高纯度白介素-3与假单胞菌外毒素融合蛋白的表达、纯化及质谱鉴定

1

作者 廖乐乐 娄世锋 +1 位作者 曾翰庆 白凤霞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期138-141,151,共5页

旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较... 旨在利用简单的表达纯化工艺,获得纯度较高、有活性的重组免疫毒素IL3-PE38KDEL并对其物理学及免疫学性质进行鉴定。利用PQE30-IL3-PE38KDEL/SG12009工程菌表达重组免疫毒素IL3-PE38KDEL,在提取包涵体后经一步强阳离子柱层析得到纯度较高的免疫毒素复性纯化产物,用Westenblotting、质谱、氨基测序等先进技术对产物鉴定。结果显示,发酵后目的蛋白表达量占总菌体的17.56%,经强阳离子柱层析纯化复性后的目的蛋白纯度达到90%以上,Western blotting、质谱、氨基测序结果均表明,纯化产物分子量为54.9kD且具有相应的免疫学活性,序列与预期序列完全一致。纯化复性方法对重组免疫毒素IL3-PE38KDEL的生物性质及纯度有较大影响,因此选择一种适当的纯化复性方法至关重要。 展开更多

关键词 重组免疫毒素 IL3-PE38KDEL 纯化复性 质谱鉴定

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IL3-PE38KDEL融合基因的构建及原核表达

2

作者 陈妤 娄世锋 邓建川 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1028-1031,共4页

目的:构建原核表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL,并诱导和鉴定其蛋白表达。方法:用PCR方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体PQE30-Linker中得到融合基因PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体... 目的:构建原核表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL,并诱导和鉴定其蛋白表达。方法:用PCR方法扩增所需要的目的片段IL3及PE38KDEL再通过酶切和连接的方法定向克隆到载体PQE30-Linker中得到融合基因PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL。重组载体经酶切,菌落PCR鉴定,DNA序列分析插入片段完全正确,转化感受态大肠杆菌SG13009,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析分子量大小,Western blot鉴定。结果:经限制性内切酶酶切鉴定,菌落PCR及DNA序列分析表明重组表达载体PQE30-IL3-Linker-PE38KDEL构建成功,IPTG诱导后得到了与预计分子量相符的目的蛋白。经Western blot鉴定在分子量57kD处有明显特异性条带,说明目的蛋白正确表达。结论:成功构建融合蛋白IL3-PE38KDEL,为后续的蛋白质纯化及功能研究奠定基础。 展开更多

关键词 融合基因 白介素3 PE38KDEL 原核表达 PQE30

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联氨基姜黄素对乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制

3

作者 王晓飞 张曦文 +2 位作者 田文霞 陈婷梅 张彦 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第10期1336-1339,共4页

目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞... 目的探讨联氨基姜黄素对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响及其机制。方法采用MTT法检测联氨基姜黄素对MCF-7细胞的抗增殖效应,Hochest33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞术分析细胞的周期分布和凋亡情况,Western blot检测MCF-7细胞中Bcl-2、Bax、Cyclin D1和Survivin蛋白的表达变化。结果联氨基姜黄素可抑制MCF-7细胞的增殖,IC50为2.56μmol/L,而姜黄素的IC50为21.22μmol/L;联氨基姜黄素染色24 h后,MCF-7细胞出现核荧光强度增强、颗粒状荧光等凋亡特征;凋亡细胞比率明显增加,并可阻滞细胞周期于G1期,且呈一定的剂量依赖性;联氨基姜黄素可使MCF-7细胞中Bcl-2、Cyclin D1、Survivin蛋白表达水平明显降低,而Bax表达增加。结论联氨基姜黄素具有抑制MCF-7细胞增殖、促进凋亡、阻滞细胞周期于G1期的作用,其机制可能与Bcl-2、Bax、Cyclin D1、Survivin蛋白的表达改变有关。 展开更多

关键词 姜黄素 乳腺癌 MCF-7细胞 细胞增殖 细胞凋亡

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Wnt3a协同BMP9调控间充质干细胞成骨分化及机制研究 被引量：7

