1株乳源蜡样芽胞杆菌的分离鉴定及致病性分析 被引量：7

1

作者 易华山 马鲜平 +9 位作者 赵瑶 廖启超 朱飘 张云珍 王艳 邓艳红 郑凯 陈忠琼 梁望旺 谢远兵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1491-1500,共10页

无菌采集重庆市某奶牛场乳房炎患牛奶样,利用MYP选择培养基无菌分离培养得到1株疑似蜡样芽孢杆菌的纯培养物,利用全自动微生物鉴定系统、16S rRNA、KB法药敏试验、MLST分型和PCR扩增hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、cytK、entFM、... 无菌采集重庆市某奶牛场乳房炎患牛奶样,利用MYP选择培养基无菌分离培养得到1株疑似蜡样芽孢杆菌的纯培养物,利用全自动微生物鉴定系统、16S rRNA、KB法药敏试验、MLST分型和PCR扩增hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、cytK、entFM、Ces毒力基因及测序,并通过测定小鼠LD(50),血清ALT、AST、LDH和ALP活性,肝脏组织SOD、MDA、GSH-Px水平及病变组织病理组织学观察进行分析鉴定。结果显示,分离株在甘露醇卵黄多黏菌素琼脂(MYP)平板上,形成周围有白色至淡粉红色的菌落,在蜡样芽孢杆菌显色培养基上形成具有白色光晕的蓝色菌落,革兰染色阳性。全自动微生物鉴定系统鉴定为蜡样芽孢杆菌,鉴定可信度为99.9%,典型度为132(典型)。16S rRNA序列与与韩国(FJ982661.1)、美国(NZ_JURK01000037.1)、斯里兰卡(MG827268.1)、马来西亚(MN093796.1)株同源性为100%,同美国奶源分离株(NZ_ASPZ01000016.1)亲缘关系最近。药敏试验结果表明,分离株对青霉素G、红霉素、苯唑西林、四环素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星等极度敏感,对大观霉素、万古霉素、多黏菌素B耐药。该菌株MLST基因型为ST476,与ST1813亲缘关系最近,对扩增相关毒力基因PCR产物测序结果表明,nheA基因片段同日本分离炭疽杆菌(AP019731.1)毒力基因同源性高达96.91%,entFM基因片段同美国蜡样芽孢杆菌(CP001186.1)同源性为97.45%,nheB基因片段同挪威蜡样芽孢杆菌(CP001283.1)同源性高达95.48%。对小鼠的LD(50)为1.44×10^(10)CFU。ALT、AST、LDH、ALP及MDA显著升高,SOD、GSH-Px含量明显降低。显微观察显示对照组小鼠肝小叶结构正常,攻毒组可见肝脏肿大、充血、质地脆弱、肝索排列紊乱,肝细胞变性坏死等肝损伤特征。本试验从奶牛乳房炎奶样中分离鉴定出1株耐多黏菌素、万古霉素及大观霉素的肠毒素基因型蜡样芽孢杆菌,命名为蜡样芽孢杆菌2018CQ-CMM01。该分离菌� 展开更多

关键词 蜡样芽胞杆菌 16S rRNA 耐药性 多位点序列分型

原文传递

基于NS4蛋白的蓝舌病病毒间接ELISA抗体检测方法的建立及初步应用 被引量：5

2

作者 易华山 赵瑶 +13 位作者 马鲜平 李欢 夏宇 朱文青 刘倩如 陈思倩 曹慧贞 姚婷 高丽旭 张金阳 杨发挥 魏晓蓉 李前勇 谢远兵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期3133-3140,共8页

旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主... 旨在建立蓝舌病病毒(BTV)血清学ELISA抗体检测方法,本研究以原核表达并纯化的BTV NS4重组蛋白为包被抗原,通过反应条件优化,建立了一种BTV重组NS4蛋白的间接ELISA抗体检测方法。SDS-PAGE结果显示,获得大小约52 ku的NS4重组融合蛋白,主要在上清中存在,Western blot显示,纯化后的重组蛋白具有良好的抗原性。通过方阵试验进行了ELISA反应条件优化,确定了重组蛋白抗原最佳包被量为3.0μg·孔-1;血清最佳稀释倍数为1∶200,酶标二抗最佳工作浓度为1∶4000,临界值分别为0.29和0.35。上述以NS4蛋白作为包被抗原建立的BTV抗体间接ELISA方法检测敏感性可达1∶1600;批内和批间重复性变异系数均小于10%;检测76份重庆地区牛群血清样品,阳性符合率为98%,阴性符合率为100%。本研究建立的间接ELISA方法为临床BTV血清抗体检测及BTV血清流行病学调查奠定了基础。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒 NS 4基因 原核表达 间接ELISA

