稳定表达BCR／ABL的小鼠BaF3-P210细胞株的建立及其生物学特性的研究 被引量：11

1

作者 史梦 冯文莉 +8 位作者 张文萍 王小中 黄世锋 曾建明 温健萍 陶昆 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第19期1791-1794,共4页

目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P... 目的构建能稳定表达BCR/ABL的小鼠转化细胞株BaF3-P210,并初步探讨BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。方法将含有bcr/abl基因的逆转录病毒载体转染到包装细胞,收集病毒感染BaF3细胞,经筛选和亚克隆,获得稳定表达BCR/ABL的转基因BaF3-P210细胞。用PCR、DNA测序、RT-PCR和Westernblot检测bcr/abl基因在靶细胞中的整合和表达;用台盼蓝细胞计数法、流式细胞仪(FCM)和MTT法研究BCR/ABL对BaF3细胞生物学特性的影响。结果bcr/abl基因整合在BaF3细胞基因组中,BaF3-P210细胞能稳定表达bcr/abl基因及其蛋白。与对照组相比,BaF3-P210细胞增殖速度增快(P<0.05);G0/G1期细胞比例下降,S期和G2/M期细胞比例增高(P<0.05);经STI571处理后的细胞增殖抑制率为(54.08±1.90)%(P<0.05),早期凋亡率为(12.35±2.04)%(P<0.05)。结论成功构建的能稳定表达BCR/ABL的小鼠BaF3-P210转化细胞株具有增殖能力增强、细胞周期进程加速和对STI571敏感的恶性表型特征。 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL融合基因 逆转录病毒载体 BaF3细胞

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bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病样模型的建立 被引量：4

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作者 张文萍 冯文莉 +8 位作者 黄世峰 史梦 王雅珍 曾建明 李惠 温健萍 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第15期1377-1381,共5页

目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静... 目的：构建bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠慢性粒细胞白血病（CML）样模型,为深入研究CML发病机制和治疗奠定基础.方法：bcr-abl逆转录病毒Mig210载体经Phoenix-Ampo细胞包装后,取上清液感染5-FU处理后的BALB/c雄性小鼠骨髓细胞,再经尾静脉移植入经致死剂量γ射线（900cGy）照射的同种雌性受体鼠中.用形态学、RT-PCR和Western Blot鉴定小鼠成模情况.结果：小鼠移植8-9 wk后,外周血白细胞达2×10^10-3×10^10/L（为对照鼠的5-8倍）,外周血涂片幼稚细胞达到0.10-0.20;骨髓粒系细胞显著增高,易见幼稚细胞,肝脾也可见白血病细胞浸润;移植4-5 wk后在受体鼠骨髓和脾脏检出bcr-abl融合基因,8-9 wk后在肝脏亦检测出bcr-abl融合基因,同时在骨髓和脾脏也检测到bcr-abl融合蛋白.建模成功的小鼠3-5 mo后相继死亡.结论：成功建立bcr-abl逆转录病毒介导的小鼠CML模型,可用于后续CML信号通路和治疗机制的研究. 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 BCR/ABL融合蛋白 逆转录病毒载体 动物模型

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bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响 被引量：3

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作者 史梦 冯文莉 +8 位作者 黄世峰 曾建明 王小中 温健萍 张文萍 陶昆 陈新敏 曹唯希 黄宗干 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第4期357-360,共4页