4

作者 张晓 徐道晶 +2 位作者 林良波 梁熙 黄伟 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期565-569,共5页

目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通... 目的:探讨经典Wnt信号通路与骨形态发生蛋白9(Bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导间充质干细胞(Mes-enchymal stem cells,MSCs)成骨的相互影响及分子机制。方法:以小鼠骨髓来源MSCs C3H10T1/2为目的细胞,用Wnt3a上调经典Wnt信号通路,联合BMP9作用于细胞,通过碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)活性测定、钙盐沉积实验、real time PCR、免疫细胞化学染色等方法观测BMP9与经典Wnt信号通路联合后对MSCs成骨分化的影响。结果:Wnt3a明显促进了BMP9诱导的ALP活性的增加[F=264.962,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=7.19,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=16.36,P=0.000],同时也明显增加了成骨标志物骨钙蛋白(Osteocalcin,OC)[F=3 920.102,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=39.10,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=62.56,P=0.000]和骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)[F=1 935.824,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=40.88,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=56.42,P=0.000]的表达以及Runx2的mR-NA的表达[F=3 635.980,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-BMP9=79.37,P=0.000;t(BMP9+Wnt3a)-Wnt3a=86.96,P=0.000],并且还促进了钙盐沉积。结论:Wnt3a与BMP9相互协同诱导MSCs的骨向分化,其中成骨转录因子Runx2可能作为二者的交汇点起了重要作用。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白9 WNT3A 间充质干细胞 骨向分化

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RNA干扰沉默转化生长因子β1对大鼠移植肾上皮细胞转分化的作用 被引量：1

5

作者 夏雨果 吴小候 +3 位作者 尹志康 罗春丽 张家模 程洪林 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第44期3151-3155,共5页

目的探讨转化生长因子β1（TGF—β1）的RNA干扰质粒（shRNA．TGF-β1）对大鼠移植肾上皮细胞转分化的作用。方法将受体大鼠分为4组：假手术组、质粒组、空质粒组、单纯移植组；建立大鼠肾移植纤维化加快模型，以流体力学为基础的肾脏... 目的探讨转化生长因子β1（TGF—β1）的RNA干扰质粒（shRNA．TGF-β1）对大鼠移植肾上皮细胞转分化的作用。方法将受体大鼠分为4组：假手术组、质粒组、空质粒组、单纯移植组；建立大鼠肾移植纤维化加快模型，以流体力学为基础的肾脏基因转染方法转染质粒；分1、2、3个月收集肾脏标本；逆转录．PCR及Western印迹法检测TGF-β1、上皮钙黏蛋白（E．cadherin）的mRNA及蛋白表达；HE染色观察肾脏的病理变化；上皮钙黏蛋白及a肌动蛋白（a—SMA）免疫组化标记肾小管上皮细胞及成纤维母细胞。结果质粒组TGF-β1在3个检测时间段表达均受到抑制，明显低于空质粒组、单纯移植组[第3个月时TGF．B1mRNA分别为0．73±0．08比0．924-0．07、0．95±0．04（均P〈0．01）]；质粒组上皮钙黏蛋白表达高于空质粒组、单纯移植组[第3个月时上皮钙黏蛋白mRNA分别为0．39±0．11比0．15±0．07、0．17±0．06（均P〈0．01）；上皮钙黏蛋白蛋白分别为0．38±0．08比0．15±0．07、0．15±0．07（均P〈0．01）]；质粒组肾小管上皮细胞多于空质粒组、单纯移植组，成纤维母细胞少于空质粒组、单纯移植组；病理染色显示质粒组慢性炎症较轻，纤维母细胞较少，细胞外基质沉积较轻。结论质粒shRNA—TGFβ1能抑制移植肾肾小管上皮细胞转分化，其机制可能是抑制TGFβ1的表达、上调上皮钙黏蛋白的表达。 展开更多

关键词 肾移植 RNA干扰 转化生长因子Β1 肾脏纤维化

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c-Myc小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖凋亡的影响 被引量：3

6

作者 张巧琳 徐新 +1 位作者 刘琪 罗春丽 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第22期3049-3050,3068,共3页