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一株乳源蜡样芽孢杆菌肠毒素基因克隆与序列分析 被引量：4

3

作者 陈玉娟 赵瑶 +5 位作者 马鲜平 高丽旭 姚婷 刘倩如 谢远兵 易华山 《中国奶牛》 2020年第11期1-7,共7页

为研究患有耐药性奶牛乳房炎的致病菌毒力基因,本研究对从乳房炎患牛乳中分离鉴定的一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)2018CQ-CMM01株肠毒素基因(Enterotoxin,Ent)进行了克隆与序列分析。采用PCR方法扩增临床分离株Ent基因片段,结果表... 为研究患有耐药性奶牛乳房炎的致病菌毒力基因,本研究对从乳房炎患牛乳中分离鉴定的一株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)2018CQ-CMM01株肠毒素基因(Enterotoxin,Ent)进行了克隆与序列分析。采用PCR方法扩增临床分离株Ent基因片段,结果表明克隆基因全长1 098bp,可编码349个氨基酸;经氨基酸序列分析,发现该蛋白质为碱性的疏水性蛋白,稳定性弱,无信号肽结构,有5个跨膜区域;二级结构预测发现,延伸链为该蛋白的主要二级结构元素。核苷酸序列的同源性分析表明,与其他几株肠毒素菌株相比,本研究中克隆的Ent基因(GeneBank登录号:MT814304)与B. cereus克隆Pnc9肠毒素FM样基因部分序列(EF453659.1)相似度最高,为96.45%;Ent基因系统进化树分析发现,本研究中Ent基因与中国菌株CP040336.1的同源性最高,与巴基斯坦B. cereus标准株CP026375.1,泰国株EF453659.1、EF453660.1等处于不同进化分支,说明该Ent基因与中国菌株CP040336.1遗传距离最近;同时在Ent基因的ORF中存在一个141bp的小ORFs编码区,结构预测发现,该编码区编码杆菌通道蛋白相关的内肽酶,可能是毒力基因调控因子。 展开更多

关键词 奶牛乳房炎 蜡样芽孢杆菌 肠毒素 基因克隆 序列分析

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永川区畜禽粪污资源化利用与推广 被引量：2

4

作者 谢远兵 刘波 《中国畜牧业》 2020年第14期58-59,共2页

近年来,畜禽养殖业在不断地向规模化、集约化发展,为满足人类对畜禽产品的需求和消费,改善人民生活水平,畜禽养殖业发挥着重要作用。但随着国家对生态文明建设的不断深入,厘清畜禽养殖业健康可持续发展与畜禽粪污处理之间的关系显得越... 近年来,畜禽养殖业在不断地向规模化、集约化发展,为满足人类对畜禽产品的需求和消费,改善人民生活水平,畜禽养殖业发挥着重要作用。但随着国家对生态文明建设的不断深入,厘清畜禽养殖业健康可持续发展与畜禽粪污处理之间的关系显得越来越重要,本文通过梳理重庆市永川区的畜禽养殖粪污处理实践经验,集成了畜禽养殖业粪污资源化利用几种典型模式,并加以推广应用,供同行们参考。 展开更多

关键词 畜禽产品 重庆市永川区 生态文明建设 粪污处理 粪污资源化利用 畜禽养殖 畜禽粪污 集约化发展

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蓝舌病病毒非结构蛋白研究进展 被引量：1

5

作者 赵瑶 易华山 +2 位作者 马鲜平 李前勇 谢远兵 《中国奶牛》 2020年第10期45-49,共5页

蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)感染动物宿主细胞后,病毒非结构蛋白进行表达而参与病毒基因的复制、基因组的组装及病毒粒子的释放。BTV基因组至少编码NSP1、NSP2、NSP3/NS3a和NSP44种非结构蛋白(non-structural proteins,NSPs),这些... 蓝舌病病毒(Bluetongue virus,BTV)感染动物宿主细胞后,病毒非结构蛋白进行表达而参与病毒基因的复制、基因组的组装及病毒粒子的释放。BTV基因组至少编码NSP1、NSP2、NSP3/NS3a和NSP44种非结构蛋白(non-structural proteins,NSPs),这些NSPs在BTV基因组的复制、组装及拮抗宿主细胞干扰素免疫应答等方面发挥重要的作用。本文就BTV主要结构蛋白、非结构蛋白最新的研究进展进行了综述,为BTV新型疫苗的研发、病毒诊断及病毒基因组复制及组装机制提供基础。 展开更多

