TGF-β信号通路抑制剂LY364947对急性髓系白血病细胞增殖、凋亡和侵袭的影响 被引量：12

1

作者 杨丽媛 汪路 +5 位作者 唐雨婷 陶瑶 雷力 敬一佩 蒋雪坷 张伶 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第2期256-264,共9页

该文旨在探讨抑制TGF-β信号通路对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞体外增殖、凋亡和侵袭能力的影响。使用不同浓度TGF-β信号通路抑制剂LY364947处理AML细胞系(KG1a、OCI-AML3)后,采用CCK-8实验检测细胞体外增殖能力... 该文旨在探讨抑制TGF-β信号通路对人急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞体外增殖、凋亡和侵袭能力的影响。使用不同浓度TGF-β信号通路抑制剂LY364947处理AML细胞系(KG1a、OCI-AML3)后,采用CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况; Western blot检测细胞周期调控因子Cyclin D1/p21、凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax以及上皮细胞间质转化相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和vimentin的表达; Transwell实验测定AML细胞迁移及侵袭能力的变化。结果显示:LY364947作用后,白血病细胞生长明显受抑制;细胞周期阻滞在G1期,伴有Cyclin D1表达下调和p21表达上调;细胞凋亡率增加,同时细胞抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平下降,促凋亡蛋白Bax表达增高;细胞体外迁移和侵袭能力减弱。此外, E-cadherin表达增高, N-cadherin和vimentin表达下降。该研究结果提示,抑制TGF-β信号通路能够抑制白血病细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞迁移及侵袭能力。 展开更多

关键词 急性髓系白血病 TGF-Β 抑制剂 增殖 凋亡 侵袭

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miR-145通过下调PLCε抑制膀胱癌EMT和迁移及其机制研究 被引量：10

2

作者 赵燕 郝燕妮 +3 位作者 刘南京 李婷 吴小候 罗春丽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期27-36,共10页

目的:探讨miR-145调控PLCε对膀胱癌细胞T24上皮间质转化(EMT)和迁移的影响及可能的分子机制。方法:(1)腺病毒感染T24细胞,划痕实验和Transwell检测细胞的迁移能力;RTPCR、Western blot分别检测PLCε及EMT相关分子的表达;为探究其分子机... 目的:探讨miR-145调控PLCε对膀胱癌细胞T24上皮间质转化(EMT)和迁移的影响及可能的分子机制。方法:(1)腺病毒感染T24细胞,划痕实验和Transwell检测细胞的迁移能力;RTPCR、Western blot分别检测PLCε及EMT相关分子的表达;为探究其分子机制,Western blot检测GSK-3β磷酸化(Ser9位点)和Snail的表达情况。(2)利用生物信息学技术预测可能调控PLCε的miRNA,结合文献报道的膀胱癌microRNA表达谱结果筛选出miR-145;转染miR-145 mimics至T24,q PCR检测miR-145、PLCε的表达,Western blot检测PLCε的表达。(3)转染miR-145 mimics,Western blot检测EMT相关分子及p-GSK-3β、Snail;划痕实验、Transwell检测过表达miR-145后细胞的迁移能力。结果:(1)干扰PLCε表达能显著抑制细胞的迁移,同时,使T24细胞中E-cadherin表达上调,N-cadherin和Vimentin表达下调;干扰PLCε后,GSK-3β磷酸化(Ser9位点)水平下降,Snail表达降低。(2)转染miR-145 mimics可使T24细胞中miR-145表达增高,且明显抑制T24细胞中PLCε的表达。(3)在T24中过表达miR-145,细胞迁移能力显著下降,EMT标志分子的表达情况与沉默PLCε结果一致。同时,与阴性对照组相比,转染miR-145 mimics组p-GSK-3β和Snail表达显著减少。结论:PLCε通过GSK-3β/Snail信号通路促进膀胱癌细胞T24发生EMT及迁移,miR-145可以逆转PLCε诱导膀胱癌EMT的发生,从而阻止膀胱癌细胞的迁移。 展开更多

关键词 PLCε MIR-145 膀胱癌 上皮间质转化 迁移

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shPLCε通过下调CDC25A抑制T24细胞的瓦伯格效应 被引量：4

3

作者 郝燕妮 李婷 +5 位作者 范佳鑫 李罗 牛凌芳 欧俐苹 吴小候 罗春丽 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期33-39,共7页

