传统分离培养结合DGGE法检测榨菜腌制过程的细菌多样性 被引量：36

1

作者 李正国 付晓红 +3 位作者 邓伟 杨迎伍 崔英双 赵平 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期371-376,共6页

采用传统分离培养和基于16S rRNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(Denaturing gra-dient gel electrophoresis,DGGE)的方法,分析榨菜腌制过程中不同时期的可培养细菌数量、多样性及其群落结构。结果表明,用传统分离与分子鉴定方法获得7... 采用传统分离培养和基于16S rRNA作为分子标记的变性梯度凝胶电泳(Denaturing gra-dient gel electrophoresis,DGGE)的方法,分析榨菜腌制过程中不同时期的可培养细菌数量、多样性及其群落结构。结果表明,用传统分离与分子鉴定方法获得7个属的细菌类群,其中乳杆菌属(Acidobacterium)是优势菌群,明串珠菌属(Leuconostoc)是次优势菌群。对通过DGGE方法得到的11条16S rRNA优势条带序列进行了比对,结果表明明串珠菌属(Leuconostoc)的丰度最高,是腌制过程中主要的优势菌群,乳球菌(Lactococcus lactis)是次优势菌。传统分离法与DGGE法结合能够更有效的分析榨菜腌制过程中微生物的多样性及其动态变化,获得更全面的微生物多样性信息。 展开更多

关键词 榨菜(Brassica JUNCEA coss var.tsatsai) 16S rRNA 传统分离培养 变性梯度凝胶电泳(DGGE) 群落多样性

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采后钙处理对奉节脐橙褐变及膜脂过氧化作用的影响 被引量：12

2

作者 袁陵 李正国 +3 位作者 杨迎伍 樊晶 王心宇 邓伟 《热带作物学报》 CSCD 2010年第2期207-211,共5页

奉节脐橙(Citrus sinensis Osbeck)是重庆鲜食柑橘的重要品种之一,但容易发生果皮褐变,严重影响生产的经济效益。为了降低脐橙果皮褐变的发生,提高果实的耐贮性和商品价值,本研究以奉节脐橙果实为材料,分别用1%CaCl2、2%CaCl2、1%Ca(NO... 奉节脐橙(Citrus sinensis Osbeck)是重庆鲜食柑橘的重要品种之一,但容易发生果皮褐变,严重影响生产的经济效益。为了降低脐橙果皮褐变的发生,提高果实的耐贮性和商品价值,本研究以奉节脐橙果实为材料,分别用1%CaCl2、2%CaCl2、1%Ca(NO3)2、2%Ca(NO3)2配合施保功、2,4-D处理,分析其对果皮褐变及膜脂过氧化作用相关生理指标的影响。结果表明:钙处理能有效降低褐变指数、相对电导率和丙二醛含量,提高膜脂过氧化保护酶活性,从而降低果皮褐变率;氯化钙处理效果优于硝酸钙处理。1%CaCl2浸果处理的效果最好,贮藏110d后,褐变指数比对照降低了27.5%。 展开更多

关键词 脐橙 钙处理 果皮褐变 膜保护性酶 膜脂过氧化作用

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甜橙柠檬酸合酶基因的克隆及其表达分析 被引量：8

3

作者 王滕旭 李正国 +1 位作者 杨迎伍 邓伟 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第10期65-69,共5页

柠檬酸合酶与柠檬酸的积累密切相关。为了研究该基因的功能及其调控,通过设计特异性引物对甜橙柠檬酸合酶基因进行了克隆,采用半定量PCR法对哈姆林叶片、果肉和果皮中该基因的表达模式进行检测。克隆得到甜橙柠檬酸合酶基因的cDNA序列,... 柠檬酸合酶与柠檬酸的积累密切相关。为了研究该基因的功能及其调控,通过设计特异性引物对甜橙柠檬酸合酶基因进行了克隆,采用半定量PCR法对哈姆林叶片、果肉和果皮中该基因的表达模式进行检测。克隆得到甜橙柠檬酸合酶基因的cDNA序列,全长1535bp,ORF区含471个氨基酸残基,序列比对显示,哈姆林甜橙柠檬酸合酶基因与其他植物的该基因高度同源。半定量PCR结果显示果肉和果皮中柠檬酸合酶基因在各个时期的表达基本没有变化,而叶片中其表达水平随果实发育成熟不断降低,与果实中柠檬酸含量变化趋势相同。说明叶片中柠檬酸合酶基因表达与果实酸含量正相关。 展开更多

关键词 甜橙 柠檬酸合酶 基因 克隆 表达

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脐橙CsNAC基因的克隆及其在果实贮藏过程中的表达分析 被引量：7

