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丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制 被引量:2
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作者 余音 郭倩 +2 位作者 潘乾广 石瑶 叶秀峰 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2013年第11期1544-1550,共7页
目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)中的作用及机制。方法将大鼠随机分为6组:未使用p38MAPK抑制剂SB203580的假手术组(Sham组)、... 目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase,MAPK)信号转导通路在脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia/reperfusion,I/R)中的作用及机制。方法将大鼠随机分为6组:未使用p38MAPK抑制剂SB203580的假手术组(Sham组)、使用抑制剂的假手术组(Sham/SB组)、未使用抑制剂再灌注24 h组(I/R 24 h组)、未使用抑制剂再灌注48 h组(I/R 48 h组)、使用抑制剂再灌注24 h组(SB 24 h组)和使用抑制剂再灌注48 h组(SB 48 h组)。采用大脑中动脉线栓法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,使用抑制剂的各组于造模前30 min经腹腔注射SB203580(5 mg/kg,溶于5 mg/ml DMSO)。采用免疫荧光双标法检测大鼠大脑中动脉(middle cerebral artery,MCA)和脑微血管(microvascular,Mic.V)周围IgG的渗出;Western blot和RT-PCR法检测大鼠脑组织中p38、一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)、胶原Ⅳ型(collagenⅣ)蛋白和基因表达的变化。结果随着再灌注时间的延长,大鼠脑血管内IgG渗出量增加(P<0.01);经p38MAPK抑制剂预处理后,IgG的渗出程度有所减轻。脑缺血再灌注后,大鼠脑组织中p38、iNOS、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平均明显升高(P<0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,能显著抑制p38、iNos、MMP-9蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平(P<0.05);collagenⅣ蛋白的表达水平和基因mRNA的转录水平随着缺血时间的延长而逐渐下降(P<0.05),经p38MAPK抑制剂预处理后,其下降程度有所减轻(P<0.05)。结论 MAPK通路中的关键蛋白p38、iNOS、MMP-9在脑缺血时表达显著增加,其过度表达直接导致血脑屏障的破坏,抑制其表达,从而遏制对血脑屏障的破坏,有望为I/R的治疗提供新的途径。 展开更多
关键词 脑缺血再灌注损伤 丝裂原活化蛋白激酶转导信号通路 P38丝裂原活化蛋白激酶类 一氧化氮合酶 基质金属蛋白酶-9
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血管性痴呆大鼠模型中海马的组织病理学和超微结构变化 被引量:6
2
作者 孙洁芸 余天平 +1 位作者 张雄 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期225-229,共5页
目的:通过光镜和电镜观察并探讨慢性脑血流灌注不足大鼠海马的组织病理学和超微结构的动态变化。方法:将60只SD大鼠随机分为模型组和假手术组,其中模型组50只,假手术组10只。模型组采用永久性双侧颈总动脉结扎术方法建立血管性痴呆大鼠... 目的:通过光镜和电镜观察并探讨慢性脑血流灌注不足大鼠海马的组织病理学和超微结构的动态变化。方法:将60只SD大鼠随机分为模型组和假手术组,其中模型组50只,假手术组10只。模型组采用永久性双侧颈总动脉结扎术方法建立血管性痴呆大鼠模型后,再随机分为术后1、7、14、21 d组和28 d组,每组10只;假手术组麻醉后只分离双侧颈总动脉而不结扎。不同时间点断颈处死大鼠,取大脑,切片,分别在光镜和电镜下观察海马神经元的动态变化。结果:与假手术组相比,各模型组大鼠海马CA1区神经元数量均显著减少(P=0.000),其中术后14 d组海马CA1区神经元最少,超微结构显示神经元变性,核固缩,而后随着脑血流的恢复,海马神经元数量逐渐增加,神经元损伤有所改善。结论:在慢性脑血流灌注不足早期,海马神经元损伤是可逆的,为临床对慢性脑血流灌注不足患者进行早期治疗以预防血管性痴呆提供理论依据。 展开更多
关键词 血管性痴呆 海马 组织病理学 超微结构
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姜黄素对APP/PS1双转基因鼠海马ABCA1、apoA1的表达和血清TC、HDL含量的影响 被引量:4