目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR... 目的:建立稳定表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210的DNA损伤模型,探讨bcr/abl融合蛋白对细胞DNA损伤修复功能的影响.方法:彗星实验检测不同浓度H2O2诱导的BaF3-P210细胞的DNA损伤建立DNA损伤模型,以空载体转染BaF3-MIGR1细胞为对照;用彗星实验对两组细胞在DNA损伤后的修复进行不同时间段的动态观测.结果:彗星实验确定了细胞DNA损伤模型的建立条件是:采用50μmol/L终浓度的H2O2对BaF3-MIGR1细胞和BaF3-P210细胞进行染毒,H2O2作用温度和时间均为4℃,10min.BaF3-P210细胞与BaF3-MIGR1细胞相比DNA损伤后修复时间缩短,在损伤后60min即可达到完全修复,而后者在损伤后120min才能完全修复(P<0.05).结论:建立了表达bcr/ablP210融合蛋白的小鼠转化细胞株BaF3-P210细胞的DNA损伤模型,并发现bcr/abl融合蛋白可增强BaF3-P210细胞的DNA损伤后修复能力. 展开更多

关键词 融合蛋白质类 bcr/abl 白血病 髓样 慢性 DNA损伤 DNA修复

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CCAAT/增强子结合蛋白α对K562细胞分化和凋亡的影响及其机制 被引量：2

4

作者 孙成铭 黄世峰 +5 位作者 罗红伟 刘钉宾 田文君 朱喜丹 冯文莉 黄宗干 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期220-225,共6页

目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒... 目的:研究CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer-binding protein-alpha,C/EBPα)对K562细胞株分化和凋亡的影响及对相关基因的调控,为慢性粒细胞白血病的治疗提供新的治疗靶点。方法:将C/EBPα表达质粒pEGFP-C/EBPα及空载体对照质粒pEGFP分别经阳离子脂质体2000介导转染K562细胞,用G418筛选出C/EBPα稳定表达细胞株。Wright-Giemsa染色观察细胞形态学变化,FCM分析细胞表面分化抗原CD11b的表达、细胞周期及细胞凋亡,电子显微镜观察细胞凋亡,RT-PCR和Western印迹法检测细胞中相关基因Per2、cyclin B1和C-myc的表达。结果:筛选得到稳定表达C/EBPα的细胞株pEGFP-C/EBPα-K562。与空载体转染组及对照组细胞相比,转染组K562细胞分化明显,同时粒系细胞表面分化抗原CD11b表达增加;细胞周期分析发现,转染组细胞中G2期细胞增多,与空载体组和对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05),同时出现细胞凋亡峰。细胞凋亡检测结果显示,转染组细胞凋亡明显增加(21.1%),与空载体组(6.0%)和对照组(4.2%)比较,差异有统计学意义(P<0.05);电子显微镜观察发现,转染组细胞中出现染色质浓集、断裂和核固缩等现象,并见凋亡小体;RT-PCR和Western印迹法检测发现,C/EBPα明显上调Per2 mRNA和蛋白表达,抑制cyclinB1、C-myc mRNA和蛋白的表达。结论:C/EBPα能促进K562细胞分化,并诱导细胞凋亡,其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控来实现的。 展开更多

关键词 白血病 实验性 CCAAT增强子结合蛋白 细胞周期 细胞凋亡 细胞 K562

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慢性粒细胞白血病急变的机理 被引量：4

5

作者 陈新敏 冯文莉 《国外医学（输血及血液学分册）》 2005年第1期21-23,共3页

慢性粒细胞白血病急性变与多种基因异常以及白血病细胞的细胞生物学改变密切相关,其急变的机理一直是国内外研究的热点。本文主要介绍这方面的研究进展。

关键词 急变 慢性粒细胞白血病 基因异常 急性变 改变 白血病细胞 细胞生物学 机理 热点 国内外

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Apg-2对H2O2诱导的BaF3-P210细胞损伤的影响 被引量：2

6

作者 李春莉 刘钉宾 +5 位作者 袁颖 彭智 陶崑 史梦 黄宗干 冯文莉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第15期1621-1624,共4页

