆抗体）发生特异反应。结论该重组膜蛋白可作为抗原用于ＨＩＶ－１膜蛋白抗体的检测，并为进一步研究ＨＩＶ－１ｇｐ１２０的病理机制奠定了基础。 展开更多

关键词 免疫缺陷病毒 外膜蛋白 基因表达

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PTEN基因突变与胃癌临床分期相关性的探讨 被引量：1

15

作者 邹明瑾 高杨 +2 位作者 罗兵 梁华 李燕 《中国现代普通外科进展》 CAS 2005年第6期352-354,共3页

目的:分析抑癌基因PTEN突变高发区外显子5(exon5)和外显子8(exon8)在胃癌组织中的突变频率,探讨其突变与胃癌临床分期的相关性。方法:应用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)方法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中PTEN基因的突... 目的:分析抑癌基因PTEN突变高发区外显子5(exon5)和外显子8(exon8)在胃癌组织中的突变频率,探讨其突变与胃癌临床分期的相关性。方法:应用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(PCR-SSCP)方法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中PTEN基因的突变,对突变样本的PCR产物进行测序分析。结果:42例胃癌组织中检测到PTEN基因突变3例,突变率为7.14%(3/42);42例胃癌临床病理分期,Ⅰ、Ⅱ期突变率为5.88%(1/17),Ⅲ、Ⅳ期突变率为8.00%(2/25),二者差异无统计学意义(P〉0.05)。42例相应癌旁正常组织未检测到突变。42例胃癌进行组织学分级,低分化腺癌突变率为12.00%(3/25),中、高分化腺癌突变率为0(0/17),二者差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:胃癌组织中存在PTEN基因突变,主要发生在低分化腺癌中,而PTEN基因突变与胃癌病理组织学分级和临床病理分期之间无明显相关性。 展开更多

关键词 胃肿瘤 基因 转变 基因 PTEN

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EBV感染上皮细胞机制的研究进展 被引量：1

16

作者 梁华 罗兵 邵济钧 《国外医学（病毒学分册）》 2002年第2期61-64,共4页

近年来发现 EBV与多种上皮细胞恶性肿瘤的发生密切相关 ,探讨 EBV感染上皮细胞的机制对预防和治疗 EBV相关疾病有重要意义。本文就 EBV感染上皮细胞的可能机制作一综述。

关键词 EBV感染 上皮细胞机制 研究进展

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重组HIV-1跨膜蛋白gp41在大肠杆菌中的表达

17

作者 王静 王斌 +2 位作者 路永波 王秋波 张艳丽 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第3期161-163,共3页

1目的　构建重组 HIV- 1SF2株跨膜蛋白 gp41基因片段的原核表达克隆并在大肠杆菌中表达。2方法　通过聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,然后用限制性内切酶将其与原核表达载体 p MAL - p2定向连接 ,构建成重组质粒转入大肠杆菌 DH5α菌... 1目的　构建重组 HIV- 1SF2株跨膜蛋白 gp41基因片段的原核表达克隆并在大肠杆菌中表达。2方法　通过聚合酶链反应 (PCR)扩增目的基因 ,然后用限制性内切酶将其与原核表达载体 p MAL - p2定向连接 ,构建成重组质粒转入大肠杆菌 DH5α菌中。经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE电泳分析有无重组蛋白表达。3结果　获得了重组的原核表达质粒及其表达产物。4结论　在 p MAL - p2中构建的 HIV - 1gp41重组质粒可在大肠杆菌中表达。 展开更多

关键词 重组HIV-1跨膜蛋白 大肠杆菌 质粒 基因重排 GP41 基因表达 聚合酶链反应 艾滋病 AID3

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1992～1994年HIV-1国际流行株和云南株膜蛋白V3区氨基酸共有序列比较

