京尼平、维生素E对非酒精性脂肪肝体外模型中解耦联蛋白2及相关因子表达的影响 被引量：9

1

作者 刘琳 管小琴 +1 位作者 王立娟 唐袁婷 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1327-1331,共5页

本实验旨在探讨京尼平和维生素E对非酒精性脂肪肝的作用机理。采用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪肝体外模型,用维生素E(VitE)、京尼平及两者合用干预72 h,观察L02细胞脂变程度、线粒体膜电位变化、检测解耦联蛋白2(UCP2)m... 本实验旨在探讨京尼平和维生素E对非酒精性脂肪肝的作用机理。采用软脂酸诱导L02细胞脂肪变性,建立非酒精性脂肪肝体外模型,用维生素E(VitE)、京尼平及两者合用干预72 h,观察L02细胞脂变程度、线粒体膜电位变化、检测解耦联蛋白2(UCP2)mRNA表达,UCP2、NF-κB和TNF-α蛋白水平表达,以及细胞上清生化水平。结果显示,京尼平和VitE两者合用时肝细胞脂变明显改善,线粒体跨膜电位升高,UCP2的mRNA和UCP2、NF-κB、TNF-α蛋白表达下调(P<0.05),细胞上清中TG、GGT、AST、ALT及MOD含量降低(P<0.05),SOD活力升高(P<0.05)。VitE与京尼平联合应用能显著缓解肝细胞脂肪变性。 展开更多

关键词 脂肪肝 京尼平 维生素E 解耦联蛋白2 核因子-ΚB

原文传递

重叠PCR法合成轮状病毒抗原基因VP4 被引量：8

2

作者 冉丹霞 王荣荣 +2 位作者 郝亚宁 宋方洲 马永平 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期118-119,124,共3页

用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了... 用重叠延伸PCR(overlap extension PCR)法获得轮状病毒VP4基因。根据Genbank中鼠VP4基因的序列设计34对引物,用overlap PCR法合成VP4全基因的两个片段A、B,将A、B分别连入pMD19-T simple载体,测序结果显示,成功合成了VP4全基因。证明了重叠延伸PCR法是获得目的基因的有效方法。 展开更多

关键词 轮状病毒 VP4基因 合成 重叠延伸PCR

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表达HBx的肝前体细胞的小鼠肝内移植模型的构建 被引量：5

3

作者 钟沁 张超 +4 位作者 何雪梅 胡代曦 张锡峰 黄佳祎 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第24期2451-2454,共4页

目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GF... 目的构建表达乙肝病毒X基因(HBx)的肝前体细胞,并经小鼠门静脉注射建立肝内移植模型,为进一步研究HBx对肝前体细胞的作用和影响及其在原发性肝癌发病机制中的作用奠定了基础。方法分别将表达HBx基因的重组腺病毒Ad-HBx-GFP和空载体Ad-GFP转染小鼠肝前体细胞,再经小鼠门静脉注射后3、7、14 d取血清和肝组织,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)变化情况,观察绿色荧光蛋白表达情况,免疫组织化学法观察HBx阳性染色,并取表达高峰在第7天的肝组织,进行Western blot法和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别检测HBx的蛋白及mRNA表达。结果成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,绿色荧光蛋白表达量、免疫组化阳性细胞数量及血清ALT均在注射后第7天达到高峰,RT-PCR及Western blot均检测到第7天14-19/Ad-HBx-GFP组小鼠肝组织目的基因及蛋白的特异性表达,与14-19/Ad-GFP组及生理盐水注射组相比结果具有统计学差异。结论成功构建了表达HBx并靶向针对肝前体细胞的小鼠模型,操作可靠,重复性好,效果稳定,不仅对探讨原发性肝癌的发生机制奠定了基础,也为肿瘤动物模型的构建提供了新的思路。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒X蛋白 肝前体细胞 绿色荧光蛋白 门静脉 小鼠模型

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卵黄囊瘤中肝细胞核因子-1α的表达及鉴别诊断价值

4

作者 贺新月 冀淑勤 +2 位作者 蔡晨宇 徐曼 曹鲜 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第7期852-854,共3页