目的探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响。方法以H2O2诱导的pMIGR1空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2... 目的探讨Apg-2对H2O2诱导的Bcr/Abl阳性BaF3-P210细胞损伤的影响。方法以H2O2诱导的pMIGR1空载体感染细胞BaF3-MIGR1和稳定表达Bcr/Abl的BaF3-P210细胞为损伤模型,Western blot和RT-PCR检测H2O2损伤后2组细胞Apg-2表达;建立过表达Apg-2的BaF3-MIGR1细胞(BaF3-MIGR1-Apg2)和BaF3-P210细胞(BaF3-P210-Apg2)H2O2诱导的损伤模型,Western blot检测磷酸化组蛋白(γ-H2AX)的表达,免疫荧光法检测γ-H2AX焦点数。结果 H2O2作用后的BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞的Apg-2蛋白和mRNA水平表达均升高(P<0.05)。H2O2作用BaF3-MIGR1和BaF3-MIGR1-Apg2细胞后其γ-H2AX蛋白表达升高,γ-H2AX焦点数亦增加;BaF3-P210和BaF3-P210-Apg2细胞H2O2损伤后γ-H2AX蛋白表达和焦点数均无明显变化。结论 Apg-2可减少H2O2诱导的BaF3-P210细胞γ-H2AX表达,从而可能降低其细胞损伤。 展开更多

关键词 Apg-2 H2O2慢性粒细胞白血病 Bcr/Ab1 细胞损伤

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钟基因Per2对白血病K562细胞增殖、分化、凋亡的影响及其机制研究 被引量：3

7

作者 孙成铭 黄世峰 +7 位作者 罗红伟 刘钉宾 田文君 朱喜丹 冯文莉 涂植光 温健萍 黄宗干 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期301-306,共6页

目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色... 目的研究钟基因Period2(Per2)对慢粒急变K562细胞株增殖、分化、凋亡的影响及可能的分子机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染K562细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株。瑞氏染色观察细胞形态,台盼蓝拒染法和MTT法检测K562细胞增殖,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡,电镜观察细胞凋亡,RT-PCR及Western blot方法检测该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53、cyclin B1和c-myc等的表达。结果筛选到稳定表达Per基因的稳定表达细胞株K562/Per2细胞,与空载体转染组及未处理对照组细胞相比,K562/Per2细胞体积缩小,但是分化不明显;台盼蓝拒染法和MTT实验发现Per2抑制细胞生长与增殖能力;流式细胞仪检测周期结果K562/Per2细胞中G2期细胞增多[转染组(36.1±5.5)%,空载组(12.5±2.9)%,未处理对照组(9.7±2.3)%,P<0.05],凋亡检测显示转染组细胞凋亡明显增加[14.8%P<0.05];电镜结果显示染色质浓集、断裂,核固缩和凋亡小体;RT-PCR及Western blot显示Per2明显上调p53基因的mRNA和蛋白表达,而抑制cyclin B1、c-myc基因mR-NA和蛋白的表达。结论钟基因Per2能抑制K562细胞的生长和增殖,并诱导其发生凋亡,但对分化无明显作用。其机制可能是通过对细胞周期相关基因的调控并阻止细胞周期进程来实现的。 展开更多

关键词 钟基因 增殖 凋亡 细胞周期 节律调节

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野生型p53对白血病K562细胞中心体过度复制的抑制作用 被引量：1

8

作者 田文君 冯文莉 +3 位作者 王宏斌 黄世峰 曹唯希 黄宗干 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第2期149-154,共6页

