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依赖利福平结核分枝杆菌相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列研究 被引量：10
1
作者 钟敏 王易伟 +4 位作者 胡频频 包佳玲 钟静 胡忠义 罗永艾 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期83-86,共4页
目的研究临床依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列。方法以罗氏绝对浓度法药敏实验鉴定临床依R菌株(49株)、耐R菌株(54株)和R敏感菌株(30株),用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDSPAGE)法对不同临床菌株及H3... 目的研究临床依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)相关蛋白的氨基酸及其编码基因序列。方法以罗氏绝对浓度法药敏实验鉴定临床依R菌株(49株)、耐R菌株(54株)和R敏感菌株(30株),用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDSPAGE)法对不同临床菌株及H37Rv标准株共计134株菌株的菌体蛋白质图谱进行比较分析,通过QTOF2型毛细管液相色谱电喷雾四极杆飞行时间串联质谱仪(LCESIMSMS)对其差异表达蛋白的氨基酸序列进行鉴定,并用对其蛋白的编码基因进行DNA序列分析。结果不同菌株的SDSPAGE菌体蛋白图谱基本相似。49株依R菌有41株(84%)在含R管中的菌体蛋白图谱有一条相同的高表达蛋白带(相对于标准物分子质量43000的下端),约占总菌体蛋白的30%～50%,H37Rv标准株、28株R敏感菌(28/30)及44株耐R菌(44/54)的含R管和对照管的蛋白图谱相似,且无相应的高表达现象;该高表达蛋白经氨基酸序列鉴定为结核分枝杆菌H37Rv假设蛋白Rv0341,相对分子质量为43894,等电点(PI)5.25,得分183。不同菌株的Rv0341编码基因1440bp扩增片段,经DNA测序分析均未发现突变。结论利福平对Rv0341在依R菌中的表达有上调作用,Rv0341与依R菌相关,可视为依R菌的相关蛋白或标志物;Rv0341与依R菌的毒力及细胞壁的合成是否相关有进一步的研究价值。 展开更多
关键词 分枝杆菌 结核 利福平 蛋白质组 基因
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rRNA扩增直接检测结核分枝杆菌的临床应用价值探讨 被引量：11
2
作者 王易伟 钟敏 胡频频 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期543-544,共2页
关键词 临床应用价值 结核分枝杆菌 RNA扩增 直接检测 早期诊断 抗酸染色 结核病 培养法
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人MIF基因启动子多态性与结核病易感性的关系 被引量：4
3
作者 蹇锐 程小星 +1 位作者 钟敏 王易伟 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期1-3,共3页
为了研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与结核病易感性的关系,分析了肺结核病人和正常人MIF基因启动子多态性。DNA测序分析的结果显示,正常人MIF基因启动子-794区CATT序列重复次数存在明显的差异,5、6和7个拷贝的几率分别是22.2%、44.4%和3... 为了研究巨噬细胞移动抑制因子(MIF)与结核病易感性的关系,分析了肺结核病人和正常人MIF基因启动子多态性。DNA测序分析的结果显示,正常人MIF基因启动子-794区CATT序列重复次数存在明显的差异,5、6和7个拷贝的几率分别是22.2%、44.4%和33.3%。7个肺结核病人中6人有6个拷贝,1人有7个拷贝,出现的频率分别为85.6%和14.3%。对比分析提示,肺结核病人MIF基因启动子区CATT低拷贝数(低于或等于6个)出现的频率明显高于正常人(85.6%比66.6%),可能同结核病的致病相关。 展开更多
关键词 基因多态性 MIF 启动子 结核
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依赖利福平结核分枝杆菌Rv0341天然蛋白的诊断价值 被引量：2
4
作者 王易伟 吴园 +6 位作者 胡频频 钟明 彭建军 杨晓梅 姚永秀 钟敏 毛旭虎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第11期1126-1129,共4页
