环状RNA的功能及其在原发性肝癌中的作用 被引量：5

1

作者 柳东红(综述) 廖勇 曹广文(审阅) 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期927-937,共11页

环状RNA是一类通过特殊成环机制形成的具有相对稳定结构的RNA,广泛存在于真核细胞中。环状RNA在众多病理生理过程中发挥重要作用,包括肿瘤的发生发展。原发性肝癌的发病率和病死率在全球肿瘤发生和死亡中均居前列,探索环状RNA在原发性... 环状RNA是一类通过特殊成环机制形成的具有相对稳定结构的RNA,广泛存在于真核细胞中。环状RNA在众多病理生理过程中发挥重要作用,包括肿瘤的发生发展。原发性肝癌的发病率和病死率在全球肿瘤发生和死亡中均居前列,探索环状RNA在原发性肝癌中的作用将丰富对原发性肝癌的发生发展及防治的了解。有不少研究表明环状RNA参与原发性肝癌的发生发展及预后,本文就环状RNA的产生及功能,及其在原发性肝癌中的作用进行综述,为原发性肝癌的早期诊断、预后预测及治疗靶点选择提供依据。 展开更多

关键词 环状RNA 肿瘤 原发性肝癌

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体外鉴定汉坦病毒包膜糖蛋白G2与β3整合素的相互作用 被引量：1

2

作者 郭进军 李青岭 +2 位作者 周倩云 曾爱忠 黄爱龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第5期136-139,共4页

根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G... 根据汉坦病毒76-118株M基因和β3整合素基因序列设计引物,分别以质粒M56和Hela细胞cDNA为模板通过PCR扩增和基因重组获得G2蛋白膜外区81～140片段的GST融合表达质粒以及β3整合素膜外区23～133片段FLAG融合表达质粒。通过SDS-PAGE检测G2片段在BL21表达菌中诱导表达及纯化的效果,Western blot检测β3整合素片段在真核细胞中的表达。将在BL21裂解上清中表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81～140)纯化后与经过GST蛋白预处理的含有β3整合素片段的细胞裂解上清进行孵育,同时以未做任何转染的HEK293细胞裂解上清和无关蛋白GST-TLM作为阴性对照,通过GSTPull-down验证G2蛋白与β3整合素之间的相互作用。结果显示在Pull-down所获蛋白复合物中检测到β3整合素27～133位氨基酸片段产物的存在。结果表明G2蛋白与β3整合素之间可能存在有直接的相互作用,为β3整合素作为汉坦病毒细胞膜受体提供了进一步证据。 展开更多

关键词 汉坦病毒受体 包膜糖蛋白G2 Β3整合素 GST Pull—down

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抗2型登革病毒M蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定 被引量：1

3

作者 张娟 但妍 +4 位作者 张君 蔡雪飞 陈婧 郑建 黄爱龙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期349-352,356,共5页

目的克隆表达2型登革病毒M蛋白,用纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备可用于胶体金快速检测试条的抗2型登革病毒M蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用登革热2型病毒全长基因重组质粒,经PCR方法扩增出prm/m基因... 目的克隆表达2型登革病毒M蛋白,用纯化的重组蛋白免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤技术制备可用于胶体金快速检测试条的抗2型登革病毒M蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用登革热2型病毒全长基因重组质粒,经PCR方法扩增出prm/m基因片段,在pET-32a(+)表达系统中表达,表达产物用Ni柱亲和层析纯化后,用于免疫Balb/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗M蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得2株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞Ⅲ1A6和Ⅲ3D2;相对亲和力均在105以上。Western blot显示2株mAb能特异识别重组M蛋白。结论成功地制备出抗登革病毒2型病毒M蛋白的2株mAb,为建立快速特异检测登革病毒的实验方法提供了有力的工具。 展开更多

关键词 登革病毒 M蛋白 单克隆抗体 生物学特性

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丙型肝炎病毒E1蛋白活化MAPK／ERK信号通路促进肝癌细胞增殖 被引量：1