目的探讨c-Myc小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT检测10058-F4对肾癌786-0细胞增殖的影响,FCM检测10058-F4对细胞周期及凋亡的作用,Western blot法进一步检测10058-F4对c-Myc及其靶基因p21、p27和Bcl-... 目的探讨c-Myc小分子抑制剂10058-F4对肾癌786-0细胞增殖、凋亡的影响。方法采用MTT检测10058-F4对肾癌786-0细胞增殖的影响,FCM检测10058-F4对细胞周期及凋亡的作用,Western blot法进一步检测10058-F4对c-Myc及其靶基因p21、p27和Bcl-2蛋白表达改变。结果 10058-F4可抑制786-0细胞增殖且呈浓度、时间依赖性,阻止细胞周期于G0/G1期,且可诱导细胞凋亡,能明显分别下调和上调c-Myc及其靶基因p21、p27及Bcl-2蛋白表达。结论 c-Myc小分子抑制剂10058-F4能抑制肾癌786-0细胞增殖并诱导其凋亡,并呈时间依赖性和浓度依赖性。 展开更多

关键词 C-MYC 10058-F4 肾癌 增殖 凋亡

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肾癌中hepaCAM外显子2异常甲基化与hepCAM表达的关系

7

作者 潘翠翠 罗春丽 +3 位作者 吴小候 杨淑哲 荀春华 蒲军 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期140-144,共5页

探讨肾癌中抑癌基因肝细胞粘附分子hepaCAM表达与hepaCAM外显子2 CpG岛甲基化状态的关系。采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR、RT-PCR法检测肾癌细胞株(786-0,RC-2)和43例肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAM外显子2的甲基化状态及hepaCAM mRN... 探讨肾癌中抑癌基因肝细胞粘附分子hepaCAM表达与hepaCAM外显子2 CpG岛甲基化状态的关系。采用甲基化敏感性限制性内切酶PCR、RT-PCR法检测肾癌细胞株(786-0,RC-2)和43例肾癌及相应的癌旁组织中hepaCAM外显子2的甲基化状态及hepaCAM mRNA的表达。786-0细胞hepaCAM表达水平低于RC-2细胞(P<0.05);786-0和RC-2细胞,前者存在hepaCAM外显子2甲基化,后者未检测到。肾癌组织中hepaCAM mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001);肾癌组织hepaCAM外显子2的甲基化率为34.9%,癌旁组织2.33%,两者差异有显著意义(P<0.001),但在临床病理参数中的差异无统计学意义(P>0.05)。hepaCAM外显子2甲基化的肾癌组织其mRNA的表达水平显著低于未甲基化的肾癌组织(P<0.05)。因此,肾癌hepaCAM外显子2的甲基化可能是导致hepaCAM表达下降或缺失的原因之一,hepaCAM甲基化的研究为探讨肾癌发生发展的机制提供了新的理论依据。 展开更多

关键词 肾癌 hepeCAM 甲基化

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shRNA干扰介导PLCε基因表达下调对膀胱癌T24细胞生长的影响

8

作者 罗春丽 郭永灿 +4 位作者 赵懿 欧俐苹 颜令 朴军 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1313-1316,共4页

目的:探讨shRNA干扰沉默PLCε基因对人膀胱癌T24细胞生长的影响。方法:体外构建PLCε基因的shRNA的重组质粒,Lipofectamine2000介导法转染T24细胞,采用RT-PCR方法检测特异性shRNA的重组质粒对PLCε基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRN... 目的:探讨shRNA干扰沉默PLCε基因对人膀胱癌T24细胞生长的影响。方法:体外构建PLCε基因的shRNA的重组质粒,Lipofectamine2000介导法转染T24细胞,采用RT-PCR方法检测特异性shRNA的重组质粒对PLCε基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shRNA的重组质粒对细胞增殖的作用,免疫细胞化学染色法检测T24细胞PCNA的表达,电镜观察细胞超微结构的改变。结果:shRNA的重组质粒能有效下调PLCε基因的表达,抑制率为78.01%,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞增殖活性受到明显抑制,与对照组比较其差异有统计学意义(P<0.01);细胞内PCNA含量明显低于空白对照组和阴性质粒组,其差异有统计学意义(P<0.01);细胞形态改变产生凋亡小体。结论:PLCε基因有望成为应用RNAi技术探索治疗膀胱癌潜在的靶基因。 展开更多

