急性呼吸窘迫综合征机械通气时气道冲洗液的选择 被引量：19

1

作者 周向东 杜先智 张婷 《中国急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第9期525-526,共2页

目的　提供适用于急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)机械通气患者的功能较全面的气道冲洗液。方法　采用理化检测并经配伍试验的方法配制组方液 ,应用于ARDS患者行机械通气时插管的冲洗。观察组方液对气道吸出物黏度、菌落计数及炎性损伤性因... 目的　提供适用于急性呼吸窘迫综合征 (ARDS)机械通气患者的功能较全面的气道冲洗液。方法　采用理化检测并经配伍试验的方法配制组方液 ,应用于ARDS患者行机械通气时插管的冲洗。观察组方液对气道吸出物黏度、菌落计数及炎性损伤性因子的影响。结果　 10 0mL冲洗液含N -乙酰半胱氨酸 (NAC) 6 0 0mg、肝素 10 0mg(2mL)、生理盐水 5 0mL、5 %NaHCO3 30mL、10 %NaCl 17mL、沙丁胺醇雾化溶液 1mL ,其pH值为 7 8,渗透压相当于 3 2 %NaCl溶液 ,该组方液定时冲洗气道后可明显降低气道吸出物黏度 ,降低吸出物中活菌比例、降低中性粒细胞 (PMN)膜结合弹力酶表达强度。结论　该组方液冲洗气道无明显副反应 ,可防止痰痂形成 ,提高抗生素在气道的杀菌效能并抑制炎性损伤过程 。 展开更多

关键词 气道冲洗液 急性呼吸窘迫综合征 机械通气 ARDS

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哮喘急性加重和糖皮质激素治疗对诱导痰炎症细胞分类及表型的影响 被引量：18

2

作者 赵燕 程晓明 +4 位作者 林科雄 陈华萍 马千里 王导新 王长征 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期1968-1971,共4页

目的研究糖皮质激素治疗及急性加重对哮喘患者诱导痰炎症细胞分类及表型的影响。方法收集2011年1-6月,新桥医院呼吸内科门诊和住院部经糖皮质激素治疗的104例哮喘患者的病史及诱导痰资料进行回顾性分析。结果急性加重患者诱导痰炎症细... 目的研究糖皮质激素治疗及急性加重对哮喘患者诱导痰炎症细胞分类及表型的影响。方法收集2011年1-6月,新桥医院呼吸内科门诊和住院部经糖皮质激素治疗的104例哮喘患者的病史及诱导痰资料进行回顾性分析。结果急性加重患者诱导痰炎症细胞表型分别为中性粒细胞性42.3%,嗜酸性粒细胞性26.9%,混合细胞性及寡细胞性各为15.4%;非急性加重患者表型分别为嗜酸性粒细胞性50%,寡粒细胞性19.2%,混合细胞性19.2%,中性粒细胞性11.5%。急性加重及非急性加重患者痰炎症细胞分类均以中性粒细胞[(65.2±19.3)%、(54.4±20.5)%]及嗜酸性粒细胞[(3.8±7.4)%、(9.9±23.9)%]为主。急性加重组经糖皮质激素治疗前后诱导痰细胞炎症细胞表型及分类无显著变化(P>0.05),非急性加重组经吸入糖皮质激素治疗后诱导痰细胞中性粒细胞比例从(55.5±20.5)%上升到(68.9±19.3)%,嗜酸性粒细胞从(14.7±20.1)%下降为(4.6±5.6)%,两者呈显著的负相关性(r=-0.66,P<0.05);中性粒细胞性表型患者的比例也显著增多(P<0.05)。结论哮喘急性加重及吸入激素治疗均可以导致哮喘患者诱导痰中性粒细胞增多,改变气道炎症细胞的表型。 展开更多

关键词 哮喘 诱导痰 炎症细胞 表型

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TNF-α与香烟烟雾在诱导气道上皮细胞株黏蛋白表达的相互作用 被引量：17

3

作者 李琪 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第11期1139-1143,共5页

目的探讨肿瘤坏死因子TNF-α与香烟提取物共同诱导气道黏液高分泌的相互关系及作用特点。方法培养的人气道上皮细胞BEAS-2B,转染核转录因子(NF)-κB"decoy"寡核苷酸(ODNs),并以乱序NF-κBODNs为对照转染组,各组均分别予以TNF... 目的探讨肿瘤坏死因子TNF-α与香烟提取物共同诱导气道黏液高分泌的相互关系及作用特点。方法培养的人气道上皮细胞BEAS-2B,转染核转录因子(NF)-κB"decoy"寡核苷酸(ODNs),并以乱序NF-κBODNs为对照转染组,各组均分别予以TNF-α、10%香烟提取物(CSE)单独刺激及共同刺激,以Western blot、ELISA及RT-PCR法检测各组刺激前后磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、黏蛋白(MUC5AC)蛋白及mRNA水平。结果转染乱序NF-κBODNs的细胞予以TNF-α、10%CSE刺激后,各组细胞中p-EGFR蛋白水平较对照组升高,伴随MUC5AC蛋白含量及基因转录水平的提高(P<0.05);共孵育组中较单独刺激组升高更为显著(P<0.05)。转染NF-κB"de-coy"ODNs组再予以TNF-α刺激,细胞中MUC5AC蛋白含量及mRNA水平与未转染组相比升高不明显,而单用CSE刺激组中的MUC5AC、p-EGFR水平仍有明显升高(P<0.05);共孵育组显示出与CSE单独刺激组相似的结果。结论TNF-α、CSE能协同促进气道上皮细胞中黏蛋白合成,转录因子NF-κB主要参与TNF-α所致的MUC5AC表达,而在CSE诱导的效应过程中作用不明显。 展开更多