目的：探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法：（1）慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子... 目的：探讨shPLCε对膀胱癌T24细胞瓦伯格效应的影响及其相关机制。方法：（1）慢病毒感染T24细胞,葡萄糖测定试剂盒和乳酸测试盒分别检测细胞葡萄糖利用和乳酸生成情况;q-PCR、Western blot分别检测PLCε、CDC25A及瓦伯格效应相关分子的表达。（2）转染sh CDC25A质粒,q-PCR、Western blot检测CDC25A的表达;Western blot检测瓦伯格效应相关分子的表达情况。结果：（1）慢病毒干扰PLCε后,T24细胞利用葡萄糖和生成乳酸的能力降低,同时下调CDC25A、PKM2、GLUT1、LDHA的表达。（2）干扰CDC25A的表达后可抑制PKM2、GLUT1、LDHA的表达。结论：shPLCε通过下调关键分子CDC25A的表达抑制膀胱癌T24细胞的瓦伯格效应,从而为膀胱癌的治疗提供了新思路。 展开更多

关键词 PLCε CDC25A 膀胱癌 瓦伯格效应

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5-氮杂胞嘧啶核苷联合hepaCAM腺病毒通过抑制p-AKT诱导膀胱癌细胞T24凋亡 被引量：4

4

作者 王晓荣 杨雪 +3 位作者 王胤 吴小候 唐敏 罗春丽 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期762-767,共6页

目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色... 目的:研究5-氮杂胞嘧啶核苷(5-azacytidine,azac)联合肝细胞黏附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)腺病毒对膀胱癌细胞T24凋亡的影响及可能机制的探讨。方法:7种不同因素分别处理培养的膀胱癌细胞T24,hoechst 33258染色检测各处理组细胞凋亡率,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞早期凋亡率,RT-PCR检测hepaCAM及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,bcl-2)mRNA的表达,Western blot检测hepaCAM、p-AKT、total-AKT、bcl-2蛋白的表达。结果:hoechst 33258显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞凋亡率为(45.21±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(15.60±0.02)%和azac组(26.30±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.008);FCM显示,azac联合hepaCAM腺病毒组细胞早期凋亡率为(16.05±0.06)%,明显高于hepaCAM腺病毒组(3.90±0.02)%和azac组(9.67±0.02)%,差异有统计学意义(P=0.002,P=0.043);RT-PCR显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac与hepaCAM腺病毒联用可以上调hepaCAM mRNA的表达(P=0.004,P=0.000),下调bcl-2 mRNA的表达,差异有统计学意义(P=0.026,P=0.030);Western blot显示,与单独hepaCAM腺病毒组和azac组相比,azac联合hepaCAM腺病毒组可上调hepaCAM蛋白的表达(P=0.003,P=0.003),同时下调p-AKT(P=0.001,P=0.005)和bcl-2(P=0.000,P=0.002)蛋白的表达,差异有统计学意义。结论:azac联合hepaCAM腺病毒可能通过抑制p-AKT的磷酸化水平加速诱导T24细胞凋亡,可为膀胱癌的治疗提供新的思路。 展开更多

关键词 5-氮杂胞嘧啶核苷 肝细胞黏附分子 膀胱癌细胞T24 P-AKT 细胞凋亡

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过表达INPP4B对人急性髓系白血病THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其潜在机制 被引量：3

5

作者 金红君 杨丽媛 +6 位作者 汪路 唐雨婷 陶瑶 黄圣博 敬一佩 杨再林 张伶 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期133-138,共6页