关键词 膀胱癌 PLCε基因 RNA干扰 细胞增殖 增殖细胞核抗原

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MNU诱导大鼠膀胱癌的机制研究 被引量：1

9

作者 陈刚 张尧 +2 位作者 敬鹏 罗春丽 吴小候 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1665-1667,共3页

目的:研究N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导膀胱癌发生的机制。方法:60只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组用MNU2 mg/次,2周1次定期作膀胱内灌注,共4次。对照组膀胱内灌以生理盐水0.2 ml/次,每2周1次,共4次。第... 目的:研究N-甲基-N-亚硝基脲(N-methyl-N-nitrosourea,MNU)诱导膀胱癌发生的机制。方法:60只SD大鼠随机分成实验组和对照组。实验组用MNU2 mg/次,2周1次定期作膀胱内灌注,共4次。对照组膀胱内灌以生理盐水0.2 ml/次,每2周1次,共4次。第9周未处死大鼠,随即取大鼠膀胱放入-80℃液氮中保存。采用免疫组化检测H-Ras蛋白的表达,RT-PCR检测磷脂酶Cε(PLCε)mRNA的表达。结果:实验组50只SD大鼠36只成瘤,4只大鼠死亡,成瘤率为81.82%。对照组10只大鼠膀胱未见明显变化。免疫组化检测实验组36只成瘤大鼠中32只H-Ras蛋白阳性。对照组大鼠膀胱组织中H-Ras蛋白表达阴性。RT-PCR,检测实验组和对照组大鼠膀胱PLCε的表达。实验组36只成瘤大鼠PLCε阳性,对照组PLCε表达阴性。结论:MNU可诱导大鼠膀胱黏膜发生癌变,其可能机制为引起H-Ras基因突变并且过表达,同时引起PLCεmRNA表达增加。 展开更多

关键词 N-甲基-N-亚硝基脲 膀胱癌 机制 H-RAS PLCε

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994例HIV感染者的临床分布及HIV和HCV合并感染的统计分析 被引量：5

10

作者 李娅 陈斌 +4 位作者 易富 农树红 梁凯 蔡敏琪 何宇佳 《国际检验医学杂志》 CAS 2013年第18期2474-2475,共2页

目的了解该院2009~2012年检出人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者及HIV和丙型肝炎病毒（HCV）合并感染的临床分布,为预防HIV及HCV提供理论依据。方法收集2009年1月至2012年12月该院收治的HIV感染者及及HIV和HCV合并感染者的临床资料,根据性... 目的了解该院2009~2012年检出人类免疫缺陷病毒（HIV）感染者及HIV和丙型肝炎病毒（HCV）合并感染的临床分布,为预防HIV及HCV提供理论依据。方法收集2009年1月至2012年12月该院收治的HIV感染者及及HIV和HCV合并感染者的临床资料,根据性别、年龄进行分组对HIV合并HCV感染的情况进行统计分析。结果统计时间内共收集到HIV感染者994例,男性685例,女性309例;其中合并HCV的感染率为18.01%（179/994）,30~〈40岁年龄组HIV合并HCV感染的发生率最高,且男性组合并感染的发生率高于女性组。结论 HIV和HCV合并感染的发生率较高,临床上应重视这种合并感染的诊断和治疗。 展开更多

关键词 丙型肝炎病毒 人类免疫缺陷病毒 感染率

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cAMP-PKA-CREB信号通路在骨形态发生蛋白9诱导小鼠间充质干细胞成骨分化中的作用 被引量：4

11

作者 宋涛 刘跃亮 +3 位作者 赵艳芳 王文娟 徐静 罗进勇 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2014年第2期189-193,196,共6页