关键词 蓝舌病病毒 结构蛋白 非结构蛋白

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一株乳源松鼠葡萄球菌ExhC基因的克隆及序列分析 被引量：1

6

作者 林俊泓 王让 +4 位作者 陈玉娟 赵瑶 马鲜平 谢远兵 易华山 《中国奶牛》 2021年第3期24-29,共6页

松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri,S.sciuri)是引起奶牛乳房炎(Cow Mastitis)的病原菌之一,其主要致病因子是该菌产生的脱皮毒素C(Exfoliative Toxin C,ExhC)。为了深入了解该基因的分子特征,本试验对从乳房炎患牛牛乳中分离的一株... 松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri,S.sciuri)是引起奶牛乳房炎(Cow Mastitis)的病原菌之一,其主要致病因子是该菌产生的脱皮毒素C(Exfoliative Toxin C,ExhC)。为了深入了解该基因的分子特征,本试验对从乳房炎患牛牛乳中分离的一株松鼠葡萄球菌ExhC基因(Genbank登录号:MT845354)进行了克隆及序列分析。按GenBank收录的ExhC基因设计并合成引物,利用PCR对ExhC基因进行扩增,并对扩增后的ExhC基因进行测序及分析。结果表明,松鼠葡萄球菌ExhC基因的开放阅读框序列长度为837bp,共编码278个氨基酸。通过Blast模块对ExhC基因进行同源性分析,得到5株相似序列,与ExhC基因序列相比同源性均为99.04%。系统进化树图指示该基因与其余五株相似序列属于不同的分支,遗传距离较远。利用TMHMM对松鼠葡萄球菌ExhC基因837bp序列跨膜区进行预测,结果显示ExhC蛋白的第1~277位氨基酸在细胞膜外,5~25位氨基酸所在位置为跨膜区。通过ExhC氨基酸序列分析和ExhC蛋白二级结构、三级结构预测,推断第97位氨基酸插入Asn以及其他位点氨基酸的突变可能会导致松鼠葡萄球菌功能区变化和毒株毒力的相对变化,这将给松鼠葡萄球菌致病机理的研究奠定基础。 展开更多

关键词 松鼠葡萄球菌 ExhC基因 核酸及蛋白质序列分析

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规模化种猪场猪伪狂犬病净化 被引量：1

7

作者 谢远兵 宋其林 +1 位作者 刘波 文俸勇 《兽医导刊》 2020年第21期18-18,共1页

目前全国各地正在实施无非洲猪瘟小区项目建设,笔者就以近几年指导永川区标范沃尔多种猪场实施猪伪狂犬病净化,通过国家评估认证达到猪伪狂犬病净化的经验予以总结,供同行们参考。

关键词 种猪场 伪狂犬病 净化

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兽医工作三项制度的实践与思考 被引量：1

8

作者 伍瑜 《畜牧兽医科技信息》 2018年第11期23-23,共1页

为加强兽医工作管理考核,提高工作成效,2015年初,重庆市农业委员会制定出台了兽医工作三项制度,永川区从当年7月1日开始在全区全面推行,经3年实施,取得了良好效果。1兽医工作三项制度的内容兽医工作三项制度包括“以监促防、以检计酬”... 为加强兽医工作管理考核,提高工作成效,2015年初,重庆市农业委员会制定出台了兽医工作三项制度,永川区从当年7月1日开始在全区全面推行,经3年实施,取得了良好效果。1兽医工作三项制度的内容兽医工作三项制度包括“以监促防、以检计酬”的兽医工作考核制度、基于监（检）测或风险评估的产地检疫制度和规模饲养场动物疫病自行检测制度。2兽医工作三项制度的推行情况与效果. 展开更多