关键词 黏蛋白类 肿瘤坏死因子Α 吸烟 核转录因子-ΚB

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对结核性胸膜炎患者使用分支杆菌类免疫刺激剂的商榷性研究 被引量：14

4

作者 周向东 兰箭 张婷 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第10期595-597,共3页

目的　为观察在结核性胸膜炎患者使用分支杆菌类免疫增强剂的实际疗效并探讨其使用是否具合理性。方法　观察结核性胸膜炎患者分别经单纯抗结核 +胸穿抽液 (对照组 )和抗结核 +斯奇康 +胸穿抽液 (实验组 )的胸液平均消退时间和胸液淋巴... 目的　为观察在结核性胸膜炎患者使用分支杆菌类免疫增强剂的实际疗效并探讨其使用是否具合理性。方法　观察结核性胸膜炎患者分别经单纯抗结核 +胸穿抽液 (对照组 )和抗结核 +斯奇康 +胸穿抽液 (实验组 )的胸液平均消退时间和胸液淋巴细胞密度的动态改变 ,同时采用原位DNA末端标记技术观察两组患者胸液淋巴细胞凋亡时程的动态改变。结果　对照组和实验组的胸液消退时间分别为 (2 1 .2± 5 .4)d和 (2 8.7± 7.1 )d ,两组相比P <0 .0 5。两组患者胸液淋巴细胞密度于用药满 1周、2周、3周时分别为 1 .6× 1 0 9/L与 2 .1× 1 0 9/L(P <0 .0 1 )、0 .83× 1 0 9/L与 1 .52× 1 0 9/L(P <0 .0 1 )、0 .55× 1 0 9/L与 1 .1 6× 1 0 9(P <0 .0 1 )。两组患者胸液淋巴细胞半数凋亡时间于用药满 1周、2周、3周时分别为 94与 1 2 4h(P <0 .0 1 )、84与 1 2 3h(P <0 .0 1 )、79与 1 2 0h(P <0 .0 1 )。结论　分支杆菌类免疫刺激剂可持续活化淋巴细胞 ,延长胸液淋巴细胞凋亡时程 ,从而减缓结核性胸液的消退进程。故该类制剂不宜用于结核性胸膜炎的辅助治疗。 展开更多

关键词 结核性胸膜炎 分支杆菌 淋巴细胞 免疫增强剂 原位DNA末端标记技术 辅助治疗

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重庆地区呼吸专科医师对2011年版GOLD中“COPD综合评估体系”的认知情况和临床应用调查 被引量：8

5

作者 马千里 张巧 +9 位作者 廖秀清 周向东 黎联 王导新 沈庆 何勇 江程澄 徐建华 田川 王长征 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2013年第4期325-328,共4页

目的了解呼吸专科医师对2011年版慢性阻塞性肺疾病全球防治创议(GOLD)更新的COPD综合评估体系的认知和临床应用现状。方法采用问卷形式对重庆地区42家医院呼吸专科医师进行调查。问卷包括15个问题,针对COPD综合评估体系的认知、临床应... 目的了解呼吸专科医师对2011年版慢性阻塞性肺疾病全球防治创议(GOLD)更新的COPD综合评估体系的认知和临床应用现状。方法采用问卷形式对重庆地区42家医院呼吸专科医师进行调查。问卷包括15个问题,针对COPD综合评估体系的认知、临床应用情况及未能应用的原因。结果收回有效问卷204份,超过90%的呼吸科医师不同程度了解及认可COPD综合评估体系,近2/3的医师熟悉COPD评估测试(CAT)和改良的英国医学研究委员会呼吸困难量表评分(mMRC),但仅24%的医师已经在临床应用。未临床应用的原因主要是认为仅用肺功能就可以评估(60%)及受限于接诊时间(66.7%)。三甲及以上医院的医生认知和应用情况略好于三甲以下医院的医生,但不同职称医师之间差别不显著。结论重庆地区呼吸专科医师对2011年版GOLD中COPD综合评估体系的知晓率和认同率都很高,评估体系操作复杂而门诊时间有限是目前临床应用不普遍的主要原因。 展开更多