目的探讨卵黄囊瘤中肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor-1α,HNF-1α)的表达及其在卵黄囊瘤与其它类型生殖细胞肿瘤中的鉴别诊断价值。方法采用免疫组化SP法检测63例卵黄囊瘤和51例其它类型生殖细胞肿瘤中HNF-1α的表达;对比分... 目的探讨卵黄囊瘤中肝细胞核因子-1α(hepatocyte nuclear factor-1α,HNF-1α)的表达及其在卵黄囊瘤与其它类型生殖细胞肿瘤中的鉴别诊断价值。方法采用免疫组化SP法检测63例卵黄囊瘤和51例其它类型生殖细胞肿瘤中HNF-1α的表达;对比分析HNF-1α、AFP、GPC-3在卵黄囊瘤中表达的特异性和敏感性。结果HNF-1α在卵黄囊瘤的瘤细胞胞核弥漫阳性(60/63);在胚胎性癌(0/11)、精原细胞瘤/无性细胞瘤(0/18)和绒毛膜癌(0/7)中均阴性;仅在畸胎瘤(肠型腺体4/15)中呈小灶阳性。卵黄囊瘤中HNF-1α、AFP、GPC-3的敏感性分别为95.24%、85.71%、84.13%,特异性分别为92.16%、94.12%、90.20%。结论HNF-1α在卵黄囊瘤瘤细胞胞核表达广泛,具有较高的敏感性和特异性,在鉴别卵黄囊瘤和其它生殖细胞肿瘤中具有重要意义。 展开更多

关键词 生殖细胞肿瘤 卵黄囊瘤 HNF-1α 免疫组织化学

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HBx基因通过ERK1/2信号通路促肝细胞增殖及炎性因子表达 被引量：5

5

作者 黄欣 张思遥 +4 位作者 王薛 杜彬 毋楠 周梦瑶 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期790-798,共9页

目的利用稳定表达HBx基因的小鼠动物模型探讨HBx基因在体内对肝脏细胞周期和肝脏炎症活动的影响。方法利用携带HBx基因的慢病毒感染肝前体细胞14-19,小鼠肝门静脉注射经改造的肝前体细胞以构建表达HBx基因的小鼠模型。利用qRT-PCR、West... 目的利用稳定表达HBx基因的小鼠动物模型探讨HBx基因在体内对肝脏细胞周期和肝脏炎症活动的影响。方法利用携带HBx基因的慢病毒感染肝前体细胞14-19,小鼠肝门静脉注射经改造的肝前体细胞以构建表达HBx基因的小鼠模型。利用qRT-PCR、Western blot和免疫组化方法检测肝内HBx基因的mRNA和蛋白表达情况。建模后180 d检测小鼠肝组织的细胞周期调控因子CDK4和CyclinD1,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-10(IL-10)的mRNA和蛋白表达水平以及ERK1/2信号转导通路成员ERK1/2和MEK1/2的蛋白表达水平。HE染色观察HBx基因是否引起肝组织病理变化。结果稳定表达HBx基因的小鼠模型构建成功。与生理盐水组和EGFP-14-19组相比,小鼠肝脏组织在转入HBx 180d后HBx显著上调CDK4,CyclinD1,TNF-α的mRNA表达水平(P<0.01),同时显著上调CDK4,CyclinD1,TNF-α蛋白水平;HBx显著下调IL-10的mRNA和蛋白表达水平(P<0.05)。HBx显著激活ERK1/2信号转导通路。给予ERK1/2信号通路抑制剂U0126后,与对照组相比,实验组CDK4和CyclinD1,TNF-α的mRNA表达水平显著下调(P<0.05);同时,CDK4和CyclinD1,TNF-α蛋白水平显著下调,IL-10的mRNA和蛋白表达水平显著上调(P<0.01)。HE染色结果显示小鼠肝脏组织在转入HBx 180d后肝脏组织明显病变。结论HBx通过激活ERK1/2信号通路促进肝细胞增殖,与肝脏炎症有关。 展开更多

关键词 HBX ERK1/2信号通路 细胞周期 炎症 动物模型

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HBx通过Notch信号通路在正常免疫小鼠体内导致肝癌的作用机制 被引量：5

6

作者 周梦瑶 杜彬 +5 位作者 毋楠 黄欣 张思遥 况钦 吴勇 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期883-891,共9页

