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利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白 被引量：2
1
作者 程志 高蕊 +1 位作者 马林强 黄慧哲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期443-447,共5页
目的：利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库中筛选与转录因子HOXA11相互作用的蛋白。方法：培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库。同时,聚合酶链反应扩增人HOXA1... 目的：利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库中筛选与转录因子HOXA11相互作用的蛋白。方法：培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌c DNA文库。同时,聚合酶链反应扩增人HOXA11基因片段（1～846 bp）,将此基因片段重组入p GBKT7载体,构建诱饵质粒p GBKT7-HOXA11,经酶切和测序验证质粒构建正确。将诱饵质粒转化酵母菌AH109,检测其有无毒性与自激活作用。随后,利用酵母双杂交系统从c DNA文库中筛选与HOXA11相互作用的蛋白。对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析。结果：成功构建了人肾透明细胞腺癌c DNA文库和p GBKT7-HOXA11诱饵质粒。在AH109酵母细胞中,该质粒无毒性、无自激活作用。酵母双杂交筛选获得了5个与HOXA11相互作用阳性克隆。结论：获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA11相互作用蛋白,为进一步研究HOXA11在个体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 HOXA11 SMART技术 酵母双杂交
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