背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为... 背景与目的:肿瘤组织细胞中p53基因突变或缺失是导致非整倍体的发生和基因组不稳定的主要原因之一;最近研究发现慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenous leukemia,CML)各期患者均有中心体异常,且异常的程度与临床分期有关,急变期显示更为严重的中心体异常。本研究建立携野生型p53基因的CML急变K562细胞株,以研究该细胞内野生型p53基因表达后p53信号转导通路对K562细胞中心体的影响。方法:用HEK293细胞扩增重组p53野生型、突变型及空载腺病毒载体,联合polybrene分别感染K562细胞;未接受感染的细胞作为空白对照。流式细胞术检测重组腺病毒载体感染效率,Western blot检测P53蛋白表达。间接免疫荧光染色后用激光共聚焦计数K562细胞中心体的变化。Western blot检测p53信号转导通路下游效应分子生长阻滞和DNA损伤应答基因Gadd45a(growth arrest and DNAdamage)、BubR1(Bub1related)、Aurora A的表达。结果:成功建立携野生型p53基因的K562细胞株,腺病毒载体感染效率达60%以上,野生型p53可在K562细胞中持续表达。感染72h后,携野生型p53基因的K562细胞中中心体数量异常(n>2)的细胞比例降至(0.38±0.02)%,与空白对照组(0.71±0.14)%比较其差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot结果发现p53信号转导通路下游效应分子Gadd45a、BubR1表达分别上调93%、88%,而Aurora A的表达下降56%(P值均<0.05)。结论:重组腺病毒介导的野生型p53基因能够在白血病K562细胞中持续表达;野生型P53蛋白可能通过转录激活-依赖途径上调Gadd45a、BubR1表达以及转录激活-非依赖途径使Aurora A的表达下降,从而抑制K562细胞中心体的过度复制。 展开更多

关键词 P53基因 信号转导 中心体 K562细胞 Gadd45a蛋白 BubR1蛋白 AURORA A激酶

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柔红霉素体外对HL-60细胞的凋亡作用 被引量：1

9

作者 陈敏 冯文莉 黄宗干 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2002年第1期59-61,共3页

目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度... 目的：了解柔红霉素（ＤＮＲ）体外作用于ＨＬ－６０　细胞时产生凋亡的规律及一些相关蛋白表达的变化。方法：应用光镜、ＤＮＡ电泳及ＦＣＭ检测ＨＬ－６０细胞发生的凋亡模式；用ＩＣ、ＦＣＭ观察相关蛋白的变化。结果：当ＤＮＲ浓度为０．２μＭ～２μＭ时，ＨＬ－６０细胞发生的凋亡率随浓度的增加与作用时间的延长而升高，可见典型的凋亡细胞及明显的ＤＮＡ梯度条带。１μＭ　ＤＮＲ作用２ｈ时，ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ的荧光强度指数（ＦＩ）降低，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３　的　ＦＩ　升高；而作用５ｈ时，ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３的ＦＩ值反而降低。结论：一定浓度的ＤＮＲ在体外可诱导ＨＬ－６０细胞凋亡，它可抑制ｂｃｌ－２与ｃ－ｍｙｃ蛋白的表达，而激活ｂａｘ、ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白的表达。 展开更多

关键词 柔红霉素 细胞凋亡 白血病

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靶向激活蛋白激酶PKR对白血病K562细胞增殖的影响及机制 被引量：2

10

作者 赵世巧 冯文莉 +6 位作者 曾建明 白卫君 王小中 温健萍 曹唯希 罗云萍 黄宗干 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第10期1058-1063,共6页