3
作者 滕志朋 王晨 +1 位作者 张雄 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期146-149,共4页
目的:探讨姜黄素对APP/PS1双转基因鼠海马组织中三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transport protein A1,ABCA1)和载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apoA1)的表达及血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(high... 目的:探讨姜黄素对APP/PS1双转基因鼠海马组织中三磷酸腺苷结合盒转运子A1(ATP binding cassette transport protein A1,ABCA1)和载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apoA1)的表达及血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)含量的影响。方法:用APP/PS1双转基因鼠建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型,不同浓度姜黄素饲料喂养6个月。免疫组化SP法检测转基因鼠的海马组织CA1区ABCA1和apoA1的表达变化。胆固醇酶法比色法检测血清中TC和HDL的含量。结果:经过不同浓度姜黄素饲喂转基因鼠后,其海马组织CA1区ABCA1和apoA1的表达增加(P=0.005和0.003;P=0.025和0.001),且血清中HDL的含量也随之增加,TC的含量逐渐减少,其差异均有统计学意义(P=0.041和0.010;P=0.046和0.002)。结论:ABCA1在AD的发生发展中起着重要的作用,姜黄素可能是通过增加ABCA1表达和升高apoA1和HDL含量降低胆固醇水平。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 姜黄素 三磷酸腺苷结合盒转运子A1 免疫组化 载脂蛋白A1 高密度脂蛋白
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脑血流低灌注老龄大鼠中脑皮质血流的改变与血清总胆固醇和高密度脂蛋白的动态变化 被引量:1
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作者 王林辉 田茗源 +2 位作者 滕志朋 王晨 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期494-497,共4页
目的:通过建立脑血流低灌注模型,观察老龄大鼠脑血流的变化以及在脑血流低灌注下血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的动态变化。方法:采用持久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)致老龄大鼠脑... 目的:通过建立脑血流低灌注模型,观察老龄大鼠脑血流的变化以及在脑血流低灌注下血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)和高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的动态变化。方法:采用持久性双侧颈总动脉结扎法(2VO)致老龄大鼠脑血流灌注不足,测定术后7、14、21、28 d大鼠脑皮质血流;检测、比较术后不同时间段大鼠血清中TC和HDL浓度差异。结果:术后第14天大鼠脑颞区血流出现明显减少;术后21、28 d大鼠脑局部皮质血管有再生侧支形成,大鼠脑颞区血流仍未恢复;术后第14天血清中HDL、TC含量明显高于假手术组(P<0.05),随着缺血时间延长,又逐渐降低。结论:血清TC和HDL浓度在脑缺血灌注不足的不同时间段经历了先增强后减弱的动态变化,提示脑血流低灌注老龄大鼠因大脑血流灌注不足可出现体内胆固醇代谢失衡并出现应激调节现象。 展开更多
关键词 脑血流低灌注 总胆固醇 高密度脂蛋白
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MiR-124在脑血流灌注不足中的表达变化及其作用 被引量:1
5
作者 雷荟仔 王林辉 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期334-338,共5页
目的:研究miR-124在脑血流灌注不足大鼠中的动态表达变化,并探讨其在脑血流灌注不足中发挥的作用。方法:采用双侧颈总动脉结扎(Permanent bilateral comman carotid artery occlusion或Two-vessel occlusion,2VO)制备大鼠脑缺血模型,用q... 目的:研究miR-124在脑血流灌注不足大鼠中的动态表达变化,并探讨其在脑血流灌注不足中发挥的作用。方法:采用双侧颈总动脉结扎(Permanent bilateral comman carotid artery occlusion或Two-vessel occlusion,2VO)制备大鼠脑缺血模型,用qRT-PCR的方法在不同的时间点(术后1、7、14、21、28 d)检测miR-124的表达变化。并在SH-SY5Y细胞系中采用流式细胞仪研究低氧时过表达miR-124对细胞周期的影响。结果:与对照组比较,2VO术后大鼠脑皮质血流经历了先下降再上升的动态变化,而miR-124也呈现先下降再上升的动态过程,于术后第7天达到最低(P=0.036);在低氧环境中,过表达miR-124可以将神经细胞系SH-SY5Y的阻止在G1期。结论:miR-124可能参与了大鼠脑血流灌注不足后脑缺血的发生发展,为治疗脑缺血提供了一种新的治疗策略。 展开更多