4

作者 樊晶 李正国 +2 位作者 高雪 杨迎伍 邓伟 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1803-1808,共6页

从脐橙(Citrussinensis Osbeck)果皮褐变相关基因的cDNA抑制差减文库中,筛选了一个与NAC基因家族同源的EST序列,通过RACE技术成功克隆了CsNAC基因全长cDNA序列共1203bp,并对其进行了序列分析。结果表明,CsNAC包含一个918bp的开放阅读框(... 从脐橙(Citrussinensis Osbeck)果皮褐变相关基因的cDNA抑制差减文库中,筛选了一个与NAC基因家族同源的EST序列,通过RACE技术成功克隆了CsNAC基因全长cDNA序列共1203bp,并对其进行了序列分析。结果表明,CsNAC包含一个918bp的开放阅读框(ORF),编码305个氨基酸,预测的蛋白质分子量为35.2kD,等电点为6.72;CsNAC蛋白N端具有一个高度保守的NAC结构域;进化树分析表明CsNAC属于NAC蛋白家族的ATAF亚家族,可能参与胁迫反应。荧光定量PCR表达分析结果表明,CsNAC在果实贮藏过程中,随着果皮褐变的发生,与对照相比褐变果皮中的表达水平明显增强。说明CsNAC基因与脐橙果实的果皮褐变具有密切关系。 展开更多

关键词 柑橘 克隆 表达 CsNAC

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哈姆林甜橙蔗糖合酶Ⅰ和酸性转化酶基因表达与果实糖积累的关系 被引量：5

5

作者 王滕旭 李正国 +1 位作者 杨迎伍 邓伟 《热带作物学报》 CSCD 2010年第5期745-749,共5页

蔗糖合酶(Sucrose synthase,SS)与酸性转化酶(Acid invertase,AI)是甜橙糖代谢过程中的两个关键酶,SS催化尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖和果糖合成蔗糖的可逆反应,AI则不可逆的催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖,它们在甜橙糖代谢过程中起着重要作... 蔗糖合酶(Sucrose synthase,SS)与酸性转化酶(Acid invertase,AI)是甜橙糖代谢过程中的两个关键酶,SS催化尿嘧啶核苷二磷酸葡萄糖和果糖合成蔗糖的可逆反应,AI则不可逆的催化蔗糖分解为果糖和葡萄糖,它们在甜橙糖代谢过程中起着重要作用。笔者以哈姆林甜橙品种为试验材料,采用半定量RT-PCR法,对4个时期哈姆林叶片中的SSI基因和AI基因的表达进行了分析。结果表明,4个时期哈姆林叶片中均可检测到SSI基因和AI基因在转录水平上的表达,但表达量存在差异。SSI基因在果实发育过程中表达量呈"低-高-低-高"趋势。AI基因在哈姆林果实发育成熟过程中的表达逐渐减弱,与果实糖累积呈负相关。 展开更多

关键词 哈姆林 蔗糖合酶I基因 酸性转化酶基因 半定量RT-PCR 糖代谢

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玉米AFB2基因的克隆、表达及功能分析 被引量：4

6

作者 杨春文 唐宁 +1 位作者 林东波 李正国 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1068-1072,共5页

通过生物信息学分析从玉米基因组数据库中筛选出一条全长cDNA序列,命名为ZmAFB2(GenBank登录号为NM_001143136.1)。通过特异引物克隆该基因,ZmAFB2全长1 722 bp,编码574个氨基酸。N端含有F-box结构域,属于F-box基因家族,与水稻Os04g3246... 通过生物信息学分析从玉米基因组数据库中筛选出一条全长cDNA序列,命名为ZmAFB2(GenBank登录号为NM_001143136.1)。通过特异引物克隆该基因,ZmAFB2全长1 722 bp,编码574个氨基酸。N端含有F-box结构域,属于F-box基因家族,与水稻Os04g32460.1同源性很高,属于AFB2亚家族。qRT-PCR结果表明,该基因在玉米的根、茎和叶中均有表达,但在茎中的表达量最强。为进一步研究玉米ZmAFB2基因的功能,构建玉米ZmAFB2基因的超表达载体pCAMBIA-35S-AFB2,并通过农杆菌介导法对番茄进行遗传转化,共获得3个转基因株系,对转基因番茄表型进行鉴定,结果发现,叶片稍厚颜色暗绿,果实较小,无籽或少籽,房室发育不健全,因此,推测AFB2可能参与植物生长发育与调控,这为进一步阐明AFB2基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 ZmAFB2 生长素受体 克隆 超表达 QRT-PCR