目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4... 目的:探讨二型磷脂酰肌醇4磷酸酶(inositol polyphosphate 4-phosphatase typeⅡ,INPP4B)对人急性髓系白血病THP-1细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将携带INPP4B的重组质粒载体p EAK-Flag/INPP4B转染人THP-1细胞系(Flag-INPP4B组),同时设立未处理组为对照(Mock组)。采用qRT-PCR和Western blot分别检测实验组和对照组细胞INPP4B mRNA和蛋白的表达水平;CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2(Bcl-2-associated X/B-cell lymphoma-2,Bax/Bcl-2)以及磷脂酰肌醇-3激酶(phosphoinositide-3 kinase,PI3K)下游信号分子蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/AKT)和血清糖皮质激素调节激酶-3(serum and glucocorticoid regulated kinase-3,SGK3)蛋白的磷酸化水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞内PI(3,4)P2和PI(3)P的水平。结果:INPP4B重组质粒载体转染THP-1细胞后,INPP4B的mRNA和蛋白水平均明显上升(mRNA:t=9.724,P=0.000;蛋白:t=19.520,P=0.000),提示在THP-1细胞中成功过表达INPP4B。与Mock组相比,Flag-INPP4B组细胞体外增殖能力明显增强(F=31.870,P=0.000)。同时,过表达INPP4B可明显降低细胞凋亡率(t=6.999,P=0.002);使促凋亡蛋白Bax的表达水平下降(t=24.710,P=0.000)、抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平增加(t=6.398,P=0.003)。此外,过表达INPP4B可增强THP-1细胞SGK3蛋白的磷酸化水平(t=10.470,P=0.000),而对AKT蛋白的磷酸化水平无明显影响(t=0.285,P=0.790)。最后,过表达INPP4B还可明显降低THP-1细胞中PI(3,4)P2的水平(t=4.515,P=0.011),同时明显升高PI(3)P的水平(t=5.681,P=0.005)。结论:本研究结果表明过表达INPP4B可促进人急性髓系白血病THP-1细胞的体外增殖并抵抗凋亡,其机制可能与INPP4B介导激活PI3K/SGK3信号通路有关,这提示INPP4B可作为急性髓系白血病治疗的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 二型磷脂酰肌醇4磷酸酶 白血病 增殖 凋亡 PI3K信号通路 血清糖皮质激素调节激酶-3

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hepaCAM通过下调p-FOXO1/PCNA调节人膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力 被引量：3

6

作者 唐敏 赵燕 +3 位作者 陈娥 刘南京 吴小候 罗春丽 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期756-762,共7页

探讨肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepa CAM)对膀胱癌细胞BIU-87增殖活力的影响以及其调节机制。将BIU-87细胞分为对照组、空载组、hepa CAM组、LY294002组及hepa CAM与LY294002联用组,噻唑蓝法(methyl thiazolyl ... 探讨肝细胞粘附分子(hepatocyte cell adhesion molecule,hepa CAM)对膀胱癌细胞BIU-87增殖活力的影响以及其调节机制。将BIU-87细胞分为对照组、空载组、hepa CAM组、LY294002组及hepa CAM与LY294002联用组,噻唑蓝法(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞的增殖抑制率;Real-time PCR检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达;Western blot法检测p-FOXO1的表达;同时用LY294002处理BIU-87细胞后Western Blot检测p-FOXO1、PCNA的表达。结果显示,单独运用hepa CAM过表达腺病毒或LY294002均能够明显抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力,hepa CAM过表达腺病毒与LY294002联用更加显著的增强了单独作用的抑制效果(p<0.05);Western Blot显示,hepa CAM基因的过表达使p-FOXO1的表达量显著降低(p=0.001);hepa CAM过表达腺病毒与LY294002联用后,与hepa CAM或LY294002分别作用相比,p-FOXO1(p=0.014,p=0.047)和PCNA(p=0.002,p=0.004)的表达量降低明显;Realtime PCR结果显示,LY294002处理BIU-87细胞后,PCNA的表达明显减低(p=0.003),加入hepa CAM过表达腺病毒后更为显著地增强LY294002对PCNA的抑制作用(p=0.001)。本课题得出结论,hepa CAM基因过表达后通过下调p-FOXO1从而抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖活力,此作用与PCNA的表达量下调有关。 展开更多

关键词 肝细胞粘附分子 BIU-87细胞 FOXO1 增殖细胞核抗原

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Shh信号参与调控BMP9诱导的间充质干细胞成骨分化 被引量：3

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作者 李丽 蒙秋蓉 +4 位作者 郭琦 王岚 商蕾 欧欣颖 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期9-15,共7页

目的:观察sonic hedgehog(Shh)信号通路在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞(MSCs)C3H10T1/2和C2C12成骨分化中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:Shh信号通路抑制剂Cyclopamine和激活剂Purmorphamine以及过表达Shh腺病毒... 目的:观察sonic hedgehog(Shh)信号通路在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导的小鼠间充质干细胞(MSCs)C3H10T1/2和C2C12成骨分化中的作用,并初步探讨其作用机制。方法:Shh信号通路抑制剂Cyclopamine和激活剂Purmorphamine以及过表达Shh腺病毒分别作用于BMP9处理的C3H10T1/2和C2C12细胞,碱性磷酸酶(ALP)检测早期成骨指标ALP,茜素红S染色检测晚期成骨指标钙盐沉积,RT-PCR检测Shh信号相关基因以及成骨关键转录因子的表达,Western blot检测Shh的表达,荧光素酶报告基因检测Smad1/5/8的转录调控活性。结果:BMP9促进Shh信号相关基因的表达,激活Shh信号可增强BMP9诱导的C3H10T1/2和C2C12细胞早晚期成骨分化并促进了BMP9诱导的Smad荧光素酶活性,抑制Shh信号后作用相反。结论:激活Shh信号通路可促进BMP9诱导的小鼠MSCs成骨分化,抑制其活性后作用相反。 展开更多