关键词 MIRNA 脑缺血 双侧颈总动脉结扎
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姜黄素对慢性脑血流灌注不足老龄鼠三磷酸腺苷结合盒转运体A1、血清高密度脂蛋白和总胆固醇的影响 被引量:1
6
作者 田茗源 王林辉 +2 位作者 滕志朋 王晨 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期489-493,共5页
目的:探讨姜黄素(Curcumin)对脑血流灌注不足老龄鼠海马组织CA1区三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP bindingcassette transporter A1,ABCA1)的表达及血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的... 目的:探讨姜黄素(Curcumin)对脑血流灌注不足老龄鼠海马组织CA1区三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ATP bindingcassette transporter A1,ABCA1)的表达及血清中总胆固醇(Total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白(High density lipoprotein,HDL)的影响。方法:采用双侧颈总动脉永久性结扎模型制备慢性脑缺血模型,老龄鼠随机分为正常对照组、药物治疗组、单纯缺血组、假手术组,药物治疗组又分为高剂量组(姜黄素100 mg/kg)和低剂量组(姜黄素50 mg/kg),治疗组于术后24 h开始用姜黄素每日腹腔注射,给药连续30 d。采用苏木素-伊红染色观察大鼠海马CA1区锥体细胞形态学改变,采用生化方法检测血清HDL和TC水平,采用免疫组织化学染色方法分析大鼠海马组织ABCA1蛋白表达情况。结果:苏木素-伊红染色显示,与假手术组和正常对照组相比,单纯缺血组的海马CA1区的锥体细胞发生变性,部分神经元溶解消失。而药物治疗组CA1区未见明显缺血性改变,与正常对照组和假手术组相比,单纯缺血组的血清HDL和TC明显降低(P<0.05)。与单纯缺血组相比,药物治疗组脑血流灌注不足老龄鼠血清HDL、TC水平明显升高(P<0.05)。免疫组化结果表明:与单纯缺血组相比,药物治疗组海马CA1区锥体细胞ABCA1的表达水平明显升高(P<0.05)。结论:姜黄素可以通过提高ABCA1的表达从而改善慢性脑血流灌注不足导致的海马CA1区损伤,并提高药物治疗组血清HDL和TC水平。这为血管性痴呆的治疗提供新的实验依据。 展开更多
关键词 姜黄素 脑血流灌注不足 高密度脂蛋白 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 胆固醇
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姜黄素改善N2a/APP695swe细胞线粒体功能和抑制细胞凋亡的作用 被引量:5
7
作者 梁洁 康清梅 +3 位作者 张雄 周凡琳 高敏娜 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期155-161,共7页
目的:观察姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞线粒体形态和功能及细胞凋亡的影响;探讨其可能的神经保护机制。方法:实验细胞分为4个组:N2a/APP695组(WT)、N2a/APP695swe组(APP)、溶剂对照组(DMSO,5μmol/L)、姜黄素组(Curcumin,5μmol... 目的:观察姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞线粒体形态和功能及细胞凋亡的影响;探讨其可能的神经保护机制。方法:实验细胞分为4个组:N2a/APP695组(WT)、N2a/APP695swe组(APP)、溶剂对照组(DMSO,5μmol/L)、姜黄素组(Curcumin,5μmol/L)。流式细胞术分别检测细胞凋亡、活性氧水平和膜电位水平、免疫细胞化学检测细胞色素C的表达、电镜观察细胞线粒体形态的改变,Western blot检测Caspase3、Caspase9蛋白表达,分光光度检测Caspase3、Caspase9酶活性。结果:流式细胞术结果显示,Curcumin组细胞的凋亡率、活性氧水平较APP组明显降低[(0.05±0.01)vs.(0.18±0.01),P=0.000;(49.67±4.16)vs.