关键词 慢性阻塞性肺疾病 2011版慢性阻塞性肺疾病全球防治创议 呼吸专科医师 问卷调查

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BTLA在重症社区获得性肺炎患者中的表达及糖皮质激素干预动物模型的影响 被引量：11

6

作者 周国旗 王导新 +2 位作者 刘代顺 刘振峰 李朝英 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期312-320,共9页

目的本研究通过观察BT淋巴衰减子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)在重症CAP患者外周血淋巴细胞及支气管黏膜上的表达,外源性干预LPS-诱导的急性肺部炎症小鼠模型BTLA表达对肺部炎症的作用以及给予糖皮质激素对BTLA表达的影响。方... 目的本研究通过观察BT淋巴衰减子(B and T lymphocyte attenuator,BTLA)在重症CAP患者外周血淋巴细胞及支气管黏膜上的表达,外源性干预LPS-诱导的急性肺部炎症小鼠模型BTLA表达对肺部炎症的作用以及给予糖皮质激素对BTLA表达的影响。方法利用流式细胞学分析重症CAP患者外周血BTLA^+CD4^+淋巴细胞比例,另外对重症CAP患者支气管黏膜常规行HE染色和免疫组织化学检测BTLA表达情况。利用流式细胞学分析LPS诱导的急性肺部炎症模型右心血BTLA^+CD4^+淋巴细胞比例。收集肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)行炎症细胞分类计数,并利用ELISA检测炎症因子。取肺组织分别行HE染色、免疫组织化学染色和蛋白印迹。结果流式细胞学分析重症肺炎患者外周血中BTLA^+CD4^+淋巴细胞比例明显高于正常对照组。此外,支气管黏膜HE染色结果显示重症CAP患者支气管黏膜有大量炎症细胞浸润,并且伴有支气管壁增厚;进一步用免疫组织化学检测支气管黏膜BTLA表达,结果提示重症肺炎患者支气管黏膜BTLA表达明显增高,浸润的炎症细胞BTLA表达增高明显。流式细胞学分析LPS诱导的急性肺部炎症模型小鼠右心血中BTLA^+CD4^+淋巴细胞比例明显高于正常对照组。利用激动性抗-BTLA抗体6A6干预急性肺部炎症模型后淋巴细胞BTLA表达较模型小鼠明显增高,同时,激动性抗-BTLA抗体6A6能减轻肺部炎症反应和抑制NF-κB信号通路激活。利用糖皮质激素干预急性肺部炎症模型后淋巴细胞BTLA表达较模型小鼠明显增高,糖皮质激素能减轻肺部炎症反应和抑制NF-κB信号通路激活。结论通过本研究我们推测BTLA信号可能参与了重症CAP患者的免疫调节过程,BTLA可能成为重症CAP治疗的一个新靶点。同时,BTLA的表达可能反应患者机体的免疫状态,为临床使用糖皮质激素治疗提供指导作用。 展开更多

关键词 社区获得性肺炎 BT淋巴衰减子 糖皮质激素 脂多糖

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灯盏花素在气道黏液高分泌大鼠模型中的治疗作用 被引量：11

7

作者 田川 李琪 周向东 《临床肺科杂志》 2009年第1期33-34,共2页

目的研究灯盏花素在气道黏液高分泌疾病中的治疗作用。方法采用中性粒细胞弹力酶雾化吸入法制作大鼠气道黏液高分泌病理模型,以灯盏花素注射液为干预因素,生理盐水为对照,分别以RT-PCR、ELISA法检测各组气道上皮黏蛋白的表达情况,wester... 目的研究灯盏花素在气道黏液高分泌疾病中的治疗作用。方法采用中性粒细胞弹力酶雾化吸入法制作大鼠气道黏液高分泌病理模型,以灯盏花素注射液为干预因素,生理盐水为对照,分别以RT-PCR、ELISA法检测各组气道上皮黏蛋白的表达情况,western b lot检测蛋白激酶C(PKC)的蛋白水平,放射活性法测定PKC的活性。结果灯盏花素治疗组中的黏蛋白基因转录及蛋白表达水平明显低于对照组,同时伴有组织中蛋白激酶C(PKC)蛋白水平及活性的降低。结论灯盏花素能在一定程度上抑制大鼠气道黏液高分泌,其作用是通过抑制PKC活性而实现。 展开更多

关键词 黏蛋白 灯盏花素 蛋白激酶C

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痰液分析对慢性阻塞性肺疾病病情进展的评估价值 被引量：10

8

作者 周向东 李升锦 张桂蓉 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2002年第3期160-162,共3页