关键词 产地检疫 监(检)测 风险评估 三项制度

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永川区牛羊“两病”防控效果初析 被引量：1

9

作者 伍瑜 《中国畜牧业》 2018年第9期73-73,共1页

布鲁氏菌病与结核病（简称“两病”）属人畜共患病,对畜牧业生产和人类身体健康危害极大。重庆市永川区通过全面推广实施牛羊“两病”综合防控技术推广项目,取得了良好成效。现归纳总结出经验和体会,供同行参考。一、项目实施主要情况... 布鲁氏菌病与结核病（简称“两病”）属人畜共患病,对畜牧业生产和人类身体健康危害极大。重庆市永川区通过全面推广实施牛羊“两病”综合防控技术推广项目,取得了良好成效。现归纳总结出经验和体会,供同行参考。一、项目实施主要情况与效果1.永川区牛羊饲养情况与“两病”流行病学调查。通过全面普查,截至2016年年底,永川区存栏牛12296头（其中奶牛500头）、存栏羊13500只,全部登记造册并建立档案。 展开更多

关键词 综合防控 牛羊 技术推广项目 流行病学调查 人畜共患病 布鲁氏菌病 畜牧业生产 健康危害

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永川区畜禽污染源普查结果分析与运用

10

作者 周培香 《畜牧业环境》 2021年第17期14-14,共1页

历时二年,全面完成各项涉及畜禽污染源相关数据的普查与结果应用。掌握了永川区畜禽养殖业污染源数量、分布、主要污染物产生量及其排放量、排放去向,为有效治理污染提供科学依据。

关键词 畜禽 主要污染物 去向 治理

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永川区生猪养殖前景分析

11

作者 杨娥 《中国畜禽种业》 2018年第7期21-21,共1页

永川区位于重庆市西南部,生猪产量和产值一直位列重庆市(区县)前茅。以提高生猪产品质量和效益为中心,推进生猪产业化进程,促进生猪产业迅猛发展,成效显著。

关键词 永川区 生猪养殖 前景分析

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生猪散养户复养技术探析

12

作者 刘波 《中国畜牧业》 2020年第10期82-82,共1页

在我国农村地区有着“杀过年猪、吃杀猪汤、制猪腊肉”的传统,屠宰的猪都是自家散养或周边生猪散养户的猪。受非洲猪瘟疫情影响,很多生猪散养户养殖失败,导致我国生猪存栏量、出栏量显著下降。我国生猪散养户规模庞大,要想快速提高生猪... 在我国农村地区有着“杀过年猪、吃杀猪汤、制猪腊肉”的传统,屠宰的猪都是自家散养或周边生猪散养户的猪。受非洲猪瘟疫情影响,很多生猪散养户养殖失败,导致我国生猪存栏量、出栏量显著下降。我国生猪散养户规模庞大,要想快速提高生猪存栏量,生猪散养户和中小规模户有着大型规模养殖场不可替代的作用。一、准备工作清洁圈舍卫生,使圈舍尽量无灰尘。用消毒剂全面无死角消毒,消毒区域包括圈舍、相关走道等,消毒剂可用漂白粉、生石灰、复合酚、月苄三甲氯铵溶液、复方戊二醛溶液、次氯酸钠溶液等市面上常见消毒剂。消毒剂严格按照消毒剂使用说明配制,如次氯酸钠消毒液有效氯不少于0.05%。消毒人员消毒时注意保护口、鼻、眼,以免消毒不慎而中毒。 展开更多

关键词 圈舍卫生 非洲猪瘟 生猪散养 复合酚 规模养殖场 生猪存栏量 次氯酸钠消毒液 消毒剂

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重庆市永川区养兔业现状和发展趋势

13

作者 杨娥 《中国畜牧兽医文摘》 2018年第4期58-58,共1页

重庆市永川区气候适宜,饲草资源丰富,肉兔养殖条件好。近几年随着农村产业结构的调整优化,肉兔产业逐步发展成了永川区农村经济发展的亮点和农民增收的主渠道之一,发展成效显著。1肉兔发展情况2017年全区出栏肉兔489万只,同比增15.6%,2... 重庆市永川区气候适宜,饲草资源丰富,肉兔养殖条件好。近几年随着农村产业结构的调整优化,肉兔产业逐步发展成了永川区农村经济发展的亮点和农民增收的主渠道之一,发展成效显著。1肉兔发展情况2017年全区出栏肉兔489万只,同比增15.6%,2018年预计出栏肉兔达500万,产值达3亿元。目前永川区肉兔养殖主要分布在板桥、临江、金龙、吉安、宝峰、何埂等镇街。主要饲养有齐卡、新西兰、加利福尼亚等优良品种。 展开更多

关键词 重庆市 发展趋势 养兔业 农村产业结构 农村经济发展 养殖条件 加利福尼亚 资源丰富

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