关键词 Sonic HEDGEHOG 骨形态发生蛋白9间充质干细胞 成骨分化

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探索“雏鹰计划”在培养青少年医学科普素质中的应用价值 被引量：2

8

作者 张明昊 蔡晓钟 +3 位作者 金绍众 李雪 杨蕾 张伶 《检验医学与临床》 CAS 2017年第1期149-150,共2页

"雏鹰计划"是由重庆市教委主管,依靠高校与普通高中对接合作,探索对高中生进行科学、科普素质培养的基础教育改革创新项目。本文以医学科普教育为案例,阐述项目进程中高中学员经历的生物安全通识培训、红细胞血型鉴定操作、... "雏鹰计划"是由重庆市教委主管,依靠高校与普通高中对接合作,探索对高中生进行科学、科普素质培养的基础教育改革创新项目。本文以医学科普教育为案例,阐述项目进程中高中学员经历的生物安全通识培训、红细胞血型鉴定操作、无偿献血意识培养以及互动交流的效果和意义。 展开更多

关键词 雏鹰计划 医学教育 生物安全 血型鉴定 无偿献血

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过表达突变的NPM1基因对THP-1白血病细胞增殖和凋亡的影响 被引量：2

9

作者 覃凤娴 邵会媛 +4 位作者 陈先春 谭诗 张慧娟 肖玲 张伶 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2012年第3期251-256,共6页

目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1... 目的探讨核仁磷酸蛋白基因(NPM1)突变对白血病细胞增殖和凋亡的影响。方法将携带NPM1 A型突变(NPM1 mA)的重组质粒载体pEGFPC1-NPM1 mA转染白血病THP-1细胞系,构建稳定表达NPM1 mA蛋白的细胞株(THP-1 mA),同时设立空载体转染组(THP-1 C1)和未处理组(THP-1)为对照。MTT实验观察细胞增殖;流式细胞术分析细胞周期和凋亡;RT-PCR和Western blot分别检测细胞凋亡相关蛋白(BAX和BCL-2)mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比较,实验组THP-1 mA细胞体外增殖能力明显增强(P<0.05),S期细胞比例明显增高(P<0.05),G1期细胞比例显著减低(P<0.05);而3组细胞凋亡率无显著差异,BAX,BCL-2的mRNA和蛋白表达以及BAX/BCL-2比值亦未见明显改变。结论 NPM1突变基因能够促进白血病细胞的体外增殖能力,而对白血病细胞凋亡无显著影响。 展开更多

关键词 NPM1突变 白血病 THP-1细胞系 增殖 凋亡

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SATB2促进BMP9诱导C2C12细胞的成骨分化 被引量：2

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作者 冯巧灵 王玉凤 +2 位作者 刘晓骅 吉彩霞 罗进勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期20-26,共7页

目的:研究特异AT序列结合蛋白2(Special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C2C12成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-B... 目的:研究特异AT序列结合蛋白2(Special AT-rich sequence-binding protein 2,SATB2)在骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins 9,BMP9)诱导的间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)C2C12成骨分化中的作用。方法:首先用Ad-BMP9感染C2C12细胞,RT-PCR检测SATB2在基因水平上的表达变化,Western blot检测SATB2在蛋白水平上的变化;构建过表达SATB2重组腺病毒Ad-SATB2,感染C2C12细胞后,Western blot验证Ad-SATB2表达情况;用AdSATB2处理BMP9诱导的C2C12细胞,碱性磷酸酶(ALP)活性和染色检测成骨早期ALP的变化,茜素红S染色检测成骨晚期指标钙盐沉积的变化。结果:Ad-BMP9处理C2C12细胞后,比对照组SATB2在基因水平和蛋白水平上表达量上调;Ad-SATB2可以在细胞中成功表达SATB2蛋白;用Ad-SATB2处理BMP9诱导的C2C12细胞后,ALP以及钙盐的沉积与对照比较均上调。结论:SATB2可以促进BMP9诱导的间充质干细胞C2C12的成骨分化。 展开更多

