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抗TIGIT单克隆抗体的制备及活性鉴定
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作者 李国华 程伟华 +2 位作者 康建军 王航辉 姜丽 《医学分子生物学杂志》 CAS 2020年第1期52-56,共5页
目的制备新型抑制剂膜分子TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)的单克隆抗体并鉴定其在心脏移植免疫耐受中的作用.方法用人TIGIT-GST重组蛋白免疫小鼠并制备单克隆抗体,抗体特异性实验检测抗体与TIGIT的结合能力.运用重导向... 目的制备新型抑制剂膜分子TIGIT(T cell immunoglobulin and ITIM domain)的单克隆抗体并鉴定其在心脏移植免疫耐受中的作用.方法用人TIGIT-GST重组蛋白免疫小鼠并制备单克隆抗体,抗体特异性实验检测抗体与TIGIT的结合能力.运用重导向杀伤实验检测TIGIT抗体对NK细胞杀伤P815的作用.通过酶吸收法检测TIGIT活化性抗体对CTLs及CD8 Treg细胞活性的影响.结果成功制备得到一株非活化的抗TIGIT的抗体7M13和一株活化性的抗TIGIT抗体4D9.抗体特异性实验表明抗体7M13和4D9均能与人和小鼠的TIGIT结合.重导向杀伤实验表明该抗体7M13对NK细胞杀伤P815细胞的功能没有显著抑制作用,说明7M13可以与TIGIT结合而不活化TIGIT;而4D9则可以显著抑制NK细胞的杀伤功能.从37例心脏移植患者中分离CTLs及CD8 Treg,采用TIGIT活化性抗体处理对细胞生存能力无显著影响,但可明显抑制CTLs的增殖能力,而对CD8 Treg的增殖能力无显著影响.结论分别成功获得非活化的抗TIGIT抗体7M13和活化性的抗TIGIT抗体4D9,并且4D9可显著抑制NK细胞的杀伤功能. 展开更多
关键词 心脏移植 TIGHT (T cell IMMUNOGLOBULIN and ITIM domain) 单克隆抗体 NK细胞
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TIG-Fc真核表达载体的构建及其对自然杀伤细胞功能的影响
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作者 李国华 高锦伟 +2 位作者 周希胜 王霞 程伟华 《生物技术进展》 2020年第1期90-96,共7页
T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif(ITIM)domain,TIGIT]是一种新型的免疫抑制性受体,在机体的免疫调节网络中扮演着重要角色。为了进一步探究... T细胞免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制性基序结构域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif(ITIM)domain,TIGIT]是一种新型的免疫抑制性受体,在机体的免疫调节网络中扮演着重要角色。为了进一步探究TIGIT对自然杀伤(natural killer,NK)细胞的免疫调节功能,构建了融合蛋白TIGIT胞外段(即TIGIT第1~135位氨基酸,以保留功能结构域Ig V区,此胞外段简称为TIG)-人免疫球蛋白G3(immunoglobulin G3,Ig G3)Fc段的真核表达载体,并对TIG-Fc融合蛋白的表达及其对NK-92细胞功能的影响进行了初步研究。利用分子生物学方法,将携带人TIG与人Ig G3 Fc段的基因融合,然后插入真核表达载体pc DNA3.1(-)中,以构建重组质粒pc DNA3.1(-)-TIGFc。随后将重组质粒转染至人胚肾细胞HEK-293T中,通过流式细胞仪和Western blot检测TIG-Fc融合蛋白在293T细胞中的表达;再将重组质粒转染至NK-92细胞中,通过WST-1检测TIG-Fc融合蛋白对NK-92细胞增殖的影响,并利用ELISA法检测TIG-Fc融合蛋白对NK-92细胞分泌IFN-γ的水平的影响。结果成功构建了人TIG与人Ig G3 Fc融合表达的真核表达载体,且TIG-Fc融合蛋白的表达能够显著抑制NK-92细胞的增殖和分泌IFN-γ的能力(P<0.05),为后期TIGIT的功能研究奠定了重要基础。 展开更多
关键词 TIGIT 融合蛋白 真核表达 自然杀伤细胞
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黄土高坡上的阳光跑操——陕北延安职业技术学院附属中学大课间操纪实 被引量:1
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作者 秦海权 颜礼波 《体育教学》 2013年第3期62-63,共2页
漫步校园中,除了能领略到学生活动时的精彩瞬间,不难发现这里还处处洋溢着垒球文化的浓浓气息,橱窗中展示着一张张由学生自己设计的班级徽标作品,这是学生创意与灵感火花碰撞的结晶,展现了一支支班级软式垒球队伍的特色与象征;楼... 漫步校园中,除了能领略到学生活动时的精彩瞬间,不难发现这里还处处洋溢着垒球文化的浓浓气息,橱窗中展示着一张张由学生自己设计的班级徽标作品,这是学生创意与灵感火花碰撞的结晶,展现了一支支班级软式垒球队伍的特色与象征;楼道里白墙上,装裱着一张张由学生用相机记录下的一个个精彩的速影,击球、传球、跑垒……学校的“小渔人报”上,每期都有学生参与软式垒球运动后写下的感受和体会。 展开更多
关键词 职业技术学院 附属中学 黄土高坡 学生活动 纪实 大课 延安 陕北
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浅析“构造法”运用在高中数学解题中的具体策略 被引量:1
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作者 王媛 《数学学习与研究》 2016年第14期129-129,共1页
随着社会不断发展,对人才的要求越来越高.数学是高中学习中的重要学科,要求学生能够利用所学知识,将"未知"问题分析成"已知"条件,要求学生拥有清晰的数学思维,掌握正确学习技巧.高中数学解题难度不断加大,使学生和老师的压力也不断... 随着社会不断发展,对人才的要求越来越高.数学是高中学习中的重要学科,要求学生能够利用所学知识,将"未知"问题分析成"已知"条件,要求学生拥有清晰的数学思维,掌握正确学习技巧.高中数学解题难度不断加大,使学生和老师的压力也不断增加.通过在高中数学解题中运用"构造法",培养学生学习数学的兴趣和信心,建立清晰的解题思路,让学生在高中数学解题中发挥出创造性. 展开更多
关键词 构造法 高中数学 解题 具体策略
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