目的 了解慢性阻塞性肺疾病(COPD)病情进展各阶段痰液特性的改变规律,考察其评估病情进展的价值。方法 采用常规理化分析和免疫荧光的方法,分析39例COPD患者临床缓解期、急性发作期及临终前痰液的粘度、粘蛋白含量、多糖含量、硫酸基含... 目的 了解慢性阻塞性肺疾病(COPD)病情进展各阶段痰液特性的改变规律,考察其评估病情进展的价值。方法 采用常规理化分析和免疫荧光的方法,分析39例COPD患者临床缓解期、急性发作期及临终前痰液的粘度、粘蛋白含量、多糖含量、硫酸基含量以及中性粒细胞(PMN)膜结合弹力酶(HLE)表达强度与分泌型白细胞弹力酶抑制因子(SPIL)表达强度之比;观察痰液外观性状的变化情况。结果 临床缓解期COPD患者痰液的上述指标均较正常人明显增高,随病情进展,上述指标呈同步进行性升高。痰液外观也随之呈稀薄泡沫样痰→粘液痰→粘液脓性痰改变。痰液成份性指标粘蛋白、多糖、硫酸基含量及HLE/SPIL与痰液粘度的相关性呈明显正相关,相关系数分别为0.63、0.66、0.58及0.55。结论 COPD病情的进展伴随有痰液理化特性的恶化和炎性损伤/抗损伤因素失衡程度的加大,痰液分析有助于COPD病情进展的评估。 展开更多

关键词 痰液分析 慢性阻塞性肺疾病 病情进展 评估价值

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气道黏液高分泌的信号传导通路 被引量：10

9

作者 吴小玲 周向东 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2008年第11期1142-1145,共4页

目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导气道黏蛋白(MUC)5AC基因表达的信号传导机制。方法用NE刺激A549细胞,以活性氧(ROS)清除剂DMTU、组织激肽释放酶抑制剂aprotinin和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂AG1478为干预条件,用RT-PC... 目的探讨中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)诱导气道黏蛋白(MUC)5AC基因表达的信号传导机制。方法用NE刺激A549细胞,以活性氧(ROS)清除剂DMTU、组织激肽释放酶抑制剂aprotinin和表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂AG1478为干预条件,用RT-PCR检测MUC5AC转录水平,用ELISA和Western blot法检测表皮生长因子(EGF)、EGFR及其磷酸化水平。结果NE刺激组MUC5AC mRNA水平显著高于对照组,同时伴有EGF浓度升高和磷酸化EGFR增加。DMTU、aprotinin和AG1478干预组MUC5AC mRNA水平与NE刺激组相比显著降低,DMTU和aprotinin干预组EGF和磷酸化EGFR也显著降低。结论NE经EGFR信号通路诱导A549细胞MUC5AC表达,其上游途径有氧化剂、组织激肽释放酶和EGF参与。 展开更多

关键词 弹性蛋白酶 氧化剂 表皮生长因子受体 黏液高分泌

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肺癌患者肺组织MMP-2、MMP-7和TIMP-2表达及意义 被引量：5

10

作者 梅同华 罗彬 马英 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第16期1491-1493,共3页

目的　探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )、基质金属蛋白酶 7(matrixmetal loproteinase 7,MMP 7)和组织金属蛋白酶 2 (tissueinhibitorofmatalloproteinase 2 ,TIMP 2 )的表达及其意义。方法　... 目的　探讨肺癌组织中基质金属蛋白酶 2 (matrixmetalloproteinase 2 ,MMP 2 )、基质金属蛋白酶 7(matrixmetal loproteinase 7,MMP 7)和组织金属蛋白酶 2 (tissueinhibitorofmatalloproteinase 2 ,TIMP 2 )的表达及其意义。方法　采用免疫组化 (S P)法检测 74例肺癌组织、2 0例癌旁正常肺组织中MMP 2、MMP 7和TIMP 2的表达及其与肺癌类型及预后的关系。结果　癌组织中MMP 2和MMP 7表达均显著高于癌旁正常肺组织 (P <0 0 1,P <0 0 5 )。MMP 2表达在有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者 (P <0 0 1) ,MMP 7表达与有无淋巴结转移无明显关系 (P >0 0 5 )。肺癌TIMP 2表达在有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者 (P <0 0 5 )。肺癌MMP 2和TIMP 2的表达呈负相关 (P <0 0 5 )。单变量分析显示MMP 2表达阳性者生存率低于MMP 2阴性者 (P <0 0 1) ,TIMP 2阳性者生存率高于TIMP 2阴性者 (P <0 0 1)。结论　MMP 2和TIMP 2表达与肺癌侵袭转移密切相关 ,可作为判断肺癌预后的有用指标 ,MMP 展开更多

关键词 肺肿瘤 基质金属蛋白酶 金属蛋白酶类组织抑制剂

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重庆市五家教学医院收治弥漫性肺间质疾病的回顾性分析 被引量：5