目的探讨cAMP-PKA-CREB信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导小鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C3H10T1/2成骨分化过程中的作用及其机制。方法将C3H10T1/2细胞分别加入不同浓度的cAMP-PKA-C... 目的探讨cAMP-PKA-CREB信号通路在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导小鼠间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C3H10T1/2成骨分化过程中的作用及其机制。方法将C3H10T1/2细胞分别加入不同浓度的cAMP-PKA-CREB信号通路抑制剂H89(1、2.5、5和10μmol/L),检测其对碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响;通过ALP定量和钙盐沉积试验分别检测H89对BMP9诱导C3H10T1/2细胞早期和晚期成骨分化的影响;经Western blot法检测H89对C3H10T1/2细胞中磷酸化CREB、骨钙素(Osteocalcin,OCN)和成骨关键转录因子Runx2表达水平的影响;通过Wentern blot及荧光素酶活性的检测,观察H89对经典信号通路BMPs-smad1/5/8的影响。结果随着H89浓度的增加,对BMP9诱导的C3H10T1/2细胞ALP的抑制作用明显增强(P<0.05),且呈剂量依赖性;ALP定量和钙盐沉积试验结果表明,H89可明显抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞早期及晚期成骨分化;H89可显著抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中磷酸化CREB、OCN及Runx2蛋白的表达(P<0.05),与AdBMP9组比较,H89对经典BMPs-smad1/5/8信号通路无明显影响(P>0.05)。结论阻断cAMP-PKA-CREB信号通路可抑制BMP9诱导的MSCs C3H10T1/2的成骨分化,为BMP9的临床应用奠定了理论基础。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白质 信号通路 间充质干细胞 分化

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Runx1促进BMP9诱导的间充质干细胞MEFs的成骨分化 被引量：4

12

作者 吉彩霞 刘晓骅 +2 位作者 徐丽 董超群 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期10-17,共8页

目的:研究Runx1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化中的作用。方法:用BMP9腺病毒感染MEFs细胞,利用RT-PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白质水... 目的:研究Runx1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblasts,MEFs)成骨分化中的作用。方法:用BMP9腺病毒感染MEFs细胞,利用RT-PCR和Western blot分别在mRNA和蛋白质水平检测Runx1的内源性表达;构建过表达Runx1的重组腺病毒Ad-Runx1,并在mRNA和蛋白质水平验证Ad-Runx1的效果;用Ad-Runx1和BMP9条件培养基共处理MEFs,检测成骨早期指标碱性磷酸酶(ALP)染色和活性,茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积;RT-PCR和Western blot分别检测成骨关键转录因子Runx2在mRNA和蛋白质水平的变化。结果:Ad-BMP9处理MEFs细胞后,可使Runx1在mRNA和蛋白质水平表达上调;构建的Ad-Runx1处理MEFs后,可使Runx1在mRNA和蛋白质水平表达上调;Ad-Runx1处理BMP9诱导的MEFs细胞后,增强了ALP活性和钙盐沉积以及Runx2在mRNA和蛋白质水平的表达。结论:Runx1可以促进BMP9诱导的间充质干细胞MEFs的成骨分化。 展开更多

关键词 MEFS RUNX1 骨形态发生蛋白9 成骨分化

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DLX1对BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化的影响 被引量：1

13

作者 徐丽 吉彩霞 +2 位作者 刘晓骅 喻婷婷 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第10期8-15,共8页

目的:分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR和Western blot检测DLX1表达变化;随后,利用重组腺病... 目的:分析和确认转录因子DLX1在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)诱导的间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2细胞,RT-PCR和Western blot检测DLX1表达变化;随后,利用重组腺病毒技术分别过表达DLX1和RNA干扰(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表达,并利用碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、钙盐沉积实验(茜素红染色),免疫细胞化学检测骨钙素(osteocalcin,OCN)表达和裸鼠皮下异位成骨实验分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化的影响。荧光素酶报告基因实验和Western blot分析DLX1对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞Smad1/5/8信号途径的影响。结果:BMP9可以促进C3H10T1/2细胞中DLX1基因和蛋白表达水平;过表达DLX1在体外可进一步促进BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积以及OCN的表达,过表达DLX1亦可促进BMP9诱导的裸鼠皮下异位成骨;反之,RNAi抑制DLX1表达后,由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的ALP活性、钙盐沉积、OCN表达和裸鼠皮下异位成骨均相应受到抑制。过表达DLX1可进一步增强BMP9诱导的C3H10T1/2细胞中Smad/1/5/8的转录调控活性,RNAi降低DLX1表达则可抑制BMP9诱导Smad/1/5/8的转录调控活性。但是,无论过表达DLX1和RNAi降低DLX1表达均不会对BMP9诱导的Smad/1/5/8磷酸化造成影响。结论:DLX1可以调节BMP9诱导的间充质干细胞C3H10T1/2细胞成骨分化,其调节作用可能是通过影响Smad1/5/8信号的转录调控活性而实现的。 展开更多