(197.67±8.08),P=0.000];而Curcumin组线粒体膜电位较APP组升高[(1.00±0.03)vs.(0.64±0.03),P=0.000]。电镜结果发现姜黄素可以减轻线粒体的肿胀,改善其形态。同时免疫细胞化学结果显示姜黄素减少了细胞色素C的释放。Western blot检测发现,与APP组相比,Curcumin组Caspase3、Caspase9蛋白的表达均降低[(0.62±0.12)vs.(1.39±0.10),P=0.000;(0.64±0.20)vs.(1.78±0.03),P=0.000];并且Curcumin组较APP组的Caspase3与Caspase9的活性明显降低[(0.66±0.04)vs.(2.12±0.06),P=0.000;(0.58±0.04)vs.(0.93±0.03),P=0.000]。结论:姜黄素能抑制N2a/APP695swe细胞的凋亡,其机制可能与改善线粒体功能有关。 展开更多
关键词 姜黄素 线粒体 阿尔茨海默病 凋亡
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姜黄素通过增强Rab7的表达促进N2a/APP695swe细胞中的自噬流 被引量:3
8
作者 康清梅 梁洁 +2 位作者 周凡琳 张雄 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期863-868,共6页
目的:观察姜黄素(curcumin)对稳定表达APP695swe的Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞(N2a/APP695swe)中自噬流的作用;再进一步深入探讨其作用于N2a/APP695swe细胞中自噬流的可能机制。方法:首先将细胞分成4组:野生型对照组(WT组)、空白对照组(Co... 目的:观察姜黄素(curcumin)对稳定表达APP695swe的Neuro-2a小鼠脑神经瘤细胞(N2a/APP695swe)中自噬流的作用;再进一步深入探讨其作用于N2a/APP695swe细胞中自噬流的可能机制。方法:首先将细胞分成4组:野生型对照组(WT组)、空白对照组(Control组)、溶剂对照组(Sham组)、姜黄素组(Curcumin组)。透射电镜观察各组中自噬体形态特点,Western blot检测p62和LC3Ⅱ的表达;并分别运用Western blot及免疫荧光检测Rab7蛋白表达,实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)检测Rab7 mRNA表达。在N2a/APP695swe细胞中分别过表达及沉默Rab7后,将细胞分成5组:Control组、pcDNA3.1组、pcDNA3.1-Rab7组、NC-siRNA组和Rab7-siRNA组。再运用透射电镜观察各组自噬体形态特点,Western blot检测p62和LC3Ⅱ蛋白表达。结果:经姜黄素处理后,透射电镜观察到细胞中的自噬体主要为单层膜结构的自噬溶酶体,同时,自噬活性关键性蛋白LC3Ⅱ的表达增加(P=0.000),而自噬底物蛋白p62的表达减少(P=0.000);Rab7在蛋白水平及mRNA水平均明显升高(P=0.000、0.000)。过表达Rab7后,自噬体主要为单层膜结构的自噬溶酶体,p62蛋白表达明显减少(P=0.000),LC3Ⅱ蛋白表达无明显变化(P=0.669)。沉默Rab7后,自噬体主要为双层膜结构的早期自噬体形态,p62蛋白表达明显增加(P=0.000),LC3Ⅱ蛋白表达无明显变化(P=0.622)。结论:姜黄素促进N2a/APP695swe细胞中的自噬流,其作用机制可能与增强Rab7表达有关。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 姜黄素 自噬流 Rab7
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姜黄素通过提高Rab家族蛋白的表达增强N2a/APP695swe细胞的自噬作用 被引量:3
9
作者 周凡琳 熊晓敏 +4 位作者 梁洁 张雄 李世杰 高敏娜 李昱 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期51-57,共7页
目的:研究姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞中自噬和Rab家族蛋白的影响,并且探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法:采用N2a/WT和N2a/APP695swe细胞,并将其分为4个组:N2a/WT组(WT组)、N2a/APP695swe组(APP组)、DMSO... 目的:研究姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞中自噬和Rab家族蛋白的影响,并且探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法:采用N2a/WT和N2a/APP695swe细胞,并将其分为4个组:N2a/WT组(WT组)、N2a/APP695swe组(APP组)、DMSO溶剂对照组(DMSO组,5μmol/L,24 h)、curcumin处理组(curcumin组,5μmol/L,24 h)。