11

作者 杨雪梅 王长征 +3 位作者 崔社怀 刘忠 李学军 杜先智 《中国呼吸与危重监护杂志》 CAS 2008年第2期120-123,共4页

目的分析重庆市弥漫性间质性肺疾病（DILD）住院患者的临床特征。方法收集2002-2006年重庆市5家教学医院收治住院的DILD病例资料，统计分析DILD住院患者占呼吸内科、全院住院患者的构成比，以及各临床表现、肺功能、血气分析、病理学等... 目的分析重庆市弥漫性间质性肺疾病（DILD）住院患者的临床特征。方法收集2002-2006年重庆市5家教学医院收治住院的DILD病例资料，统计分析DILD住院患者占呼吸内科、全院住院患者的构成比，以及各临床表现、肺功能、血气分析、病理学等检查项目结果。结果重庆地区DILD住院患者男女比例约为1.83：1，平均年龄（61.65±13.31）岁。2002年DILD住院患者占呼吸科住院人数的2.83％o，占全院住院人数0．30‰，2006年分别为8.29‰和0.48‰。影像学以网格状改变为主的占62．2％，以毛玻璃改变为主的占11．3％，伴有蜂窝样改变的占24．5％。47．55％为限制性通气功能障碍，51．05％为混合性通气功能障碍。大多数患者存在低氧血症，动脉血PaO2为（71±25.2）mmHg。病理学检查以普通型间质性肺炎最为多见，81．82％的患者通过病理学检查资料也不能明确分类。结论DILD住院患者占呼吸科和医院住院患者构成比均呈上升趋势。确诊需要有经验的临床、放射和病理科医生共同参与。 展开更多

关键词 间质性肺疾病 流行病学 构成比 发病率

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基质金属蛋白酶-9参与吸烟所致气道黏液高分泌的信号转导通路 被引量：6

12

作者 李国庆 周向东 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期497-500,共4页

目的研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在香烟所致气道黏液高分泌中的作用及其信号转导机制。方法培养人气道BEAS-2B上皮细胞系,分别给予香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)和外源性表皮生长因子(epide... 目的研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)在香烟所致气道黏液高分泌中的作用及其信号转导机制。方法培养人气道BEAS-2B上皮细胞系,分别给予香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)和外源性表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)刺激,以MMP-9抑制剂Ⅰ(MMP-9 inhibitorⅠ)为干预因素。采用RT-PCR检测黏蛋白(mucin,MUC)5ACmRNA,以Westernblot检测MMP-9蛋白及磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)蛋白含量,以ELISA检测MUC5AC蛋白及EGF蛋白含量,以明胶酶谱法测定细胞上清液中MMP-9活力。结果以5%,10%,20%CSE染毒后,MUC5AC的基因转录和MUC5AC蛋白含量显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01),且呈现与CSE染毒浓度相关的趋势;同时,10%,20%CSE染毒组伴有MMP-9蛋白含量及MMP-9明胶酶活力增高,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。20%CSE染毒能增加EGF蛋白、p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量及MUC5AC的基因转录,MMP-9 inhibitorⅠ能显著下调CSE染毒引起的上述变化,与单纯CSE染毒组相比,差异有统计学意义(P<0.05),但MMP-9 inhibitorⅠ不能下调外源性EGF刺激引起的p-EGFR蛋白、MUC5AC蛋白含量和MUC5AC基因转录水平增加的效应(P>0.05)。结论在香烟所致气道黏液高分泌过程中,MMP-9能水解产生可溶性EGF,后者结合并磷酸化EGFR,从而启动下游信号通路,增加MUC5AC基因转录和蛋白产物生成。 展开更多

关键词 空气污染物 香烟烟雾提取物 基质金属蛋白酶-9 表皮生长因子受体 黏蛋白5AC

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活菌H37Ra与灭活菌H37Rv感染小鼠腹腔巨噬细胞的实验研究 被引量：7

13

作者 何宗林 杜先智 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期675-680,共6页

目的:探讨小鼠腹腔接种结核分枝杆菌活菌H37Ra、灭活菌H37Rv后,诱导巨噬细胞免疫物质的表达差异,探讨活菌H37Ra及灭活菌H37Rv作为新的结核候选疫苗的可行性。方法:分别培养BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用活菌H37Ra,灭活菌H37Rv感染10小时后... 目的:探讨小鼠腹腔接种结核分枝杆菌活菌H37Ra、灭活菌H37Rv后,诱导巨噬细胞免疫物质的表达差异,探讨活菌H37Ra及灭活菌H37Rv作为新的结核候选疫苗的可行性。方法:分别培养BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞,用活菌H37Ra,灭活菌H37Rv感染10小时后用抗酸染色方法,观察各组巨噬细胞吞噬情况并计算吞噬率。将活菌H37Ra、灭活菌H37Rv、生理盐水分别接种BALB/c小鼠腹腔,免疫30天后取小鼠腹腔巨噬细胞,RT-PCR法检测小鼠腹腔巨噬细胞IL-12P40、TNFα-、IFNγ-的基因转录水平;ELISA法检测细胞因子IL-12P40、TNFα-、IFNγ-的表达;Griess法、化学法检测小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO、H2O2水平;流式细胞仪检测IFNγ-诱导的CD40L的变化情况。结果:巨噬细胞对活菌H37Ra和灭活菌H37Rv的吞噬率分别为(55.71±8.42)%、(14.82±2.12)%。与灭活菌相比,活菌H37Ra有更强的被吞噬能力(P<0.01)。活菌H37Ra免疫小鼠腹腔巨噬细胞后能显著诱导巨噬细胞的IL-12P40、TNF及IFNγ-基因的转录;细胞因子IL-12P40、TNFα-、IFNγ-、NO及H2O2高水平分泌;同时活菌H37Ra刺激IFNγ-诱导的巨噬细胞表面CD40L的高表达。结论:活的结核分枝杆菌H37Ra能显著诱导小鼠腹腔巨噬细胞产生更多的保护性免疫物质,有利于免疫应答,有可能作为新的结核候选疫苗,而灭活菌H37Rv不能显著激活小鼠腹腔巨噬细胞分泌保护性免疫物质,不宜作为新的结核候选疫苗。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 H37RA H37RV 巨噬细胞

