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基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA-PCR扩增体系
1
作者
谢晴
曹伟
+4 位作者
伍阳
邓仕槐
胡小梅
段莎丽
叶红
《农业环境科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期2018-2022,共5页
用SBR反应器处理畜禽废水,提取其中好氧活性污泥总DNA,比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响,同时选择4个因素(DNA模板,Mg2+,dNTP,引物)对16SrDNA-PCR反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明,反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振...
用SBR反应器处理畜禽废水,提取其中好氧活性污泥总DNA,比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响,同时选择4个因素(DNA模板,Mg2+,dNTP,引物)对16SrDNA-PCR反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明,反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振荡法和摇床振荡法,可不经纯化直接扩增;DNA浓度对PCR结果影响最大,Mg2+和dNTP浓度的影响次之且程度相同,引物浓度影响最小;最佳PCR扩增体系(25μL)的组成为:模板DNA0.32μg,dNTP200μmol·L-1,Mg2+1.5mmol·L-1,引物1.0μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.2U,且最适退火温度为56.5℃。
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关键词
SBR
冻融
PCR扩增
正交设计
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职称材料
题名
基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA-PCR扩增体系
1
作者
谢晴
曹伟
伍阳
邓仕槐
胡小梅
段莎丽
叶红
机构
四川农业大学资源环境学院环境科学与工程系
重庆市
垫江县
环保局
出处
《农业环境科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期2018-2022,共5页
基金
四川农业大学青年科技创新基金(2006a057)
四川省公益性重大项目(2007NGY006)
文摘
用SBR反应器处理畜禽废水,提取其中好氧活性污泥总DNA,比较3种物理破壁方法对DNA质量的影响,同时选择4个因素(DNA模板,Mg2+,dNTP,引物)对16SrDNA-PCR反应体系进行正交优化,并确定最适退火温度。结果表明,反复冻融法的DNA纯度大于玻珠振荡法和摇床振荡法,可不经纯化直接扩增;DNA浓度对PCR结果影响最大,Mg2+和dNTP浓度的影响次之且程度相同,引物浓度影响最小;最佳PCR扩增体系(25μL)的组成为:模板DNA0.32μg,dNTP200μmol·L-1,Mg2+1.5mmol·L-1,引物1.0μmol·L-1,TaqDNA聚合酶0.2U,且最适退火温度为56.5℃。
关键词
SBR
冻融
PCR扩增
正交设计
Keywords
SBR
freeze-thawing
PCR amplification
orthogonal design
分类号
Q5-33 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于正交设计的畜禽废水处理中活性污泥DNA的16S rDNA-PCR扩增体系
谢晴
曹伟
伍阳
邓仕槐
胡小梅
段莎丽
叶红
《农业环境科学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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