Western blot分别检测各组自噬标志性蛋白LC3BⅡ和底物蛋白SQSTM1的表达,以及Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7、Rab9、Rab24和Rab33B的表达;共聚焦显微镜观察免疫荧光进一步验证各组LC3BⅡ与SQSTM1蛋白的表达情况。结果:Western blot结果表示,curcumin组LC3BⅡ蛋白表达量明显高于APP组和DMSO组(0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,0.54±0.02 vs. 0.29±0.09,P=0.000);同时,curcumin组SQSTM1蛋白表达量则明显低于APP组(0.67±0.01 vs. 1.02±0.02,P=0.000)。共聚焦显微镜观察免疫荧光实验再次验证了LC3B和SQSTM1蛋白的这种表达趋势。Western blot进一步检测发现,与APP组相比,curcumin组Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7和Rab33B的蛋白表达量均明显增加(1.00±0.02 vs. 0.63±0.02,P=0.000;0.94±0.03 vs. 0.79±0.03,P=0.000;0.75±0.00vs. 0.56±0.01,P=0.000;0.88±0.04 vs. 0.59±0.03,P=0.000),而Rab9和Rab24的改变差异无统计学意义(1.04±0.02 vs. 1.06±0.02,P=0.578;0.79±0.00 vs. 0.80±0.00,P=0.067)。结论:姜黄素提高N2a/APP695swe细胞的自噬水平,其机制可能与增强Rab家族蛋白Rab1、Rab5、Rab7和Rab33B的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 自噬 Rab家族蛋白 阿尔茨海默病
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姜黄素通过提高自噬体形成相关蛋白的表达增强N2a/APP695swe细胞的自噬作用 被引量:2
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作者 康清梅 梁洁 +4 位作者 张雄 周凡琳 李丹 高敏娜 李昱 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期481-486,共6页
目的:全面研究姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞自噬作用的影响,进一步探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法:将细胞分为4组:野生型对照组(WT组)、空白对照组(Control组)、溶剂对照组(Sham组)、姜黄素处理组(Curcu... 目的:全面研究姜黄素(curcumin)对N2a/APP695swe细胞自噬作用的影响,进一步探讨姜黄素调节N2a/APP695swe细胞自噬的可能机制。方法:将细胞分为4组:野生型对照组(WT组)、空白对照组(Control组)、溶剂对照组(Sham组)、姜黄素处理组(Curcumin组,5μmol/L)。Western blot分别检测自噬标志性蛋白LC3Ⅱ和底物蛋白SQSTM1的表达,以及Atg蛋白Beclin1、Atg5、Atg7、Atg12、Atg16L1的表达;免疫荧光法进一步验证SQSTM1蛋白的表达。各组分别转染细胞自噬体指示探针(GFPLC3)和溶酶体红色探针(Lyso Red)后,激光共聚焦显微镜观察自噬体和自噬溶酶体的数量检测自噬流。结果:Western blot结果表明,Curcumin组LC3Ⅱ蛋白表达量较对照组明显增高(0.59±0.03 vs.0.11±0.01,P=0.000);同时,Curcumin组SQSTM1蛋白表达量较对照组明显降低(0.19±0.04 vs.0.66±0.05,P=0.000)。免疫荧光实验再次验证了SQSTM1蛋白的这个表达趋势。共聚焦显微镜观察发现,与对照组相比,Curcumin组细胞内自噬体数量增加(154.67±7.37 vs.89.00±7.21,P=0.000),同时自噬溶酶体数量也显著增加(84.67±12.50 vs.42.33±6.51,P=0.000)。Western blot进一步检测发现,与对照组相比,Curcumin组Atg蛋白Beclin1、Atg7、Atg16L1的表达均明显增加(0.55±0.09 vs.0.10±0.02,P=0.000;0.89±0.12 vs.0.39±0.07,P=0.000;0.36±0.07vs.0.13±0.02,P=0.003),而Atg5和Atg12改变差异无统计学意义(0.79±0.12 vs.0.79±0.10,P=0.470;0.94±0.13 vs.0.87±0.16,P=0.587)。结论:姜黄素增强N2a/APP695swe细胞的自噬水平,其机制可能与提高自噬体形成相关蛋白Beclin1、Atg7、Atg16L1的表达有关。 展开更多
关键词 姜黄素 自噬 阿尔茨海默病 BECLIN1 Atg7 Atg16L1
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