背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用。本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA(double strand RNA,dsRNA)能... 背景与目的:由t(9;22)(q34;q11)导致的bcr-abl融合基因在慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)发病中起着重要的作用。本研究运用CML特异的bcr/abl融合基因的mRNA与外源重组反义RNA形成双链RNA(double strand RNA,dsRNA)能激活双链RNA依赖性蛋白激酶(double-stranded RNA-dependent protein kinase,PKR)的策略,研究其对白血病K562细胞增殖的影响及可能的机制。方法:将dsRNA类似物聚肌苷酸-聚胞啶酸(Polyriboinosinic Polyribocytidylic Acid,polyIC)、含bcr/abl融合基因序列40bp的逆转录病毒载体RV-40AS、RV-40AS+2-氨基嘌呤(2-aminopurine,2AP)和含绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的逆转录病毒载体RV-GFP作用于K562细胞,并以ECV304细胞作对照细胞株。通过细胞计数、MTT法和半固体集落形成实验检测其对细胞生长增殖的影响,用流式细胞仪检测处理前后细胞周期的变化,用Western blot法检测细胞内PKR、磷酸化PKR(phosphated PKR,p-PKR)、真核翻译启始因子2α(eukaryotic initiation factor-2α,eIF2α)、磷酸化eIF2α(phosphated eIF2α,peIF2α)蛋白表达的变化,用3H-亮氨酸掺入实验检测细胞总蛋白合成水平的变化。结果:polyIC对K562细胞和ECV304细胞生长和增殖均具有非特异性抑制作用,而RV-40AS仅对K562细胞具有特异性的抑制效应。PKR抑制剂能阻断RV-40AS对K562细胞的抑制效应。polyIC和RV-40AS作用K562细胞24h后,S期细胞减少[polyIC组(37.26±2.35)%,未处理组(58.53±5.42)%,P<0.05;RV-40AS组(31.48±3.65)%,未处理组(58.53±5.42)%,P<0.05],G0/G1期细胞增多[polyIC组(50.97±2.18)%,未处理组(36.44±4.20)%,P<0.05;RV-40AS组(57.47±3.61)%,未处理组(36.44±4.20)%,P<0.05]。polyIC处理K562细胞组、ECV304细胞组以及RV-40AS处理K562细胞组的p-PKR和p-eIF2α蛋白表达显著上调,且总蛋白合成水平下降[RV-40AS处理的K562细胞组(3.5±1.9)cpm/ng,未处理组(26.8±2.6)cpm/ng,P<0.05]。结论:外源重组反义RNA与bcr/abl融合基因的mRNA形成� 展开更多

关键词 白血病 蛋白激酶 K562细胞 细胞增殖

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结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答的研究 被引量：1

11

作者 王淑玲 刘来成 +1 位作者 卢贤瑜 冯文莉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2008年第5期553-556,共4页

目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株感染的保护力。方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测... 目的:研究结核菌H37Ra免疫小鼠后产生的特异性细胞免疫应答及其对结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)毒株感染的保护力。方法:Balb/c小鼠随机分为H37Ra组、BCG组和生理盐水(NS)组,皮内免疫8周后处死小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群的变化;取小鼠脾淋巴细胞体外培养并用PPD刺激,MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI);ELISA法检测培养上清液中IFN-γ;免疫后第8周,用MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4周后处死小鼠,测定小鼠肺脏荷菌量,观察免疫小鼠对MTB抵抗作用。结果:H37Ra免疫小鼠脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞的百分率分别为(41.63±1.68)%、(27.08±0.58)%,显著高于NS对照组(38.34±0.74)%、(24.37±1.60)%(P<0.05)。H37Ra免疫组脾脏CD3^+T细胞、CD4^+T细胞及CD8^+T细胞的百分率均不同程度地高于BCG免疫组,但差异无统计学意义。脾淋巴细胞SI和IFN-γ水平检测均发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P<0.05),略高于BCG免疫组。感染4周后H37Ra组小鼠肺脏荷菌量与NS对照组比较下降0.954log_(10)CFU,差异有显著性(P<0.05),与BCG组之间差异均无显著性(P>0.05)。结论:H37Ra免疫小鼠后可以诱导产生特异性抗结核的细胞免疫应答,能够抵抗毒株H37Rv的攻击,且免疫效果与BCG相近。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 H37RA 细胞免疫

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循证医学在医学检验教学中的应用 被引量：2

12

作者 张伶 朱建军 宗晓琴 《中华医学教育杂志》 2011年第1期127-129,共3页

循证医学本是一种新的临床医学模式，其理念和方法已经扩展到整个医学教育领域。七年制临床医学专业（医学检验方向）是为培养高层次医学检验医师而设立的新专业方向，在医学检验中引入循证医学理念具有重要意义。本文对循证医学原则在... 循证医学本是一种新的临床医学模式，其理念和方法已经扩展到整个医学教育领域。七年制临床医学专业（医学检验方向）是为培养高层次医学检验医师而设立的新专业方向，在医学检验中引入循证医学理念具有重要意义。本文对循证医学原则在提高学生临床检验技能、培养学生科研创新能力、教会学生终身主动学习以及提高医学检验在临床实践中的地位等方面的应用进行了初步探讨。 展开更多