关键词 骨形态发生蛋白9 特异AT序列结合蛋白2 C2C12细胞

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SDF-1/CXCR4在BMP9介导C2C12细胞成骨分化过程中的作用研究 被引量：2

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作者 刘晨 杨丹丹 +5 位作者 白慧丽 李宝林 何方 张汝益 严树涓 施琼 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期154-162,共9页

为了观察SDF-1/CXCR4信号轴在BMP9促C2C12细胞成骨分化过程中的作用,通过重组腺病毒过表达BMP9,检测对C2C12细胞中SDF-1及受体CXCR4 mRNA和蛋白表达水平的影响;同时利用重组腺病毒或中和抗体干扰SDF-1/CXCR4,与BMP9先后作用于C2C12细胞... 为了观察SDF-1/CXCR4信号轴在BMP9促C2C12细胞成骨分化过程中的作用,通过重组腺病毒过表达BMP9,检测对C2C12细胞中SDF-1及受体CXCR4 mRNA和蛋白表达水平的影响;同时利用重组腺病毒或中和抗体干扰SDF-1/CXCR4,与BMP9先后作用于C2C12细胞,通过定量测定碱性磷酸酶(ALP)、染色测定ALP表达、免疫细胞化学测定骨钙蛋白(OCN)表达、茜素红S染色测定钙盐沉积、Real-time PCR检测成骨相关转录因子Runx2和Osx的表达、Western blot检测成骨分化信号通路MAPK和Smad的变化。结果显示,BMP9能明显抑制C2C12细胞中SDF-1、CXCR4的表达(P<0.01),且具有剂量和时间依赖性;预先干扰SDF-1/CXCR4能明显影响由BMP9介导的早、中期成骨标志物ALP、OCN及早期转录因子Runx2、Osx的表达(P<0.01)和MAPK、Smad信号通路相关蛋白的变化(P<0.05);外源性SDF-1并不能影响晚期成骨标志物钙盐沉积。提示SDF-1/CXCR4信号轴在由BMP9介导的C2C12细胞成骨分化早、中期过程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 SDF—1 CXCR4 BMP9 成骨分化 C2C12细胞

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microRNA-708-5p对骨肉瘤细胞凋亡与迁移的作用及机制 被引量：1

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作者 丰天宇 朱中凯 +6 位作者 王豪 毛筱涵 刘丹 袁仁杰 刘跃华 左国伟 张明昊 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2019年第3期446-455,共10页

该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、H... 该文主要研究microRNA-708-5p(miR-708-5p)在骨肉瘤细胞中的表达及对细胞凋亡、迁移的影响及机制。该研究利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNA; qRT-PCR(quantitative Realtime PCR)检测miR-708-5p在骨肉瘤细胞株MG63和正常细胞hMSC、HS-5中的表达;通过阳离子脂质体介导法过表达miR-708-5p;分别用Hoechst 33258染色、流式细胞术、划痕实验、Transwell法检测凋亡和迁移;通过qRT-PCR检测miR-708-5p、ZEB1(Zinc?nger E-box binding homeobox 1)的RNA水平; Western blot检测E-cadherin、N-cadherin、ZEB1蛋白表达;利用TargetScan和双荧光素酶报告实验预测并验证miR-708-5p与ZEB1的靶向关系。结果显示, miR-708-5p在MG63中表达下调,恢复miR-708-5p表达水平可诱导MG63细胞凋亡并抑制迁移。Western blot结果显示,过表达miR-708-5p可上调E-cadherin,下调N-cadherin和ZEB1。双荧光素酶报告实验显示, miR-708-5p可直接靶向ZEB1。敲低ZEB1可抑制MG63迁移。该项研究结果表明, miR-708-5p可诱导骨肉瘤细胞凋亡,且通过靶向ZEB1来抑制迁移。 展开更多

关键词 miRNA-708-5p 骨肉瘤 凋亡 迁移 ZEB1

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5-氮-2'-脱氧胞苷逆转膀胱癌细胞hepaCAM基因的表达及对其生长的抑制 被引量：1

13

作者 刘琪 潘翠翠 +3 位作者 徐新 张彦懿 吴小候 罗春丽 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2013年第1期55-59,共5页