4

作者 陈庆美 刘娇 +4 位作者 单晓亮 周帆 权会琴 陈林林 唐霓 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期42-48,共7页

目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b；将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞... 目的研究丙型肝炎病毒（hepatitisCvirus，HCV）编码蛋白E1的生物学功能。方法分别构建编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的腺病毒载体Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b；将重组并包装的腺病毒分别感染SMMC-7721细胞，测定感染滴度，通过RT—PCR方法在转录水平鉴定HCVE1、E2、NS3、NS5a、NSSb的表达，用Western印迹在蛋白水平鉴定E1蛋白的表达。腺病毒感染SMMC-7721细胞后，通过细胞增殖实验筛选生物学功能最明显的蛋白。将筛选到的Ad—E1感染SMMC-7721细胞，用MTS、结晶紫、细胞周期实验观察体外过表达E1蛋白对感染细胞增殖的影响；Western印迹检测p-ERK、ERK的表达；RT—PCR检测c—Myc、cyclinD1、c—Jun、c．Fos基因的表达。结果成功扩增了能够编码HCV重要蛋白E1、E2、NS3、NS5a、NS5b的高滴度腺病毒Ad—E1、Ad—E2、Ad—NS3、Ad—NS5a、Ad—NS5b，并且通过RT—PCR方法在转录水平鉴定了目的基因的表达，Western印迹方法在蛋白水平鉴定了E1蚩白的表达。通过细胞计数、MTS、结晶紫实验证实Ad—E1感染组细胞较对照组增殖速度加快，细胞周期显示Ad-E1感染组细胞34．38％处于S期，明显高于Ad—GFP（27．32％）（P〈0．05）对照组；Ad-E1感染绢p-ERK蛋白表达量增高，同时与细胞增殖相关的MAPK／ERK下游基因转录水平上凋。结论体外过表达HCVE1蛋白可以明显促进SMMC-7721细胞的增殖，其促增殖作用可能与MAPK／ERK信号通路的活化相关。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 E1蛋白 丝裂原活化蛋白激酶 细胞增殖

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丙型肝炎病毒重要编码蛋白重组腺病毒载体的构建 被引量：1

5

作者 刘娇 周帆 +2 位作者 陈庆美 单晓亮 唐霓 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期146-149,159,共5页

旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细... 旨在构建含HCV core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒载体。运用PCR技术扩增目的基因片段,通过酶切连接方法将上述7种基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-TO4中,然后将重组质粒用PmeⅠ线性化后与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌中同源重组。用PacⅠ酶把重组腺病毒载体线性化后转染HEK293细胞后产生重组腺病毒颗粒。利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP对其感染效率进行监测。结果显示,酶切鉴定和测序结果均证实含core、E1、E2、F、NS3、NS5a和NS5b基因的重组腺病毒构建成功,在感染的Huh7细胞中观察到绿色荧光蛋白GFP。成功制备了高滴度的腺病毒Ad-core、Ad-E1、Ad-E2、Ad-F、Ad-NS3、Ad-NS5a和Ad-NS5b,为后续研究奠定了基础。 展开更多

关键词 HCV编码蛋白 穿梭质粒 骨架质粒 同源重组 腺病毒

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HBV前S2蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定 被引量：1

6

作者 赖梅梅 王雪梅 +3 位作者 张君 蔡雪飞 郑健 黄爱龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第3期76-80,共5页

目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达... 目的克隆表达HBV前S2蛋白,用纯化的重组蛋白GST-S2免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术制备抗HBV前S2蛋白的单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法利用含双拷贝乙肝病毒adw2亚型基因全序列的质粒pEcob6,经PCR方法扩增出HBV前S2片段,在GST表达系统中表达,表达产物用谷胱甘肽亲和层析纯化后,用于免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗前S2蛋白的mAb,采用间接ELISA方法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA方法鉴定mAb相对亲和力。结果获得一株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞7A6;相对亲和力均在107以上。Western blot显示该株mAb能特异识别重组前S2蛋白。结论成功地制备出抗HBV前S2蛋白的一株mAb。 展开更多