关键词 循证医学 医学检验 七年制医学教育 应用

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野生型p53基因对白血病K562细胞增殖抑制作用及机制

13

作者 王宏斌 冯文莉 +3 位作者 黄世峰 田文君 曹唯希 黄宗干 《第四军医大学学报》 北大核心 2008年第21期1955-1958,共4页

目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(Ad5GFP),联合阳离子多聚季胺(polyb... 目的:研究重组腺病毒介导的野生型p53基因(Ad5wtp53)对人慢性粒细胞白血病K562细胞增殖的影响及其可能机制.方法:分别将含有Ad5wtp53,突变型p53基因(Ad5mtp53)和绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒表达载体(Ad5GFP),联合阳离子多聚季胺(polybrene)共感染K562细胞,经RT-PCR和Western Blot检测p53mRNA和P53蛋白的表达后,应用流式细胞术分析K562细胞周期、DNA含量的变化.WesternBlot检测P21蛋白、核磷蛋白(NPM)、磷酸化核磷蛋白(Thr199-NPM)的表达情况.结果:Ad5wtp53和Ad5mtp53能在K562细胞中表达p53mRNA和P53蛋白.Ad5wtp53感染K562细胞48,72h后分别有(74.45±12.09)%和(69.80±11.70)%的细胞周期出现G0/G1期阻滞,DNA含量分别下降了32.25%和38.13%;同时P21蛋白的表达升高,核磷蛋白的表达无改变,磷酸化核磷蛋白(Thr199)表达下降.而Ad5mtp53感染组和Ad5GFP感染组未见相应改变.结论:野生型P53蛋白可能通过上调P21的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,抑制S期DNA的合成,降低核磷蛋白第199位苏氨酸残基的磷酸化来抑制K562细胞的增殖. 展开更多

关键词 慢性粒细胞白血病 P53基因 中心体

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hnRNPE2诱骗RNA逆转32D-BCR-ABL细胞四倍性的研究

14

作者 王雅珍 袁颖 +5 位作者 曾建明 魏容 彭智 肖青 陈新敏 冯文莉 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期942-945,共4页

目的初步探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2(hnRNPE2)诱骗RNA对逆转细胞的四倍体特性的作用。方法取32Dcl3细胞(小鼠正常髓母细胞),32D-BCR-ABL细胞(含人类bcr-ablcDNA的转化细胞),32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞(表达hnRNPE2诱骗RNA野生型序... 目的初步探讨多聚胞嘧啶结合蛋白E2(hnRNPE2)诱骗RNA对逆转细胞的四倍体特性的作用。方法取32Dcl3细胞(小鼠正常髓母细胞),32D-BCR-ABL细胞(含人类bcr-ablcDNA的转化细胞),32DP210-pGD细胞和32DP210-pGM细胞(表达hnRNPE2诱骗RNA野生型序列pGD和突变性序列pGM的32D-BCR-ABL细胞)作为研究对象。采用流式细胞仪进行细胞的DNA倍体测定;对细胞进行染色体计数,确定染色体核型;采用Western blotting检测细胞cyclinB1和p53蛋白的表达。结果所有32Dcl3均为含40条正常染色体的二倍体细胞,32DP210-pGD细胞中,75.83%以上为二倍体细胞群;32DP210-pGM细胞与32D-BCR-ABL细胞内分别含81.25%和85.81%的四倍体细胞,含80条染色体。与32D-BCR-ABL细胞相比,32DP210-pGD细胞的cyclinB1蛋白水平表达下调,p53蛋白水平无明显变化;32DP210-pGM细胞的cyclinB1和p53蛋白表达均无明显变化。结论 hnRNPE2诱骗RNA能逆转32D-BCR-ABL细胞的四倍体特性。 展开更多

