目的探讨烯醇化酶(Enolase)抑制剂(ENOblock)对大鼠脊髓损伤后调控自噬相关蛋白表达及促进运动功能的影响。方法选取160只雌性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA)自噬抑制剂处理组(3⁃MA组)、脊髓损伤组及ENObloc...目的探讨烯醇化酶(Enolase)抑制剂(ENOblock)对大鼠脊髓损伤后调控自噬相关蛋白表达及促进运动功能的影响。方法选取160只雌性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA)自噬抑制剂处理组(3⁃MA组)、脊髓损伤组及ENOblock处理组(ENOblock组),每组40只。假手术组行背部椎板切除,但不损伤脊髓。3⁃MA组、脊髓损伤组和ENOblock组采用改良Allen法打击装置损伤T8脊髓,建立脊髓损伤模型。3⁃MA组和ENOblock组分别在伤后立即向鼠尾静脉推注3⁃MA(2.5 mg/kg)和ENOblock(100μg/kg)。假手术组和脊髓损伤组向鼠尾静脉推注等剂量的等渗氯化钠溶液。伤后1,3,7,14,21 d采用BBB评分评估各组双下肢运动功能。伤后3 d采用免疫印迹法检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)⁃Ⅱ和LC3⁃Ⅰ比值、自噬效应蛋白(Beclin⁃1)和多泛素结合蛋白(p62)的表达量。伤后7 d采用免疫荧光法检测各组脊髓组织损伤区域LC3⁃Ⅱ和Beclin⁃1的阳性细胞。伤后3 d采用RT⁃PCR检测各组脊髓组织损伤区域Beclin⁃1和Enolase mRNA的表达量。结果与假手术组[各时间点均为(21.0±0.0)分]比较,伤后1,3,7,14,21 d 3⁃MA组[(1.4±1.1)分、(2.4±0.9)分、(3.8±1.8)分、(7.6±1.1)分、(9.0±2.1)分]、脊髓损伤组[(0.8±0.5)分、(1.8±0.9)分、(3.6±0.9)分、(6.2±1.3)分、(8.0±0.7)分]和ENOblock组[(2.0±0.9)分、(2.2±0.8)分、(4.8±1.1)分、(10.6±1.5)分、(13.2±0.8)分]BBB评分降低(P均<0.05);伤后14,21 d ENOblock组BBB评分明显高于脊髓损伤组,伤后21 d 3⁃MA组BBB评分明显高于脊髓损伤组(P均<0.05)。免疫印迹法检测显示,伤后3 d假手术组LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ比值、Beclin⁃1和p62表达量分别为0.46±0.10、0.41±0.03、0.81±0.03,3⁃MA组分别为0.66±0.06、0.69±0.02、0.59±0.05,脊髓损伤组分别为0.85±0.06、1.07±0.03、0.41±0.02,ENOblock组分别为0.68±0.06、0.66±0.08、0.55±0.02。与假手术组比较,脊髓损伤组LC3⁃Ⅱ展开更多
文摘目的探讨烯醇化酶(Enolase)抑制剂(ENOblock)对大鼠脊髓损伤后调控自噬相关蛋白表达及促进运动功能的影响。方法选取160只雌性SD大鼠,按照随机数字表法分为假手术组、3⁃甲基腺嘌呤(3⁃MA)自噬抑制剂处理组(3⁃MA组)、脊髓损伤组及ENOblock处理组(ENOblock组),每组40只。假手术组行背部椎板切除,但不损伤脊髓。3⁃MA组、脊髓损伤组和ENOblock组采用改良Allen法打击装置损伤T8脊髓,建立脊髓损伤模型。3⁃MA组和ENOblock组分别在伤后立即向鼠尾静脉推注3⁃MA(2.5 mg/kg)和ENOblock(100μg/kg)。假手术组和脊髓损伤组向鼠尾静脉推注等剂量的等渗氯化钠溶液。伤后1,3,7,14,21 d采用BBB评分评估各组双下肢运动功能。伤后3 d采用免疫印迹法检测各组微管相关蛋白1轻链3(LC3)⁃Ⅱ和LC3⁃Ⅰ比值、自噬效应蛋白(Beclin⁃1)和多泛素结合蛋白(p62)的表达量。伤后7 d采用免疫荧光法检测各组脊髓组织损伤区域LC3⁃Ⅱ和Beclin⁃1的阳性细胞。伤后3 d采用RT⁃PCR检测各组脊髓组织损伤区域Beclin⁃1和Enolase mRNA的表达量。结果与假手术组[各时间点均为(21.0±0.0)分]比较,伤后1,3,7,14,21 d 3⁃MA组[(1.4±1.1)分、(2.4±0.9)分、(3.8±1.8)分、(7.6±1.1)分、(9.0±2.1)分]、脊髓损伤组[(0.8±0.5)分、(1.8±0.9)分、(3.6±0.9)分、(6.2±1.3)分、(8.0±0.7)分]和ENOblock组[(2.0±0.9)分、(2.2±0.8)分、(4.8±1.1)分、(10.6±1.5)分、(13.2±0.8)分]BBB评分降低(P均<0.05);伤后14,21 d ENOblock组BBB评分明显高于脊髓损伤组,伤后21 d 3⁃MA组BBB评分明显高于脊髓损伤组(P均<0.05)。免疫印迹法检测显示,伤后3 d假手术组LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ比值、Beclin⁃1和p62表达量分别为0.46±0.10、0.41±0.03、0.81±0.03,3⁃MA组分别为0.66±0.06、0.69±0.02、0.59±0.05,脊髓损伤组分别为0.85±0.06、1.07±0.03、0.41±0.02,ENOblock组分别为0.68±0.06、0.66±0.08、0.55±0.02。与假手术组比较,脊髓损伤组LC3⁃Ⅱ