关键词 乙肝病毒 前S2蛋白 单克隆抗体 生物学特性

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丙型肝炎病毒核心蛋白稳定表达肝癌细胞株的构建及生物学研究 被引量：1

7

作者 单晓亮 刘娇 +4 位作者 陈庆美 周帆 陈林林 权会琴 唐霓 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期99-103,共5页

旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究。利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blas... 旨在构建稳定表达HCV核心蛋白的稳定细胞系Huh7-Core并进行初步的生物学功能研究。利用PCR技术扩增HCV核心蛋白基因,通过酶切连接反应将目的基因克隆至载体pSEB-3Flag中,将重组质粒pSEB-3F-Core和辅助质粒pAmpho共转染Huh7细胞,经过Blasticidine抗性筛选,建立稳定表达HCV核心蛋白的肝癌细胞系Huh7-Core。采用RT-PCR、Western blot鉴定Huh7-Core细胞株中核心蛋白的稳定表达并采用MTS、结晶紫试验观察Huh7-Core稳定细胞株的增殖情况。结果显示,成功构建了表达HCV核心蛋白的稳定细胞株Huh7-Core。结晶紫、MTS试验证实Huh7-Core细胞较Huh7-3Flag细胞增殖速度增快,表达HCV核心蛋白的Huh7-Core稳定细胞株构建成功,Core稳定表达后可促进Huh7细胞生长速度。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 核心蛋白 生物学功能 稳定细胞株 细胞增殖

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抗登革病毒2型E蛋白单克隆抗体的制备和生物学特性的鉴定 被引量：1

8

作者 陶萍 帅光泽 +3 位作者 赖梅梅 王雪梅 郑健 黄爱龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第5期145-148,共4页

为了制备可用于胶体金快速检测试纸条的抗登革病毒2型(DEN2)E蛋白单克隆抗体(mAb),通过基因克隆获得E基因与质粒pET32a(+)的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPGT诱导表达重组蛋白。以DEN2重组E蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技... 为了制备可用于胶体金快速检测试纸条的抗登革病毒2型(DEN2)E蛋白单克隆抗体(mAb),通过基因克隆获得E基因与质粒pET32a(+)的重组质粒,将重组质粒转化入大肠杆菌BL21,IPGT诱导表达重组蛋白。以DEN2重组E蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗DEN2E蛋白的mAb,以间接ELISA法和Western blot进行mAb特异性鉴定;同时采用间接ELISA法鉴定mAb的Ig亚类。结果表明获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞(7C7),其抗体亚类为IgG1。Western blot显示该株mAb能特异识别重组pET32a-DEN2E蛋白。因此,成功制备出抗DEN2E的1株mAb,为建立快速特异检测登革病毒感染的实验方法提供了有力的工具。 展开更多

关键词 登革病毒 单克隆抗体 生物学特性 E蛋白

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一个约30kD膜蛋白作为汉坦病毒候选受体的筛选

9

作者 李青岭 冯涛 +1 位作者 郭进军 黄爱龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第4期125-129,共5页

目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标... 目的:筛选汉坦病毒包膜糖蛋白G2可能的候选受体或受体辅助分子,方法:根据汉坦病毒76～118株M基因序列设计引物,PCR扩增和基因重组获得G2全长及各功能片段的GST融合表达质粒,SDS-PAGE检测它们在BL21菌中诱导表达及纯化的效果。生物素标记汉坦病毒易感细胞Vero E6和非允许细胞CHO的细胞膜蛋白。将在BL21裂解上清中有表达的G2蛋白N端81～140位氨基酸片段(G2N81-140)纯化后与含有生物素标记的Vero E6细胞膜裂解液进行孵育,同时以非允许细胞CHO和无关蛋白GST-TLM做为阴性对照,通过GST Pull-down分离与G2蛋白特异性结合的细胞膜蛋白。结果:一个约30kD的Vero E6细胞膜蛋白与G2N81～140片段之间存在着特异性的相互作用。结论:该30kD蛋白可能是汉坦病毒细胞膜候选受体或受体辅助分子之一,是病毒入侵细胞的一个相关分子。 展开更多