目的研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)逆转hepaCAM表达及抑制膀胱癌细胞的生长。方法 MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测hepaCAM mRNA的表达。结果在T24细胞中,3.0和10.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.3... 目的研究5-氮-2-脱氧胞苷(5-aza-CdR)逆转hepaCAM表达及抑制膀胱癌细胞的生长。方法 MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测hepaCAM mRNA的表达。结果在T24细胞中,3.0和10.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.3和1.0μmol/L 5-aza-CdR(P<0.05),在BIU-87细胞中,5.0μmol/L5-aza-CdR药物浓度的抑制率明显高于0.1和0.5μmol/L(P<0.05),并且药物处理细胞72 h的抑制率明显高于24和48 h(P<0.05);5-aza-CdR处理细胞后,T24和BIU-87细胞凋亡数明显增加(P<0.05);并可逆转hepaCAMmRNA表达。结论 5-aza-CdR可使hepaCAM基因重新表达,并通过诱导凋亡而抑制膀胱癌细胞的生长。 展开更多

关键词 5-AZA-CDR hepaCAM 膀胱癌 细胞凋亡

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NPM1基因突变调控THP-1细胞体外增殖和侵袭及其机制 被引量：1

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作者 苗宗玉 吴红 +4 位作者 邵会媛 李倩 邢艳艳 张伶 孙成铭 《中华生物医学工程杂志》 CAS 2013年第3期182-186,共5页

目的探讨NPM1基因突变对THP．1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制。方法将THP．1细胞分为THP-1．mA组、空载体转染组和未处理组，THP-1．mA组使用携带人NPMl-mA的重组质粒pEGFPCI．NPMl．mA转染THP-1细胞，建立稳定表达NPM1．mA的白血... 目的探讨NPM1基因突变对THP．1细胞体外增殖和侵袭的影响及其机制。方法将THP．1细胞分为THP-1．mA组、空载体转染组和未处理组，THP-1．mA组使用携带人NPMl-mA的重组质粒pEGFPCI．NPMl．mA转染THP-1细胞，建立稳定表达NPM1．mA的白血病细胞系（THP-1-mA）；空载体转染组使用空载体质粒pEGFPCI转染THP-1细胞；未处理组不进行质粒转染。采用反转录PCR、免疫细胞化学检测3组细胞NPMl．mA基因和蛋白的表达；使用细胞生长曲线观察细胞体外增殖能力；流式细胞术检测细胞周期分布；细胞体外侵袭实验观察细胞体外侵袭能力；实时荧光定量PCR检测血管生成素1（Ang-1）、Ang．2mRNA的表达。结果成功构建了稳定表达NPMl．mA的白血病细胞株。与空载体转染组和未处理组比较，稳定表达NPMl。mA蛋白的THP-1．mA细胞体外增殖能力明显增强，G1期细胞比例减少，S期细胞比例增加（均P〈0．01）。与空载体转染组和未处理组比较，细胞体外侵袭实验显示THP．1-mA组细胞体外侵袭能力增强，实时荧光定量PCR显示THP．1．mA组细胞Ang．1mRNA表达增高（均P〈0．01）。结论NPMl突变基因的表达能够促进THP-1细胞体外增殖和侵袭，而Ang-1可能在其中发挥重要作用。 展开更多

关键词 白血病 基因 NPM1 细胞增殖 细胞侵袭 血管生成素类

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干扰PKM2对人白血病细胞增殖和凋亡的影响及潜在机制 被引量：1

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作者 汪路 杨丽媛 +5 位作者 唐雨婷 陶瑶 雷力 敬一佩 蒋雪坷 张伶 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期13-20,共8页

目的:探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株(sh PKM2组),同时设立空载体转染组为对照(Vector组)。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vec... 目的:探讨糖酵解酶丙酮酸激酶M2型(PKM2)对人白血病细胞体外增殖和凋亡的影响及潜在机制。方法:将靶向PKM2的慢病毒载体转染人K562细胞株(sh PKM2组),同时设立空载体转染组为对照(Vector组)。采用qRT-PCR和Western blot技术分别检测Vector组和sh PKM2组PKM2 mRNA和蛋白的表达以及自噬标志物的变化; CCK-8实验检测细胞体外增殖能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡情况; Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平。结果:在稳定干扰PKM2后,PKM2的mRNA(t=11. 58,P=0. 000 3)和蛋白水平(t=11. 88,P=0. 000 3)均明显降低。与Vector组比较,shPKM2组细胞体外增殖能力显著降低(F=118. 87,P <0. 000 1)。同时,干扰PKM2可使K562细胞周期阻滞在G1期,细胞凋亡率显著增加(t=37. 23,P <0. 000 1);使促凋亡蛋白Bax表达增加(t=15. 36,P=0. 000 1)、抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(t=9. 965,P=0. 000 6)。此外,干扰PKM2可减弱K562细胞自噬水平,表现为LC3Ⅱ降低(t_(LC3Ⅱ)=10. 32,P_(LC3Ⅱ)=0. 000 5),而p62水平增加(t_(p62)=14. 59,P_(p62)=0. 000 1)。还发现自噬诱导剂能逆转shPKM2引起的白血病细胞体外增殖能力减弱(F=96. 32,P <0. 000 1)。结论:以上结果表明干扰PKM2可抑制人白血病K562细胞的体外增殖并促进其凋亡,其机制可能与PKM2介导的自噬活性降低有关,提示PKM2可能作为白血病诊疗的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 PKM2 白血病 增殖 凋亡 自噬