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榨菜人工接种发酵研究 被引量：2

7

作者 付晓红 李正国 +1 位作者 彭家和 何凤田 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第10期6072-6074,共3页

[目的]为明确榨菜后熟机制、质量控制和工艺改进提供理论依据。[方法]通过人工接种发酵菌株试验,采用感官评定和理化指标比较方法确定榨菜腌制过程中较为理想的发酵剂组合。[结果]不同因素对榨菜产品品质影响顺序为:菌种比例>含盐量&... [目的]为明确榨菜后熟机制、质量控制和工艺改进提供理论依据。[方法]通过人工接种发酵菌株试验,采用感官评定和理化指标比较方法确定榨菜腌制过程中较为理想的发酵剂组合。[结果]不同因素对榨菜产品品质影响顺序为:菌种比例>含盐量>接种量。榨菜腌制过程中较为理想的发酵剂组合:接种量4%,菌种比例为肠膜明串珠菌∶植物乳杆菌∶乳酸乳杆菌3∶1∶1,含盐量6%。该发酵条件在保证榨菜产品品质的同时,有效降低了榨菜生产过程中亚硝酸盐的含量,并使榨菜发酵周期大大缩短。[结论]该研究为榨菜微生物发酵剂的研制提供了重要的参考。 展开更多

关键词 榨菜 发酵 人工接种 微生物发酵剂

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番茄Sly-miR167a启动子的分离及功能分析 被引量：2

8

作者 苗青 李正国 +2 位作者 杨迎伍 李季 胡国建 《热带作物学报》 CSCD 2011年第4期653-657,共5页

利用PCR技术从番茄基因组DNA中扩增了Sly-miR167a转录起始点上游2 134 bp的片段,并将其与GUS基因融合构建植物表达载体,转化番茄,研究番茄Sly-miR167a启动子的时空表达特异性;并利用外源激素处理,研究其对激素的响应特性。启动子序列分... 利用PCR技术从番茄基因组DNA中扩增了Sly-miR167a转录起始点上游2 134 bp的片段,并将其与GUS基因融合构建植物表达载体,转化番茄,研究番茄Sly-miR167a启动子的时空表达特异性;并利用外源激素处理,研究其对激素的响应特性。启动子序列分析结果表明,Sly-miR167a启动子片段含有启动子调控的保守序列以及生长素、乙烯和赤霉素等响应元件。根据GUS染色结果推测,Sly-miR167a可能在番茄的各个组织中均有表达,并且在叶片、茎、开花前2d、开花当天、果实幼果期、绿熟期和破色期表达强烈。通过外源激素处理后,GUS基因的表达均有显著的上调。说明Sly-miR167a启动子的表达具有时间特异性,并且受外源激素的调控。 展开更多

关键词 Sly—miR167a 启动子 GUS 番茄

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植物中XRN家族的研究进展 被引量：1

9

作者 刘俊江 李正国 杨迎伍 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期483-490,共8页

XRN家族是一类5'-3'核酸外切酶家族,主要参与rRNA的成熟加工以及特异mRNA的降解过程,在动物、植物以及微生物的生长发育过程中起着重要的作用。对XRN家族在植物生长发育过程中的功能进行了综述,XRN家族在植物中主要参与rRNA加... XRN家族是一类5'-3'核酸外切酶家族,主要参与rRNA的成熟加工以及特异mRNA的降解过程,在动物、植物以及微生物的生长发育过程中起着重要的作用。对XRN家族在植物生长发育过程中的功能进行了综述,XRN家族在植物中主要参与rRNA加工过程、miRNA途径、外源mRNA降解过程以及乙烯信号通路。 展开更多

关键词 XRN家族 rRNA加工 MRNA降解 PTGS 乙烯信号通路

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番茄CYP71基因的克隆及其功能的初步分析

10

作者 郝彦伟 李正国 +2 位作者 杨迎伍 邓伟 苏丽艳 《热带作物学报》 CSCD 2009年第12期1813-1817,共5页

分析番茄的EST数据库,获得一条在番茄果实中表达的EST序列CYP71,通过RT-PCR分析表明,该基因在番茄的叶、花、果实中均有表达,其中幼果中表达最强,并受到乙烯的负调控,推测可能与果实的发育成熟相关。进而通过RACE(rapid amplification o... 分析番茄的EST数据库,获得一条在番茄果实中表达的EST序列CYP71,通过RT-PCR分析表明,该基因在番茄的叶、花、果实中均有表达,其中幼果中表达最强,并受到乙烯的负调控,推测可能与果实的发育成熟相关。进而通过RACE(rapid amplification of cDNA ends)的方法获得了全长为1637bp的番茄CYP71基因(GenBank accession No.GQ370622)。该片段包括一个完整的开放阅读框(1488bp),编码495个氨基酸。通过系统进化树分析,属于CYP71家族。将番茄的CYP71基因定向克隆到植物表达载体pBI121中,获得CYP71基因的正、反义植物表达载体pBI121-CYP71s和pBI121-CYP71as,为深入研究该基因的功能奠定基础。 展开更多