关键词 白血病 髓样 慢性 融合蛋白质类 bcr-abl 多倍性

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MTS_1基因β启动子E_2F_1结合位点序列突变重组质粒的构建与表达

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作者 冯文莉 刘兴 黄宗干 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 2003年第1期5-9,共5页

目的 :深入研究MTS1 基因 β 启动子的转录激活与E2F1 转录因子的相互作用关系 ,阐明该基因转录水平的调控机制。方法 :用PCR定点突变方法或酶切连接法 ,构建β 启动子0.38kbSacⅡ -SacⅠ酶切片段中E2F1 A、B、C任意2个位点或3个位点均... 目的 :深入研究MTS1 基因 β 启动子的转录激活与E2F1 转录因子的相互作用关系 ,阐明该基因转录水平的调控机制。方法 :用PCR定点突变方法或酶切连接法 ,构建β 启动子0.38kbSacⅡ -SacⅠ酶切片段中E2F1 A、B、C任意2个位点或3个位点均突变的 pGL3 重组质粒。用脂质体介导的基因瞬时转染法 ,将构建的重组质粒转染MTS1 基因双等位缺失的急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞 ,检测pGL3 重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。 结果 :构建的E2F1 A、B、C结合位点突变的重组质粒经SacⅠ或NaeⅠ酶切鉴定和DNA序列分析得到证实。与E2F1 位点野生型重组质粒比较 ,突变型重组质粒在Jurkat细胞中荧光素酶报告基因的表达量减少 ,以3个位点均突变的重组质粒为明显。 结论 :构建的E2F1 A、B、C2个或3个结合位点均突变重组质粒成功 ,可通过基因转染用于研究MTS1 基因的功能试验中 ;MTS1 基因β 启动子的转录活性可能与E2F1 转录因子的反式激活有关。 展开更多

关键词 MTS1基因 E2F1转录因子 基因突变

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人脐血清造血和免疫活性的研究进展 被引量：1

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作者 李维 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 1999年第2期83-84,共2页

人脐血清中G－CSF、M－CSF和GM－CSF水平以及IL－6、IL－1β等因子水平明显高于正常成人血清．人脐血清在体外可刺激造血祖细胞的增殖，在体内可促进小鼠放射损伤后造血功能的恢复。现已知的人脐血清中最为重要的免疫活性物质为AFP，AF... 人脐血清中G－CSF、M－CSF和GM－CSF水平以及IL－6、IL－1β等因子水平明显高于正常成人血清．人脐血清在体外可刺激造血祖细胞的增殖，在体内可促进小鼠放射损伤后造血功能的恢复。现已知的人脐血清中最为重要的免疫活性物质为AFP，AFP可能通过多种机理和途径产生免疫抑制效应。 展开更多

关键词 脐血 造血活性 免疫活性 AFP GCSF M-CSF

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人骨髓基质细胞参与造血调控的研究进展 被引量：1

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作者 李维 《国外医学（临床生物化学与检验学分册）》 1999年第3期132-134,共3页

人骨髓基质细胞（hBMSs）对造血细胞的增殖及分化有支持、诱导和调控作用。上述作用的分子基础主要涉及特异性细胞表面受体、生长因子、细胞粘附分子（CAMs）及细胞外基质（ECM）分子等，这些分子的相互作用介导了细胞间的粘附和造血干... 人骨髓基质细胞（hBMSs）对造血细胞的增殖及分化有支持、诱导和调控作用。上述作用的分子基础主要涉及特异性细胞表面受体、生长因子、细胞粘附分子（CAMs）及细胞外基质（ECM）分子等，这些分子的相互作用介导了细胞间的粘附和造血干细胞的归巢。 展开更多