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慢性阻塞性肺疾患小气道粘液潴留形态学改变的危急意义 被引量：5

14

作者 周向东 张婷 梅同华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2002年第21期20-21,共2页

目的 :了解慢性阻塞性肺疾患 (COPD)小气道粘液潴留的病理特点 ,探讨其恶化病情的形态学基础。方法 :取正常肺组织、COPD临床缓解期及急性发作期死亡患者肺组织 ,行免疫组化染色 ,图象分析系统检测杯状细胞化生指数、上皮粘液储备指数... 目的 :了解慢性阻塞性肺疾患 (COPD)小气道粘液潴留的病理特点 ,探讨其恶化病情的形态学基础。方法 :取正常肺组织、COPD临床缓解期及急性发作期死亡患者肺组织 ,行免疫组化染色 ,图象分析系统检测杯状细胞化生指数、上皮粘液储备指数、腔内粘液潴留指数及腔内粘液连体指数。结果 :COPD患者上述指数较正常人普遍增加 ,临床缓解期与急性发作期死亡患者的杯状细胞化生指数和上皮粘液储备指数无明显差异 ,但两者腔内粘液潴留指数和连体指数相差显著 ,后者尤其突出。结论 :小气道粘液潴留的增加尤其是腔内粘液与气道壁杯状细胞呈开放式连体现象的增加是导致病情恶化的重要形态学基础。 展开更多

关键词 小气道 粘液潴留 慢性阻塞性肺疾病 粘液 恶化病情 病理形态学 气道粘液高分泌

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LL-37抑制结核分枝杆菌感染巨噬细胞炎性因子分泌的研究 被引量：6

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作者 邓燕 杜先智 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期190-195,共6页

目的:探讨LL-37在感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的巨噬细胞(Macrophage,Mφ)中对炎性因子分泌的影响及其抗炎作用。方法:(1)使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)将THP-1细胞诱导分化为具有吞噬作用的巨噬细胞(Mφ),用Mtb感染... 目的:探讨LL-37在感染结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)的巨噬细胞(Macrophage,Mφ)中对炎性因子分泌的影响及其抗炎作用。方法:(1)使用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)将THP-1细胞诱导分化为具有吞噬作用的巨噬细胞(Mφ),用Mtb感染Mφ,构建细胞模型,用不同浓度的LL-37处理感染Mtb的巨噬细胞,并设置对照组。(2)实验分组:①正常对照组:THP-1+生理盐水;②Mtb组:THP-1+Mtb;③Mtb+LL-37 5μg/ml组:THP-1+Mtb+5μg/ml LL-37;④Mtb+LL-3710μg/ml组:THP-1+Mtb+10μg/ml LL-37;⑤Mtb+LL-37 20μg/ml组:THP-1+Mtb+20μg/ml LL-37。(3)各组培养6、12、24、48 h后用RT-PCR检测促炎因子IL-12p40、TNF-α及抗炎因子IL-4、IL-10 mR NA的表达;ELISA测定上清中细胞因子IL-12p40、TNF-α、IL-4、IL-10的分泌量。结果:与正常对照组相比较,Mtb感染组各时间段IL-12p40、TNF-α、IL-4及IL-10的mR NA表达上调,并且其分泌量显著增加(P<0.05);LL-37刺激组与Mtb组相比较,各时间段外源性LL-37降低促炎因子IL-12p40、TNF-αmR NA的表达,IL-12p40、TNF-α分泌下降(P<0.05);而IL-4、IL-10 mR NA的表达升高,抗炎因子IL-4、IL-10分泌增加(P<0.05)。结论:外源性LL-37可抑制Mtb感染的巨噬细胞炎性细胞因子分泌,其效应与LL-37的浓度、感染Mtb的时间相关。本研究为结核病的治疗提供了新的见解。 展开更多

关键词 LL-37 结核分枝杆菌 细胞因子

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柚皮素对炎症性气道黏液高分泌的作用 被引量：5

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作者 杨娟 周向东 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期726-731,共6页