关键词 番茄 CYP71基因 RACE技术 植物表达载体

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番茄LeEIL1基因的克隆分析及表达载体构建 被引量：1

11

作者 李季 李正国 +2 位作者 罗安才 杨迎伍 邓伟 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期114-117,共4页

采用RT-PCR方法从番茄果实cDNA中成功克隆了番茄LeEIL1基因,并测序验证序列正确;经数据库检索等生物信息学分析方法,对番茄LeEIL1蛋白质与拟南芥、烟草、水稻、香石竹等的EIN3/EILs蛋白质序列进行了同源性分析,初步确定了番茄LeEIL1上的... 采用RT-PCR方法从番茄果实cDNA中成功克隆了番茄LeEIL1基因,并测序验证序列正确;经数据库检索等生物信息学分析方法,对番茄LeEIL1蛋白质与拟南芥、烟草、水稻、香石竹等的EIN3/EILs蛋白质序列进行了同源性分析,初步确定了番茄LeEIL1上的DNA结合功能域及其结合激活位点。并构建了LeEIL1的酵母表达工程菌pPIC9k-EIL1/KM71,为该基因的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 番茄LeEIL1 同源分析 DNA结合域 载体构建

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番茄中一个F-box/FBA基因的表达分析及载体构建 被引量：1

12

作者 邢蕾 李正国 《热带作物学报》 CSCD 2011年第4期658-662,共5页

通过生物信息学分析从番茄基因数据库中筛选出一条全长cDNA序列,命名为SlFbf(GenBank登录号:AK326236.1)。通过设计特异引物克隆该基因。SlFbf全长1 464 bp,编码381个氨基酸,N端含有F-box结构域,C端含有FBA_1结构域,在基因组序列中无内... 通过生物信息学分析从番茄基因数据库中筛选出一条全长cDNA序列,命名为SlFbf(GenBank登录号:AK326236.1)。通过设计特异引物克隆该基因。SlFbf全长1 464 bp,编码381个氨基酸,N端含有F-box结构域,C端含有FBA_1结构域,在基因组序列中无内含子。半定量及定量RT-PCR分析结果表明,该基因在番茄的根、茎、叶、花蕾、花、青果、黄果及红果中均有表达,且在开花当天的雄蕊中表达最强,推测该基因在雄蕊发育中起着重要作用。同时构建了番茄SlFbf基因的正、反义植物表达载体,为深入研究该基因功能奠定了基础。 展开更多

关键词 番茄 FBA亚家族 克隆 表达 载体构建

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Vip3A基因植物表达载体的构建及其对烟草的遗传转化

13

作者 马作江 邓伟 +1 位作者 杨迎伍 李正国 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第5期108-111,共4页

为了研究Vip3A基因在转基因抗虫植物中的应用,利用PCR技术克隆了苏云金芽孢杆菌的Vip3A基因和烟草的EF1α启动子,以pBI121质粒为基本载体,构建了分别由组成型CaMV35S启动子和花特异表达的EF1α启动子驱动Vip3A基因的植物表达载体pBIVip3... 为了研究Vip3A基因在转基因抗虫植物中的应用,利用PCR技术克隆了苏云金芽孢杆菌的Vip3A基因和烟草的EF1α启动子,以pBI121质粒为基本载体,构建了分别由组成型CaMV35S启动子和花特异表达的EF1α启动子驱动Vip3A基因的植物表达载体pBIVip3A和pBIEFVip3A,并通过农杆菌介导的方法对烟草进行了遗传转化。经PCR检测,外源基因已整合到烟草基因组中。 展开更多

