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健康人群肿瘤坏死因子-α基因多态性的分析 被引量：2
1
作者 向瑜 杨致邦 +3 位作者 李永国 韩飞 苏善平 郭丽媛 《生物学杂志》 CAS CSCD 2010年第1期24-26,共3页
了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308... 了解汉族健康人群中TNF-A基因多态性的分布,研究TNF-α表达与相关疾病之间的联系。采用PCR-限制性长度片段多态分析法检测140名重庆地区汉族健康人群的TNF-A-308,TNF-A-857位点基因多态性,计算其基因型和等位基因频率,结果显示TNF-A-308 G/G、G/A、A/A基因型的频率分别为89%、11%、1%,其等位基因的发生频率以G等位基因最常见(93%),其次为A等位基因(7%)。TNF-A-857 C/C、C/T、T/T基因型的频率分别为68%、36%、8%,其等位基因发生频率以C等位基因最常见(81%),其次为T等位基因(19%)。由结果可以得出重庆地区汉族健康人群TNF-A-308位点存在G/A多态性,TNF-A-857位点存在C/T多态性。 展开更多
关键词 基因多态性 肿瘤坏死因子-Α
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硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体的保护作用 被引量：1
2
作者 郭丽媛 杨致邦 +4 位作者 田一玲 黄伟 韩飞 范贵荣 向瑜 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第5期457-460,467,共5页
目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。... 目的观察硫糖铝对抗幽门螺杆菌重组细胞空泡毒素抗原(VacA)卵黄抗体(IgY)的保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导重组菌DH5α-vacA-pQE30,大量表达并纯化VacA重组蛋白,免疫洛曼母鸡,制备VacAIgY,并进行纯化。在不同pH值的IgY液中加入不同浓度的硫糖铝和不同浓度的胃蛋白酶,将含不同浓度硫糖铝的IgY反复冻融7次,将含30%硫糖铝的IgY室温放置1d～4周,ELISA法测定各实验组IgY的相对抗体活性(AT/AC)。结果在pH1.5、2.0和3.0的条件下,含30%～60%硫糖铝的IgY的相对抗体活性高于不加硫糖铝的IgY;在pH1.5条件下,60%硫糖铝可使IgY的相对抗体活性保持68.7%;在pH2.0和3.0条件下,50%和40%以上的硫糖铝几乎可完全保持IgY的相对抗体活性。在pH值为2.0和3.0时,正常胃蛋白酶浓度(0.02mg/ml)下,30%以上的硫糖铝均可有效保护IgY的相对抗体活性。30%以上的硫糖铝可增强IgY的抗冻融能力。室温放置4周后,含30%硫糖铝的IgY仍能保持80%以上的相对抗体活性。结论30%以上的硫糖铝可增强VacAIgY对低pH和胃蛋白酶的耐受能力及抗冻融能力,是较理想的IgY保护剂。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素抗原 卵黄抗体 硫糖铝 抗体活性
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幽门螺杆菌hp1188基因的原核表达及免疫学鉴定 被引量：1
3
作者 韩飞 杨致邦 +1 位作者 郭丽媛 范贵荣 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期340-345,共6页
目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp... 目的:构建高效表达Hp1188重组蛋白的基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,提纯重组蛋白,鉴定其抗原性和免疫原性。通过小鼠灌胃试验,验证Hp1188蛋白阻止幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)在胃内定植的作用。方法:构建重组质粒pQE30-hp1188,DNA测序分析正确后,转化大肠杆菌DH5α,IPTG诱导表达。表达蛋白用Ni2+-NTA树脂纯化,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,双向琼脂扩散实验检测效价。纯化重组蛋白和粘膜佐剂霍乱毒素B亚单位(Cholera toxin subunit B,CTB)的混合液灌胃免疫接种预防组BALB/c小鼠,同时设阴性对照组和阳性对照组,免疫4周后用H.pylori NCTC 11637攻击3次,末次攻击4周后处死小鼠,进行胃组织H.pylori培养;H.pylori定植半定量、炎症程度及其炎症活动度的评分,以评价重组蛋白对胃组织H.pylori感染的免疫保护作用。结果:构建的重组表达质粒pQE30-hp1188经DNA测序证实序列完整,插入的基因片段全长810bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%,并在大肠杆菌DH5α中表达出分子量约为30kD大小的可溶性目的蛋白,表达量占全菌总量的47%,表达蛋白纯化后纯度达90%,浓度为1.0mg/ml。Western blot证实有良好抗原结合特异性,双向琼脂扩散效价为1∶16。预防组H.pylori感染率、定植及炎症程度评分均明显低于阳性对照组(P<0.05)。预防组不仅可以降低H.pylori的定植,而且能减轻H.pylori造成的小鼠胃组织的局部慢性炎症反应。结论:成功构建了基因工程菌pQE30-hp1188-DH5α,并高效表达了Hp1188重组蛋白,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 hp1188基因 表达 免疫原性 体内试验
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