目的探讨柚皮素对炎性刺激时气道上皮细胞黏液高分泌的作用和相关的分子机制。方法通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和活性氧(ROS)清除剂DMTU进行干预,用活性氧试... 目的探讨柚皮素对炎性刺激时气道上皮细胞黏液高分泌的作用和相关的分子机制。方法通过人中性粒细胞弹性蛋白酶(HNE)刺激人肺腺癌细胞A549,构建炎性刺激时气道黏液高分泌模型,分别以柚皮素和活性氧(ROS)清除剂DMTU进行干预,用活性氧试剂盒测定各组细胞中ROS的含量,观察黏蛋白(MUC)5AC、表皮细胞生长因子受体(EGFR)和磷酸化EGFR(P-EGFR)的表达。培养细胞经甲基偶氮唑盐法测定活性后分为对照组、HNE处理组、DMTU组、柚皮素组和柚皮素+DMTU组。逆转录PCR方法检测各组MUC5ACmRNA、EGFRmRNA的变化;Westernblot法检测EGFR和P-EGFR蛋白的表达;酶联免疫吸附测定法观察MUC5AC蛋白表达的变化,并用细胞免疫激光共聚焦显微镜观察柚皮素作用前后黏蛋白的分布。结果不同浓度的HNE处理A549后,细胞内ROS的含量逐渐增加,而柚皮素预处理组与50nmol/L的HNE刺激组相比细胞内ROS的含量明显减少(P<0.01);HNE处理组MUC5AC的mRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.92±0.08)和(152±6)μg/mg,EGFRmRNA和蛋白的吸光度面积积分值分别为(0.91±0.05)和(0.86±0.03)μg/mg,均较对照组([0.70±0.02),(112±4)μg/mg和(0.73±0.10),(0.39±0.03)μg/mg]明显升高(P<0.05),P-EGFR和总EGFR蛋白表达均较对照组显著增加(P<0.01);给予柚皮素预处理后,与HNE刺激组相比,EGFR和P-EGFR表达下调;而柚皮素+DMTU组MUC5ACmRNA和MUC5AC的蛋白较单独DMTU处理组更为明显,其吸光度和面积积分值分别为(0.40±0.03)和(113±2)μg/mg(P<0.01),差异均有统计学意义。结论HNE可刺激气道上皮细胞产生大量ROS,柚皮素可抑制ROS的产生、下调ROS诱导的EGFR表达水平、并部分阻断EGFR磷酸化,从而抑制炎性刺激时气道黏液高分泌的形成。 展开更多

关键词 黏蛋白 人中性粒细胞弹性蛋白酶 表皮细胞生长因子受体 柚皮素 活性氧清除剂

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结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建及其联合人IL-12表达质粒诱导的小鼠细胞免疫应答观察 被引量：5

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作者 丁珍珍 杜先智 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期15-19,共5页

目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答。方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列... 目的:构建编码结核分枝杆菌Ag85A分泌蛋白重组真核表达质粒,研究其与hIL-12联合免疫小鼠后的细胞免疫应答。方法:(1)构建质粒:采用PCR法从H37Rv菌株中扩增Ag85A编码基因,用限制性内切酶消化后,插入克隆载体PMD20-T中,经酶切鉴定与序列测定证实后,以亚克隆法构建于真核表达载体PCDNA3.1的相应酶切位点。(2)动物实验:50只C57BL/6N小鼠随机分为:①Ag85A基因疫苗+hIL-12质粒组(联合免疫组);②重组Ag85A基因疫苗组;③卡介苗BCG组(阳性对照);④空载体组(阴性对照);⑤PBS组(空白对照)。基因疫苗、空载体和PBS经肌内注射法免疫各组小鼠,每隔3周免疫1次,共免疫3次,BCG组经尾部皮下注射1×106CFU BCG免疫1次,约0.3 ml/只。第三次免疫小鼠后28天,处死各组小鼠,分离脾细胞,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IFNγ-、IL-2、IL-4水平;乳酸脱氢酶释放法检测脾细胞杀伤活性;分离的脾细胞经TB-PPD刺激后,XTT比色法检测脾淋巴细胞增殖活性。结果:(1)成功构建结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗。(2)联合免疫组能诱导较强烈的抗原特异性Th1型细胞免疫应答,免疫小鼠脾细胞培养上清液IFN-r和IL-2水平显著高于Ag85A基因疫苗组,与BCG组相当,IL-4分泌减少;特异性CTL杀伤活性明显增强;淋巴细胞增殖活性也明显高于其他组别。结论:hlL-12表达质粒能够增强结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗所诱导的小鼠免疫应答。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 Ag85A基因 DNA基因疫苗 人白细胞介素12质粒 联合免疫

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Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌生物被膜的抗菌作用 被引量：4

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作者 聂晓红 周向东 黄长武 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第8期725-728,共4页