关键词 间充质干细胞 骨形态发生蛋白 同源异形盒基因 DLX1 成骨分化

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BMP2诱导C3H10细胞成骨分化的TGFβ-Ⅰ型受体的体外分析

14

作者 张燕 翁亚光 +2 位作者 文巍 冯涛 罗进勇 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期146-149,共4页

筛选和分析与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。利用显性负性突变型TGF-βⅠ型受体竞争抑制配体功能的特性,运用碱性磷酸酶定量测定、Real time PCR等方法,初步筛选出可能与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化... 筛选和分析与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。利用显性负性突变型TGF-βⅠ型受体竞争抑制配体功能的特性,运用碱性磷酸酶定量测定、Real time PCR等方法,初步筛选出可能与BMP2诱导间充质干细胞C3H10成骨分化有关的的TGF-βⅠ型受体,随后运用RNA干扰的方法抑制相应TGF-βⅠ型受体的表达,进一步证实相关TGF-βⅠ型受体与BMP2发挥诱导成骨活性的关系。结果证实,显性负性突变的ALK3和ALK6能够抑制BMP2诱导的C3H10细胞成骨分化;RNA干扰抑制ALK3或(和)ALK6表达后,BMP2诱导C3H10细胞向成骨分化的趋势受到抑制。因此,ALK3和ALK6是与BMP2诱导C3H10细胞成骨分化有关的TGF-βⅠ型受体。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白TGF-β受体 间充质干细胞信号转导 RNA干扰

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p38蛋白激酶参与BMP9诱导的C3H10T1/2细胞成骨分化 被引量：5

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作者 徐道晶 王锦 +3 位作者 何娟文 胡晶 翁亚光 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期15-21,共7页

目的:初步分析丝裂原活化蛋白激酶p38在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用。方法:利用BMP9重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,Western blot检测p38激酶总蛋白表达水平和磷酸化水平。p38的特异性抑制剂SB203580抑制p38活性或... 目的:初步分析丝裂原活化蛋白激酶p38在BMP9诱导间充质干细胞C3H10T1/2成骨分化过程中的作用。方法:利用BMP9重组腺病毒感染C3H10T1/2细胞,Western blot检测p38激酶总蛋白表达水平和磷酸化水平。p38的特异性抑制剂SB203580抑制p38活性或RNA干扰抑制p38表达后,分析ALP活性变化,利用茜素红S染色检测钙盐沉积,Real Time PCR检测Smad6和Smad7的mRNA表达水平,动物实验确认在RNA干扰p38蛋白激酶后,对于BMP9诱导的C3H10T1/2细胞异位成骨的影响。结果:BMP9不影响p38激酶的蛋白表达水平,但却可以促进p38激酶的磷酸化;p38抑制剂SB203580可剂量依赖性地抑制由BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,RNA干扰导致p38基因沉默同样也可抑制BMP9诱导的ALP活性,但抑制效应不及SB203580;SB203580还能够抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞的钙盐沉积;BMP9的靶基因Smad6和Smad7的mRNA表达也能被SB203580所抑制;干扰p38蛋白激酶可抑制BMP9诱导的C3H10T1/2细胞在裸鼠皮下异位成骨。结论:p38蛋白激酶参与了BMP9诱导的C3H10T1/2成骨分化。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白9 间充质干细胞 P38 成骨分化

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