关键词 汉坦病毒受体 包膜糖蛋白G2 GST Pull-down生物素膜标记

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抗HBsAg单克隆抗体的制备与生物学特性的鉴定

10

作者 王雪梅 赖梅梅 +4 位作者 张晓丽 张祯祯 陈婧 张君 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第3期267-269,共3页

目的：制备分泌抗HBVS蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定其特性，为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础。方法：以重组乙肝疫苗免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株，利用间接ELISA技术和Wes... 目的：制备分泌抗HBVS蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并鉴定其特性，为建立快速诊断HBV感染的方法奠定基础。方法：以重组乙肝疫苗免疫BALB／c小鼠，通过细胞融合建立了能稳定分泌抗HBsAg单抗的杂交瘤细胞株，利用间接ELISA技术和Western blot进行单抗特异性的鉴定，同时采用间接ELISA方法鉴定mAb的Ig亚类，检测mAb的效价及相对亲和力。结果：获得1株可分泌特异性mAb的杂交瘤细胞4D2，其抗体亚类为IgG1型，腹水效价为1：106，相对亲和力在10^5以上。结论：成功地制备出抗HBVS蛋白的单克隆抗体，为建立快速特异检测HBV感染的实验方法提供了有力的工具。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 乙型肝炎表面抗原 单克隆抗体

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丙型肝炎病毒F蛋白抑制肝癌细胞增殖功能的研究

11

作者 周帆 刘娇 +4 位作者 陈庆美 单晓亮 陈林林 权会琴 唐霓 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期368-371,共4页

目的研究HCV F蛋白的生物学功能。方法扩增目的基因片段，通过酶切连接方法将编码HCVF蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中，用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞，经Blasticidine抗性筛选，拟建立HCVF蛋白稳定表... 目的研究HCV F蛋白的生物学功能。方法扩增目的基因片段，通过酶切连接方法将编码HCVF蛋白的基因片段克隆至载体pSEB-3Flag中，用构建好的重组质粒pSEB-3Flag-F转染Huh7、SMMC7721细胞，经Blasticidine抗性筛选，拟建立HCVF蛋白稳定表达的细胞株，用RT-PCR方法检测HCV-F基因的表达。通过MTS、细胞计数、结晶紫以及流式细胞检测实验观察F蛋白对转染细胞增殖和细胞周期的影响。计量资料分析采用t检验。结果成功建立了HCVF基因稳定表达的细胞株Huh7-F和SMMC7721-F，MTS、细胞计数实验均证实Huh7-F和SMMC7721-F细胞较对照细胞增殖速度减慢，Huh7-F稳定细胞株结晶紫定量爿值为1．072±0．070，对照组为1．387±0．005（f=-6．347，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株4值为1．594±0．007，对照组为1．921±0．090（t=-4．81，P〈0．05）。流式细胞仪检测Huh7-F稳定细胞株48hS期细胞百分比分别为47．1妣±0．040／0，对照组S期细胞数为55．32％±1．45％（f=-7．99，P〈0．05）；SMMC7721-F稳定细胞株S期细胞百分比分别为30．75％±0．09％，对照组S期细胞数为33．23％±0．28％（f=-5．91，P〈0．05）。结论稳定转染HCVF基因可以明显抑制Huh7细胞、SMMC7721细胞的增殖。 展开更多

关键词 肝炎病毒 丙型 细胞增殖 癌 肝细胞

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