目的探讨依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)Rv0341天然蛋白检测血清Rv0341抗体,诊断依R菌感染肺结核病的价值。方法典型依R菌经SDS-PAGE、转膜后,获得Rv0341天然蛋白带,采用结核分枝杆菌抗体DIGFA诊断试剂检测血清Rv0341抗体,并考察该方法... 目的探讨依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)Rv0341天然蛋白检测血清Rv0341抗体,诊断依R菌感染肺结核病的价值。方法典型依R菌经SDS-PAGE、转膜后,获得Rv0341天然蛋白带,采用结核分枝杆菌抗体DIGFA诊断试剂检测血清Rv0341抗体,并考察该方法的重复性、特异性及敏感性。结果利用Rv0341天然蛋白检测血清Rv0341抗体,具有良好的批内和批间重复性;血清Rv0341抗体在耐R菌肺结核组和R敏感菌肺结核组的特异性分别为92.3%(24/26)和79.3%(23/29),在依R菌肺结核R治疗组中的敏感性为88.9%(16/18);在培养阴性结核组中,阳性率为23.8%(29/122)。54份阳性结果血清进行重复实验,确认为阳性。结论Rv0341天然蛋白可作为诊断抗原用于依R菌结核病血清学诊断试剂盒的研发,以快速辅助诊断依R菌结核病,特别对菌阴依R菌结核病更有诊断价值。 展开更多
关键词 Rv0341蛋白 DIGFA 依赖利福平结核分枝杆菌 结核病 诊断
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二聚体蝎型探针荧光定量PCR快速检测临床标本结核分枝杆菌DNA 被引量：2
5
作者 王虹 钟敏 +2 位作者 舒朝忠 陈淑惠 尹一兵 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期661-663,666,共4页
目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧... 目的比较二聚体蝎型探针荧光定量PCR与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)的检出率、检测时间等,探讨二聚体蝎型探针荧光定量PCR检测临床标本中结核分枝杆菌DNA(TB-DNA)的实际应用价值。方法以建立的结核二聚体蝎型探针荧光定量PCR方法为基础,对43例结核确诊患者的标本及11例非肺结核患者的痰标本进行检测,并与抗酸染色、L-J培养法、结核分枝杆菌直接试验(MTD)进行比较。结果二聚体蝎型探针荧光定量PCR能快速准确的检测临床标本中的TB-DNA。其标准品浓度在102～106copies/μl时,方法能够保持良好的线性关系(相关系数为0.9994),阳性检出率(100%)显著高于抗酸染色法(16.28%)和培养法(37.21%)的检出率,与MTD试验的检出率(100%)一致。MTD试验检测时间约4～5h,而二聚体蝎型探针FQ-PCR检测约需80min即可得到检测结果,检测费用仅为MTD的1/4。结论二聚体蝎型探针荧光定量PCR用于临床标本结核分枝杆菌DNA的检测具有快速价廉、敏感特异的特点,该方法作为定量检测结核分枝杆菌的分子诊断新途径值得临床推广应用。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 荧光定量PCR 二聚体蝎型探针
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结核分枝杆菌H_(37)Rv株Rv0341编码基因iniB的克隆与表达 被引量：1
6
作者 吴园 钟敏 +3 位作者 王易伟 钟静 胡频频 毛旭虎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期557-559,564,共4页
目的克隆并表达编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因。方法利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-... 目的克隆并表达编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因。方法利用PCR从结核分枝杆菌H37Rv株中扩增iniB基因,克隆于pET-22b(+)原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达,镍离子亲和层析柱纯化后,通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定目的蛋白的表达及反应原性。结果克隆并表达了iniB基因,表达的蛋白相对分子质量约43000,诱导2h表达量较高,约为25%。目的蛋白主要以包涵体形式存在于超声沉淀中,纯化后蛋白纯度可达98%以上。经Western blot检测,纯化蛋白与依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)肺结核患者血清呈现强阳性反应,而与非依R菌肺结核患者血清不反应。结论已成功克隆并表达了编码结核分枝杆菌H37Rv株Rv0341蛋白的iniB基因,表达的重组蛋白具有反应原性及特异性,为依R菌结核病临床血清学快速诊断方法的建立及试剂盒的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 H37Rv株 Rv0341蛋白 iniB基因 克隆 表达
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细菌L型依赖利福平结核分枝杆菌的多种形态和动态变化 被引量：2
7
作者 钟敏 胡忠义 +3 位作者 王易伟 钟明 方启雪 王洪海 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第10期630-630,共1页
关键词 细菌L型 依赖利福平结核分枝杆菌 细菌学检验 细菌培养 细菌形态
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