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敲低TRAF6对白血病K562细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制 被引量：1

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作者 张帅帅 鲜敬荣 +5 位作者 邹琴 全静 金红君 高芃 叶晟 张伶 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2015年第12期1659-1665,共7页

该文探讨了干扰肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)表达对人白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。将靶向TRAF6基因的sh RNA慢病毒载体感染K562细胞,利用荧光显微镜观察感... 该文探讨了干扰肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6,TRAF6)表达对人白血病K562细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制。将靶向TRAF6基因的sh RNA慢病毒载体感染K562细胞,利用荧光显微镜观察感染效率;Western blot方法检测TRAF6蛋白表达的改变;CCK-8法检测体外细胞增殖活性;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达和AKT磷酸化水平的变化。结果显示,TRAF6-sh RNA慢病毒载体成功感染K562细胞,TRAF6蛋白表达水平明显下降。与空白对照组和TRAF6-NC组相比较,TRAF6-sh RNA组细胞增殖能力明显受抑(P<0.05),而细胞凋亡率增加(P<0.05);同时,促凋亡蛋白Bax表达升高、抗凋亡蛋白Bcl-2表达下降。此外,干扰TRAF6可下调K562细胞p-AKT(T308)和p-AKT(S473)活性,而总AKT水平未见明显变化。该研究表明,干扰TRAF6表达可抑制K562细胞增殖和诱导细胞凋亡,其机制可能与下调AKT活性有关,提示TRAF6可作为白血病治疗的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 TRAF6 白血病 RNA干扰 增殖 凋亡 AKT

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NPM1突变基因调控K562白血病细胞侵袭表型的相关机制

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作者 陈先春 覃凤娴 +3 位作者 谭诗 张慧娟 邵会媛 张伶 《医学分子生物学杂志》 CAS CSCD 2011年第4期294-298,共5页

目的探讨CXCR4、Angs在NPM1突变参与调控的白血病细胞浸润转移中的作用，以期进一步明确NPM1突变在白血病浸润转移中的调控机制。方法通过基因转染构建稳定表达NPM1突变蛋白的K562白血病细胞株（K562-mA）。qRT—PCR检测各组细胞CXCR4、... 目的探讨CXCR4、Angs在NPM1突变参与调控的白血病细胞浸润转移中的作用，以期进一步明确NPM1突变在白血病浸润转移中的调控机制。方法通过基因转染构建稳定表达NPM1突变蛋白的K562白血病细胞株（K562-mA）。qRT—PCR检测各组细胞CXCR4、Ang-1／2的mRNA表达水平；Western免疫印迹和流式细胞仪分别检测细胞CXCR4总蛋白和膜蛋白的表达。结果建立了稳定表达NPM突变基因的K562-mA细胞株。与未处理组和空载体转染组相比，K562-mA细胞CXCR4的mRNA和蛋白表达水平显著增高；Ang-1mRNA表达水平明显降低、Ang-2mRNA表达水平明显增高。结论CXCR4、Ang-1／2可能在MPM1突变调控白血病细胞的浸润转移中发挥重要作用。 展开更多

关键词 白血病 核仁磷酸蛋白 基因突变 趋化因子受体4 血管生成素

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MicroRNA-10b通过调控锌指蛋白KLF4阻滞白血病细胞分化

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作者 谭诗 张慧娟 +4 位作者 王娟 陈莎娜 全静 鲜敬荣 张伶 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期290-295,共6页