目的构建长期携带乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)的正常免疫小鼠模型,以探讨HBx在体内导致肝癌发生的机制。方法将转染HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射入昆明小鼠体内构建动物模型,分别于术后30、90、180、360 d收取肝脏组织,We... 目的构建长期携带乙型肝炎病毒X(hepatitis B virus X,HBx)的正常免疫小鼠模型,以探讨HBx在体内导致肝癌发生的机制。方法将转染HBx的肝前体细胞经肝门静脉注射入昆明小鼠体内构建动物模型,分别于术后30、90、180、360 d收取肝脏组织,Western blot和RT-qPCR检测HBx的表达,HE染色观察组织病理切片,Western blot和RT-qPCR检测Notch1、Notch4、Hes1的表达,然后于180 d腹腔注射抑制剂DAPT,Western blot和RT-qPCR检测肝脏细胞凋亡及细胞周期相关因子的表达变化。结果动物模型构建成功且于360 d发生肝癌,与对照组相比,Notch1、Notch4、Hes1的基因及蛋白水平均于30 d呈现显著上调且一直持续至360 d(P<0.05、P<0.05、P<0.001;P<0.05、P<0.05、P<0.01);Bcl-2、CDK4、CyclinE、CyclinD1的蛋白水平在HBx组上调(P<0.001;P<0.01;P<0.001;P<0.01),Bax呈下调(P<0.001),基因水平与其一致(P<0.05;P<0.001;P<0.001;P<0.01;P<0.001),而抑制剂DAPT组显著扭转上述趋势。结论HBx在体内通过持续激活Notch通路引起细胞凋亡及细胞周期异常变化,最终导致肝癌发生。 展开更多

关键词 肝细胞癌 乙型肝炎病毒X 小鼠模型 NOTCH信号通路 DAPT

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PARG基因沉默抑制小鼠结肠癌CT26细胞系体外淋巴管形成 被引量：5

7

作者 吴伟强 王娅兰 +1 位作者 潘娟 颜佳欣 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2011年第6期625-629,共5页

目的初步探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶(PARG)基因沉默对肿瘤淋巴管形成的影响。方法 CT26细胞分为未转染组,空载组和PARG-shRNA慢病毒载体转染组,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染细胞克隆。用Westernblot法检测PARG、PARP-1、NF-κB和VEGF-... 目的初步探讨聚腺苷二磷酸核糖水解酶(PARG)基因沉默对肿瘤淋巴管形成的影响。方法 CT26细胞分为未转染组,空载组和PARG-shRNA慢病毒载体转染组,经嘌呤霉素筛选后获得稳定转染细胞克隆。用Westernblot法检测PARG、PARP-1、NF-κB和VEGF-C蛋白表达。给BALB/c小鼠腹腔注射不完全弗氏佐剂,诱导良性淋巴管瘤形成,分离并培养小鼠淋巴管内皮细胞(LEC)。免疫荧光细胞化学检测VEGFR-3和Podoplanin的表达,共培养实验检测LEC体外淋巴管样结构的形成。结果与对照组相比,PARG-shRNA慢病毒载体转染CT26细胞系后PARP-1、NF-κB及VEGF-C蛋白表达显著减弱,相对灰度值分别为1.0±0.05,0.9±0.02和0.2±0.02(P<0.05)。LEC表达VEGF-C和Podoplanin;PARG沉默组的LEC体外形成淋巴管样结构明显较未转染组和空载组少(P<0.05)。结论 PARG抑制肿瘤淋巴管形成可能与降低VEGF-C的表达有关。 展开更多

关键词 聚(腺苷二磷酸核糖)水解酶 聚(腺苷酸二磷酸核糖)聚合酶-1 转录因子-kappaB 血管内皮生长因子C 肿瘤淋巴管形成

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抵抗素在非酒精性脂肪肝大鼠胰岛素抵抗中的作用 被引量：5

8

作者 朱良荣 管小琴 +1 位作者 祁明美 王立娟 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第2期185-189,共5页