18

作者 王斌 鲁晓晴 +2 位作者 邵济钧 邵一鸣 曾毅 《中国病毒学》 CSCD 1998年第3期226-231,共6页

对１９９２～１９９４年间１６个云南ＨＩＶ１株膜蛋白基因Ｖ３区进行了ＤＮＡ序列测定，经计算机ＤＮＡＳＩＳ及ＰＲＯＳＩＳ软件进行同源性分析，得出其相应的氨基酸共有序列ＹＮＶ３和两组共有序列ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ，计算了... 对１９９２～１９９４年间１６个云南ＨＩＶ１株膜蛋白基因Ｖ３区进行了ＤＮＡ序列测定，经计算机ＤＮＡＳＩＳ及ＰＲＯＳＩＳ软件进行同源性分析，得出其相应的氨基酸共有序列ＹＮＶ３和两组共有序列ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ，计算了ＹＮＶ３中每个氨基酸的保守性。分别将ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ与世界各地的ＨＩＶ１代表株的相应序列进行了同源性比较。结果表明，ＨＩＶ１云南株膜蛋白Ｖ３区氨基酸共有序列ＹＮＶ３中每个氨基酸的平均变异度为７．６６％。两组共有序列ＹＮＶ３Ａ和ＹＮＶ３Ｂ，分别与ＨＩＶ１美欧株及泰国流行株Ｂ亚群相应序列有较高同源性。这一结果提示，在进化上云南瑞丽ＨＩＶ１流行毒株间有非常密切的关系，在这一时期该地区的流行毒株以ＨＩＶ１美欧株、泰国株Ｂ亚群及其衍生株为主。 展开更多

关键词 I型 免疫缺损病毒 膜蛋白V3区 氨基酸序列

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山东省HIV-1分离株env基因C2-V3区序列测定

19

作者 吴虹 傅继华 +2 位作者 王斌 王秋波 张艳丽 《青岛大学医学院学报》 CAS 2000年第3期157-160,共4页

1目的　了解山东省 1型人类免疫缺陷病毒 (HIV- 1)的分子流行病学特征。 2方法　应用套式聚合酶链反应扩增 8例 HIV- 1前病毒基因组的 env基因 C2 - V 3区 ,扩增产物纯化后与 p GEM- T载体连接 ,克隆于大肠杆菌中 ,提取阳性克隆的重组... 1目的　了解山东省 1型人类免疫缺陷病毒 (HIV- 1)的分子流行病学特征。 2方法　应用套式聚合酶链反应扩增 8例 HIV- 1前病毒基因组的 env基因 C2 - V 3区 ,扩增产物纯化后与 p GEM- T载体连接 ,克隆于大肠杆菌中 ,提取阳性克隆的重组质粒进行测序 ,用 PHYL IP软件分析核苷酸及氨基酸序列。 3结果　 8株 HIV - 1毒株V3环顶端的四肽基序均为 GPGR,氨基酸变异不显著 ,各株间基因离散率为 1.0 %～ 5 .2 % ,侧翼区碱基的变异频率明显高于 V3区 ,并发现 1例毒株出现双 V 3环现象。 4结论　山东省的 HIV - 1分离株以 B亚型 HIV- 1毒株为主 ,同时发现的双 V3环变异现象 ,可能是 HIV - 1毒株逃避宿主免疫系统攻击的一种新模式。 展开更多

关键词 山东 HIV-1分离株 ENV基因 C2-V3区 基因序列分析 分子流行病学 艾滋病 套式聚合酶链反应

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HIV1膜蛋白PND编码基因自然变异株的发现

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作者 王斌 傅继华 +3 位作者 吴虹 刘传新 钱冬萌 方荣 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期245-247,共3页

目的　对 1例来自华东地区HIV1分离株 (WWBH7)的前病毒env基因C2 V3区进行序列分析。方法　以HIV1感染者外周血单个核细胞基因组为模板进行套式PCR扩增HIV1env基因C2 V3区片段 ,将此扩增产物插入T Vector,酶切鉴定重组质粒 ,使用ABI73... 目的　对 1例来自华东地区HIV1分离株 (WWBH7)的前病毒env基因C2 V3区进行序列分析。方法　以HIV1感染者外周血单个核细胞基因组为模板进行套式PCR扩增HIV1env基因C2 V3区片段 ,将此扩增产物插入T Vector,酶切鉴定重组质粒 ,使用ABI737自动DNA序列测定仪测定序列并用DNASIS软件进行分析。结果　DNA序列资料显示该毒株属于HIV1B亚型衍生株。但与HIV1B亚型的标准株如SF2株相比 ,该HIV1毒株的env基因V3区下游有 192bp的重复插入突变 ,使得该毒株的膜蛋白PND编码基因呈现双V3区的变异 ,该段DNA序列已登录于GenBank(AF2 2 0 2 45 )。结论　该分离株是 展开更多

关键词 HIV1变异株 自然突变 env基因C2-V3区 DNA序列

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