关键词 骨髓基质细胞 造血调控 细胞粘附分子

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中心体异常与白血病

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作者 王宏斌（综述） 冯文莉（审校） 《国际输血及血液学杂志》 CAS 2007年第3期250-254,共5页

中心体（centrosome）作为大多数真核细胞的主要微管组织中心（microtubule organizing center），在有丝分裂纺锤体（mitotic spindle）的形成及染色体的分离过程中扮演了重要角色。几乎所有的实体瘤都发生了不同程度的数量和结构中心... 中心体（centrosome）作为大多数真核细胞的主要微管组织中心（microtubule organizing center），在有丝分裂纺锤体（mitotic spindle）的形成及染色体的分离过程中扮演了重要角色。几乎所有的实体瘤都发生了不同程度的数量和结构中心体异常。此外，中心体异常已经在几种不同的白血病中有所研究，如急性髓系白血病、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞白血病和成人T细胞白血病等。中心体异常与肿瘤进展及临床侵袭性之间存在着一定相关性，并导致非整倍体（aneuploid）和基因组不稳定（genome instability）。 展开更多

关键词 中心体 白血病 细胞周期 有丝分裂

原文传递

RNAi对白血病细胞mdr-1基因和多药耐药表型的影响 被引量：6

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作者 彭智 冯文莉 +3 位作者 肖志坚 刘澎 王一 韩忠朝 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1074-1077,共4页

目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2... 目的:探讨RNA干扰技术(RNAi)对慢性粒细胞白血病急变细胞系K562/AO2细胞mdr1基因的抑制和耐药表型的逆转作用。方法:选择合成封闭mdr-1基因的小干扰序列(si-MDR1),以1个碱基突变的si-MDR1-mut为对照序列,在脂质体介导下转染至K562/AO2细胞系。RT-PCR和Western blot检测mdr1 mRNA及P-gp蛋白水平,流式细胞术分析细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)积累量,并以四甲基唑蓝快速比色法(MTT)反映K562/AO2对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙药物敏感性的变化。结果:实验证实该序列能高效封闭K562/AO2细胞内mdr-1基因表达,增加细胞内化疗药物DNR积累量,增强K562/AO2细胞对阿霉素、长春新碱、足叶乙甙的敏感性。结论:RNAi可以通过抑制mdr1基因表达,逆转K562/AO2细胞耐药表型。 展开更多

关键词 白血病 RNA 小干扰 基因 mdr-1 K562细胞

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CTP-OD-HA融合蛋白的原核表达及其活性鉴定 被引量：4

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作者 刘钉宾 黄世峰 +6 位作者 曾建明 袁颖 陶昆 温健萍 曹唯希 黄宗干 冯文莉 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期115-119,共5页

目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a... 目的构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,表达并纯化融合蛋白,并检测其在人慢性粒细胞白血病(CML)K562细胞株中的转导活性及胞浆定位。方法分别将胞浆转导肽(CTP)、寡聚化区域(OD)基因和流感病毒血凝素抗原表位(HA)片段依次连接入pET32a(+)质粒,构建重组原核表达质粒pCTP-OD-HA,转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的蛋白回收和FITC标记后,将FITC-CTP-OD-HA融合蛋白作用于K562细胞,观察其转导活性及细胞定位。结果重组原核表达质粒pCTP-OD-HA经酶切及测序鉴定,证明构建正确。37℃,1 mmol/LIPTG诱导4h,目的蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的35%,纯化后纯度达95%以上。FITC-CTP-OD-HA融合蛋白在K562细胞中具有高转导活性和显著的胞浆定位特性。结论已成功构建CTP-OD-HA融合基因原核表达质粒,并高效表达了目的蛋白,为进一步研究其在CML信号转导通路中的作用,阐明CML的发病机制及探讨蛋白肽在CML中的治疗策略奠定了基础。 展开更多

关键词 胞浆转导肽 寡聚化区域 血凝素 慢性粒细胞白血病 原核表达 转导活性 胞浆定位

原文传递