目的探讨抵抗素(Resistin)在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠胰岛素抵抗(Insulinresistance,IR)中的作用。方法采用改良高脂饲料喂养大鼠建立NAFLD IR大鼠模型,以基础饲料喂养的大鼠作为对照组。分别于开... 目的探讨抵抗素(Resistin)在非酒精性脂肪肝(Nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠胰岛素抵抗(Insulinresistance,IR)中的作用。方法采用改良高脂饲料喂养大鼠建立NAFLD IR大鼠模型,以基础饲料喂养的大鼠作为对照组。分别于开始造模后6、8、10周分别采集2组大鼠血清及肝脏组织,测定血清中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、空腹血糖(Fasting plasma glucose,FPG)和空腹胰岛素(Fasting insulin,FINS)含量,并计算胰岛素敏感性指数(Insulin sensitivity index,ISI);HE染色观察肝脏病理学改变;RT-PCR和Western blot检测肝组织中胰岛素受体底物-2(Insulin receptor substrate-2,IRS-2)、抵抗素(Resistin)和核因子(NF-κB)基因的mRNA转录水平和蛋白的表达水平,并进行相关性分析。结果改良高脂饲料喂养的大鼠一般状况发生改变,显示模型复制成功;TG、TC、ALT和AST值的测定及肝组织学检查证实模型组大鼠存在高血脂和肝功损害,且有IR的现象存在;与对照组比较,模型组Resistin和NF-κB的mRNA转录水平和蛋白表达水平均明显增高,且呈时间依赖性(P<0.05),Resistin与NF-κB的表达呈正相关;IRS-2的mRNA转录水平和蛋白表达水平逐渐下降,且呈时间依赖性(P<0.05),与Resistin的表达呈负相关。结论 NAFLD中IR的发生可能与胰岛素信号通路有关,涉及其始动因素IRS-2的减少和Resistin的增加。Resistin不仅能抑制IRS的磷酸化而影响胰岛素上游信号的正常传导,还可能通过激活NF-κB抑制其下游通路的传导,而加重IR反应。 展开更多

关键词 脂肪肝 抵抗素 胰岛素信号通路 胰岛素受体底物-2 胰岛素抵抗

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乙肝病毒X蛋白对人肝细胞内β-catenin定位及转录活性的影响 被引量：5

9

作者 丁浩 何柳兴 冯涛 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第5期475-478,共4页

目的研究HBx对Wnt/Wingless信号传导通路中主要信号分子β-catenin的影响,探讨HBV相关性HCC的发生机制。方法Ad-HBx转染人肝细胞系L02细胞,免疫细胞化学和Luciferase检测细胞中β-catenin细胞定位及活性变化。结果免疫细胞化学:转染重组... 目的研究HBx对Wnt/Wingless信号传导通路中主要信号分子β-catenin的影响,探讨HBV相关性HCC的发生机制。方法Ad-HBx转染人肝细胞系L02细胞,免疫细胞化学和Luciferase检测细胞中β-catenin细胞定位及活性变化。结果免疫细胞化学:转染重组HBx腺病毒前L02细胞中β-catenin仅在细胞质有少量表达,转染后胞质表达明显增强,并出现胞核的大量积聚;Luciferase检测:实验组TOP荧光素酶活性与对照组及空白组相比明显增强,为阴性对照的11倍(P<0.05),Ad-HBx感染后24 h和36 h的TOP荧光素酶活性无显著差异。结论Ad-HBx重组腺病毒在体外能有效转染人肝细胞系L02细胞,受感染细胞能有效表达HBx蛋白,HBx影响了人肝细胞系L02细胞中β-catenin的细胞定位及转录活性。 展开更多

关键词 WNT/Β-CATENIN信号转导通路 HBX Β-CATENIN 腺病毒载体 肝细胞肝癌

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HBx基因激活Akt/mTOR信号通路抑制肝脏细胞凋亡 被引量：4

10

作者 王薛 霍本念 +3 位作者 刘洁 黄欣 张思遥 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期931-938,共8页

目的构建KM小鼠HBx (hepatitis B virus X)表达模型,探讨HBx对正常免疫功能小鼠肝脏细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法采用qRT-PCR和Western blot检测HBx在肝前体细胞(hepatic progenitor cells, HPCs)中的表达;将表达HBx的肝前体细... 目的构建KM小鼠HBx (hepatitis B virus X)表达模型,探讨HBx对正常免疫功能小鼠肝脏细胞凋亡和周期的影响及其机制。方法采用qRT-PCR和Western blot检测HBx在肝前体细胞(hepatic progenitor cells, HPCs)中的表达;将表达HBx的肝前体细胞通过肝门静脉注射到KM小鼠体内建立动物模型,手术120 d后分别使用qRT-PCR,Western blot和免疫组化的方法检测小鼠肝脏组织中HBX的表达;Western blot和qRT-PCR方法检测小鼠肝脏细胞凋亡和周期相关因子以及Akt/mTOR信号通路因子的表达水平;采用TUNEL-FITC/DAPI方法检测小鼠肝脏细胞的凋亡率。结果 HBx组的小鼠肝脏细胞的凋亡率降低,促凋亡因子caspase-9和Bad的mRNA和蛋白质表达水平均降低;CDK2、cyclinD1的mRNA表达水平升高,CDK2、cyclinD1、p-Akt以及p-mTOR的蛋白质表达水平升高;给予携带HBx的小鼠Akt磷酸化抑制剂MK2206可显著扭转HBx对上述基因的mRNA及蛋白质的表达影响。结论 HBx在体内激活Akt/mTOR信号通路抑制了小鼠肝脏细胞的凋亡和上调细胞周期调控因子的表达。 展开更多