探讨microRNA-10b(miR-10b)通过调节锌指蛋白Krüppel-like factor 4(KLF4)的表达对急性白血病细胞分化的影响。Real-time PCR及Western blot分别检测不同分化程度的白血病细胞系中miR-10b与KLF4的表达;1,25-二羟基维生素D3(1,25D3... 探讨microRNA-10b(miR-10b)通过调节锌指蛋白Krüppel-like factor 4(KLF4)的表达对急性白血病细胞分化的影响。Real-time PCR及Western blot分别检测不同分化程度的白血病细胞系中miR-10b与KLF4的表达;1,25-二羟基维生素D3(1,25D3)诱导人白血病细胞系HL60向单核系分化,检测此过程中miR-10b及KLF4的表达变化;利用体外合成的寡核苷酸(miR-10b mimics)转染HL60细胞,瑞氏–吉姆萨染色观察1,25D3诱导后细胞分化形态学的改变;流式细胞术检测单核细胞表面标志CD14的表达。结果显示,miR-10b在分化早期的KG-1a细胞中表达最高,在分化晚期的U937、THP-1细胞中表达最低(P<0.01),而KLF4的表达与之相反;1,25D3诱导HL60向单核系分化过程中,miR-10b表达呈时间依赖性降低,KLF4表达则逐渐增高;HL60细胞中过表达miR-10b后可抑制1,25D3诱导的细胞分化形态特征的改变及CD14的表达(P<0.05)。提示miR-10b通过负调控KLF4的表达阻滞白血病细胞HL60单核系的分化。 展开更多

关键词 MIR-10B KLF4 急性髓系白血病 细胞分化

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核仁磷酸蛋白基因突变对K562白血病细胞分化的影响

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作者 谭诗 张慧娟 +4 位作者 王娟 陈莎娜 覃凤娴 陈先春 张伶 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期872-879,共8页

核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变在急性髓系白血病的发生发展中发挥着重要作用,而与白血病分化阻滞的关系尚未完全阐明。为探讨NPM1基因突变对白血病细胞体外分化的影响,将携带NPM1 A型突变(NPM1-mA)的表达质粒载体pEGFPC1-NP... 核仁磷酸蛋白基因(nucleophosmin,NPM1)突变在急性髓系白血病的发生发展中发挥着重要作用,而与白血病分化阻滞的关系尚未完全阐明。为探讨NPM1基因突变对白血病细胞体外分化的影响,将携带NPM1 A型突变(NPM1-mA)的表达质粒载体pEGFPC1-NPM1-mA转染白血病K562细胞系,构建稳定表达NPM1-mA蛋白的细胞株(K562 mA),同时设立野生型NPM1转染组(K562 wt)、空载体转染组(K562 C1)和未处理组(K562)为对照。利用豆蔻酰佛波醇乙酯(PMA)诱导各组细胞分化,瑞氏–吉姆萨染色观察细胞分化的形态改变,计算诱导分化率;相差显微镜计数贴壁细胞数量;流式细胞术分析细胞表面分化抗原CD41的表达。结果显示,PMA作用72 h后,与对照组相比,K562 mA组细胞的诱导分化率及贴壁细胞数明显降低(P<0.05);同时,CD41的表达受到显著抑制(P<0.01)。提示NPM1基因突变能够阻滞白血病细胞系K562的体外分化。 展开更多

关键词 白血病 NPM1突变 细胞分化 K562细胞系

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南充市Rh阴性献血者血清学表型和不规则抗体调查 被引量：4

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作者 杨松 张伶 +3 位作者 邹韬 杨兴明 赵冰海 陈科宇 《检验医学与临床》 CAS 2015年第8期1040-1041,共2页

目的调查南充市Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体情况。方法应用血型血清学方法对初检Rh阴性的献血者进行Rh阴性确认、血清学表型鉴定及不规则抗体筛选鉴定。结果在433份送检标本中共确认Rh阴性402份(92.8%),检出D变异体23份(5... 目的调查南充市Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体情况。方法应用血型血清学方法对初检Rh阴性的献血者进行Rh阴性确认、血清学表型鉴定及不规则抗体筛选鉴定。结果在433份送检标本中共确认Rh阴性402份(92.8%),检出D变异体23份(5.3%),其余8份(1.9%)为检验科RhD检测错误;共检出不规则抗体12份,在Rh确认阴性献血者中检出7份抗-D(1.7%);Rh阴性献血者的血清学表型分布结果主要以dccee和dCcee为主,其余为dCCee、dccEe和dCcEe。结论通过本次调查,掌握了南充市Rh阴性无偿献血者的血清学表型和不规则抗体的分布情况,保障了临床Rh阴性患者输血安全性、有效性和及时性。 展开更多

关键词 RH阴性 D变异体 血清学表型 不规则抗体

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