目的探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用。方法体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定。体外培养A549细胞,将pEGEP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧... 目的探讨Elafin重组气道上皮细胞对铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)生物被膜(biofilm,BF)的抗菌作用。方法体外平板法制备Pa生物被膜模型,用银染法及扫描电镜鉴定。体外培养A549细胞,将pEGEP-N1-Elafin重组到A549细胞,倒置荧光显微镜观察转染情况。采用猪胰弹性蛋白酶(NE组)、铜绿假单胞菌(Pa组)上清、大肠埃希杆菌(E．coli组)上清分别诱导孵育重组细胞24 h,另设转染未含Elafin基因空载体的A549细胞作为对照组。将成熟BF载体放入4组中继续孵育8 h,扫描电镜观察4组BF结构的变化,并于第8小时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细菌存活数。结果扫描电镜下观察到3个诱导组的BF结构较对照组的BF明显松散,尤以Pa组和NE组为甚;NE组[(3．238±0．316)×106 CFU／cm2]、Pa组细菌数量[(3．317±0．247)×106 CFU／cm2]均较对照组[(5．946±0,453)×106 CFU／cm2]显著减少(P<0．01),E．coli组细菌数量[(5．138±0．391)×106 CFU／cm2]较Pa组和NE组减少,差异均有统计学意义(P<0．01)。3个诱导组BF细菌清除率与对照组相比分别为45．6％、44．2％和13．6％。结论Elafin重组气道上皮细胞能有效清除Pa生物被膜中的细菌,而Pa产物也是Elafin表达的有效诱导物。 展开更多

关键词 ELAFIN 生物被膜 铜绿假单胞菌 气道上皮细胞 抗菌

原文传递

非小细胞肺癌nm23-H_1等位基因缺失与淋巴结转移关系的研究 被引量：4

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作者 梅同华 李长毅 黄爱龙 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期1266-1268,共3页

目的　探索非小细胞肺癌中nm2 3 H1 等位基因缺失(LOH)与淋巴结转移的关系。方法　Southern印迹杂交检测3 9例非小细胞肺癌组织及相应癌旁正常肺组织中nm2 3 H1 等位基因缺失的情况,并探索其与非小细肺癌淋巴结转移的关系。结果　nm2 ... 目的　探索非小细胞肺癌中nm2 3 H1 等位基因缺失(LOH)与淋巴结转移的关系。方法　Southern印迹杂交检测3 9例非小细胞肺癌组织及相应癌旁正常肺组织中nm2 3 H1 等位基因缺失的情况,并探索其与非小细肺癌淋巴结转移的关系。结果　nm2 3 H1 两条等位基因分别为7 6、2 3kb ,伴有淋巴结转移的肺癌nm2 3 H1 等位基因缺失发生率为48%(12 2 5 ) ,高于不伴淋巴结转移者8% (1 11) ,差异有显著统计学意义(P <0 0 5 )。结论　nm2 3 H1 等位基因缺失可能诱发非小细胞肺癌淋巴结转移,与其淋巴结转移关系密切,检测nm2 3 H1 等位基因缺失可作为判断非小细胞肺癌淋巴结转移有用的基因标志物之一。 展开更多

关键词 NM23基因 肺癌 肿瘤转移

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应用抑制消减杂交技术构建结核分枝杆菌差异表达基因消减cDNA文库 被引量：4

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作者 刘艳群 杜先智 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期61-65,共5页

目的:构建结核分枝杆菌H37Rv与H37Ra的差异表达基因消减文库,分离结核分枝杆菌差异表达cDNA片段。方法:利用抑制性消减杂交技术分析结核分枝杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra的基因组mRNA的表达差异,并进行两轮消减杂交和两次PCR,将第二次... 目的:构建结核分枝杆菌H37Rv与H37Ra的差异表达基因消减文库,分离结核分枝杆菌差异表达cDNA片段。方法:利用抑制性消减杂交技术分析结核分枝杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra的基因组mRNA的表达差异,并进行两轮消减杂交和两次PCR,将第二次PCR产物与pGEM-T载体相连,电击转化大肠杆菌E.coliDH5α进行文库扩增和蓝白斑筛选,RT-PCR鉴定差异表达文库。结果:以结核分枝杆菌强毒株H37Rv的cDNA为检测子的正相杂交和以弱毒株H37Ra的cDNA为检测子的反相杂交各自高表达或特异性表达的片段都得到选择性扩增,成功构建了差异表达cDNA文库A库和B库。所长出的菌落中90%为白色克隆,其中单一条带的克隆占75%和80%,片段大小集中在100～800bp之间。结论:利用SSH技术成功构建了结核分枝杆菌强毒株H37Rv和弱毒株H37Ra差异表达基因消减cDNA文库,该消减文库的建立为进一步筛选、克隆这两种菌株之间差异表达的新基因奠定了基础。 展开更多

关键词 分枝杆菌 结核 抑制性消减杂交 CDNA文库

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