关键词 HBX 动物模型 凋亡 AKT/MTOR

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HBx基因抑制肝前体细胞凋亡与分化的小鼠体内研究 被引量：4

11

作者 霍本念 刘洁 +3 位作者 王薛 张婷 刘梦楠 冯涛 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期406-414,共9页

目的构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响。方法从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细... 目的构建将乙肝病毒X(hepatitis B virus X,HBx)基因导入小鼠肝脏内的动物模型,探讨HBx蛋白对小鼠体内肝前体细胞凋亡与分化的影响。方法从小鼠肝门静脉注射携带HBx基因的肝前体细胞和生理盐水,于第30、60、90、120天收取小鼠肝前体细胞标本,通过RT-PCR和Western blot验证HBx基因在肝前体细胞中的表达;通过荧光显微镜、免疫组织化学染色法、RT-PCR检测细胞株是否到达小鼠肝脏并表达目的基因;使用TUNEL-FITC/DAPI法、RT-PCR和Western blot检测肝前体细胞的凋亡和分化情况。结果携带了HBx基因的肝前体细胞株成功到达小鼠肝脏内并表达HBx蛋白,TUNEL-FITC/DAPI法显示HBx显著抑制小鼠肝前体细胞发生凋亡,RT-PCR和Western blot结果显示,抗凋亡蛋白Bcl2、Mcl-1的表达上调,促凋亡蛋白Bax的表达下调,细胞分化早期指标CK19表达增加,而细胞晚期分化指标CK18表达降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 HBx蛋白在小鼠体内可以抑制肝前体细胞凋亡和分化成熟,诱发肝癌发生的早期事件。 展开更多

关键词 乙肝病毒X蛋白 肝前体细胞 凋亡 分化 动物模型

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抑制NFBD1的表达对鼻咽癌化疗敏感性的影响 被引量：3

12

作者 刘丹丹 胡国华 +1 位作者 刘学良 卜友泉 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期393-396,共4页

目的:研究抑制NFBD1表达后,对鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞化疗敏感性的影响。方法:将NFBD1 siRNA导入NPC细胞系,采用RT-PCR和蛋白质印记法检测siRNA对NPC细胞NFBD1表达的抑制效果;NFBD1 siRNA转染后,MTT法分析NPC细胞对... 目的:研究抑制NFBD1表达后,对鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞化疗敏感性的影响。方法:将NFBD1 siRNA导入NPC细胞系,采用RT-PCR和蛋白质印记法检测siRNA对NPC细胞NFBD1表达的抑制效果;NFBD1 siRNA转染后,MTT法分析NPC细胞对化疗药物敏感性的影响。结果:NFBD1 siRNA转染NPC细胞后,能高效、特异地在mRNA水平及蛋白质水平抑制NFBD1的表达;MTT结果分析表明,NFBD1 siRNA转染后,能显著提高NPC细胞系对化疗药物的敏感性。结论:NFBD1 siRNA转染后抑制NPC NFBD1表达,可显著提高其对化疗药物顺铂的敏感性。 展开更多

关键词 NFBD1 鼻咽癌 化疗敏感性

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两种棘球绦虫的水通道蛋白基因克隆及功能特性的比较 被引量：3

13

作者 刘许诺 王芬 +3 位作者 吴宏烨 李锴 范俊杰 叶彬 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期501-508,共8页