关键词 VIP3A基因 EF1α启动子 载体构建 苏云金芽孢杆菌 烟草

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番茄XRN2基因的克隆、表达分析及遗传转化

14

作者 刘俊江 李正国 +2 位作者 杨迎伍 先志强 邓伟 《热带作物学报》 CSCD 2011年第3期447-451,共5页

为了研究番茄XRN2基因的功能,利用RT-PCR技术从番茄各组织混合cDNA中扩增了番茄XRN2基因全长编码序列,并对其进行了表达模式分析。结果表明该基因在番茄根部表达最强烈。通过对番茄叶片进行伤害诱导处理,发现番茄XRN2基因表达呈上升趋... 为了研究番茄XRN2基因的功能,利用RT-PCR技术从番茄各组织混合cDNA中扩增了番茄XRN2基因全长编码序列,并对其进行了表达模式分析。结果表明该基因在番茄根部表达最强烈。通过对番茄叶片进行伤害诱导处理,发现番茄XRN2基因表达呈上升趋势。将该基因在组成型启动子CaMV35S驱动下定向构建至植物表达载体pCambia1301-35S,重组载体命名为pCambia1301-35S-XRN2和pCambia1301-35S-AsXRN2。通过农杆菌介导法转化获得转基因番茄,为进一步阐明XRN2基因在番茄中的功能奠定了基础。 展开更多

关键词 XRN2 半定量PCR 伤害处理 载体构建 遗传转化 番茄

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优化重叠PCR法进行单链抗体基因扩增和点突变 被引量：4

15

作者 符勇耀 李正国 +3 位作者 李泮志 邓伟 杨迎伍 王中康 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期150-155,共6页

利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点，国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR，针对影响重叠PCR扩增的拼接类型，引物设计，反应条件等进行... 利用重叠PCR技术扩增单链抗体基因或位点突变是抗体文库构建或稳定表达的关键和难点，国内外文献未见其方法学的系统报道。以不同VH、VL和Linker基因为拼接模板进行重叠PCR，针对影响重叠PCR扩增的拼接类型，引物设计，反应条件等进行优化。结果表明两段重叠连接比三段更容易实现，且扩增效果好；引物的互补序列长度一般应大于15bp，且在18—24bp时扩增效果最好；退火温度在52—600C，Mg^2＋浓度在1．5—2．5mM时对拼接的效果影响较小；直接或间接使用拼接模板均可以实现重叠PCR的扩增。利用优化策略，首次构建了抗除虫菊酯的scFv基因文库并引入抗XAC糖蛋白scFv基因的点突变，为除虫菊酯抗体文库构建和抗XAC重组抗体的稳定表达奠定了基础。 展开更多

关键词 重叠PCR 优化 单链抗体基因 点突变

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安全标记基因在转基因植物中的应用 被引量：9

16

作者 符勇耀 杨迎伍 +1 位作者 邓伟 李正国 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第6期24-29,共6页

转基因植物的抗性标记一直是转基因生物安全性争论的焦点,是限制转基因植物应用的瓶颈之一。筛选安全标记基因替代抗生素标记基因已成为解决转基因植物安全性和促进转基因植物应用的重要策略。综述了生物安全标记基因的产生背景、系统... 转基因植物的抗性标记一直是转基因生物安全性争论的焦点,是限制转基因植物应用的瓶颈之一。筛选安全标记基因替代抗生素标记基因已成为解决转基因植物安全性和促进转基因植物应用的重要策略。综述了生物安全标记基因的产生背景、系统分类、筛选原理及不同起源的标记基因在植物基因工程中的应用和存在问题。选用植物内源标记基因已成为转基因植物安全标记基因研究的重要方向。 展开更多

关键词 转基因植物 抗性标记 安全标记 基因

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鹦鹉热衣原体real-time quantitative PCR检测方法的研究 被引量：7

17

作者 吴东海 李应国 +3 位作者 杨迎伍 邓伟 王昱 李正国 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第23期9905-9906,共2页

[目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础。[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白（MOMP）基因序列设计一对特异性引物，以SYBRGreenI为荧光染料，建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitativePCR检测方法。根据检测结果，计算样品... [目的]为鹦鹉热衣原体的快速、准确检测奠定基础。[方法]根据鹦鹉热衣原体主要外膜蛋白（MOMP）基因序列设计一对特异性引物，以SYBRGreenI为荧光染料，建立了鹦鹉热衣原体Real-time quantitativePCR检测方法。根据检测结果，计算样品的批内和批间变异系数（CV）。[结果]以提取的鹦鹉热衣原体DNA为模板。用引物Cps-1和Cps-2进行PCR扩增，得到长100bp的片段。扩增产物回收纯化后。连接到pGEM-TEasy载体上并转化到大肠杆菌DH50α。菌落PcR检测筛选阳性克隆，培养后提取质粒DNA。当模板浓度范围为1.78×10^2～1.78×10^8拷贝／μl时，标准曲线相关系数达0.998；批内和批间变异系数（CV％）分别为1．30％～4．59％和5.72％～9.87％。[结论]为鹦鹉热衣原体的感染、流行调查等提供了重要的技术参考。 展开更多

关键词 鹦鹉热衣原体 荧光实时定量PCR 外膜蛋白基因 检测

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