目的探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin,AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体,... 目的探索棘球绦虫水通道蛋白(aquaporin,AQP)在棘球蚴、泡球蚴囊液形成中的作用,为阐明棘球蚴、泡球蚴囊液的形成过程以及筛选棘球蚴病新的药物治疗靶点提供理论依据。方法利用RT-PCR扩增棘球蚴、泡球蚴AQPs基因,构建AQPs体外转录载体,并在非洲爪蟾(Xenopus laevis)卵母细胞中进行异源表达,以验证其水通道功能。利用生物信息学方法分析两种棘球绦虫水通道蛋白跨膜结构域特点及差异,并对棘球绦虫和人AQPs进行多序列比对,分析棘球绦虫AQPs序列结构与人AQPs的差异。结果通过RT-PCR成功克隆了棘球蚴EgAQP4和EgAQP9、泡球蚴EmAQP4和EmAQP9四个基因,注射了这些基因cRNA的卵母细胞与注射DEPC水的对照组卵母细胞的体积变化率(V/V0)差别无统计学意义(F=1.143,P>0.05),透水系数差别亦无统计学意义(F=1.416,P>0.05),这四个AQPs基因在非洲爪蟾卵母细胞中未表现出水通道的功能。跨膜结构域预测及多序列比对结果表明,与经典的水通道蛋白相比,EgAQP4和EmAQP4虽然N和C末端均位于胞质侧,但跨膜结构域数目为4个,NPA基序替换为NPM和NPT;而EgAQP9和EmAQP9虽然具有2个保守的NPA基序,但跨膜结构域数目为5个,N末端位于胞外侧、C末端位于胞质侧。棘球绦虫AQPs蛋白结构存在的这些差异,可能与其在卵母细胞中未表现水通道蛋白的功能有关。结论两种棘球绦虫基因组中都存在编码AQPs的基因,但这些AQPs基因的功能验证试验未见到水通道功能。该结果可能正好说明了囊液的水分子既不能通过AQPs进入生发层细胞而致使细胞肿胀坏死,也不能以AQPs为通道从生发层细胞转移出囊壁,致使囊液累积、棘球蚴包囊或泡球蚴囊泡体积长大。 展开更多

关键词 细粒棘球绦虫 多房棘球绦虫 单房棘球蚴 多房棘球蚴 水通道蛋白

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血清ANGPTL3含量与老年代谢综合征的关系 被引量：1

14

作者 王继红 肖亚雄 +4 位作者 孔渝菡 王永红 李晞 任晓玲 陈瑶 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第16期2248-2250,共3页

目的通过测定人血清血管生成素样蛋白3(angiopioetin-like protein3,ANGPTL3)的表达水平,探讨ANGPTL3表达量与代谢综合征(Metabolic syndrome,MS)的关系。方法随机筛选12例老年MS患者为MS组,以10例健康受试者为对照组,采用酶联免疫吸附... 目的通过测定人血清血管生成素样蛋白3(angiopioetin-like protein3,ANGPTL3)的表达水平,探讨ANGPTL3表达量与代谢综合征(Metabolic syndrome,MS)的关系。方法随机筛选12例老年MS患者为MS组,以10例健康受试者为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测每例受试者血清ANGPTL3蛋白质水平。结果 MS组ANGPTL3平均值为(69.15±41.63)mg/L,对照组为(30.81±9.12)mg/L,组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。MS组内女性血清ANGPTL3蛋白质浓度明显高于男性,差异有统计学意义(P<0.05),而对照组内男、女两性血清ANGPTL3蛋白质浓度差异无统计学意义。结论老年MS病人体内ANGPTL3含量明显升高,ANGPTL3可能在老年MS病人体内脂代谢和糖代谢紊乱过程中发挥了重要作用。 展开更多

关键词 血管生成素样蛋白3 代谢综合征 脂代谢紊乱 糖代谢紊乱

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乙肝病毒X蛋白上调骨桥蛋白表达增强肝癌细胞干性的研究 被引量：2

15

作者 李政言 祥蔚 +4 位作者 王晓东 刘梦楠 冯涛 甘立霞 谢斌 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期553-558,共6页

目的在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中探讨乙肝病毒x蛋白(HBx)对骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达及肝癌细胞干性的影响。方法采用免疫印迹(Western blot,WB)及免疫组化等方法在肝癌组织标本上检测OP... 目的在乙型肝炎病毒(HBV)相关性肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中探讨乙肝病毒x蛋白(HBx)对骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达及肝癌细胞干性的影响。方法采用免疫印迹(Western blot,WB)及免疫组化等方法在肝癌组织标本上检测OPN表达水平与患者性别、年龄、AFP、HBV病毒复制量、肿瘤大小、TNM分期等临床病理因素的关系;在稳定整合HBV基因组的HepG2.2.15细胞系及慢病毒介导的HBx转染HepG2细胞中,进一步验证HBV及HBx过表达对OPN及干性相关转录因子Nanog、Oct4,干性细胞表面标记分子CD44、CD90、Ep CAM表达水平的影响。结果免疫组化及WB检测结果均表明OPN在HBV阳性的HCC肝癌组织中的表达水平显著高于HBV阴性的肝癌组织(P<0.05)。HepG2.2.15细胞中OPN的mRNA及蛋白质含量较HepG2细胞显著增加(P<0.05);在HepG2细胞中,过表达HBx显著上调OPN mRNA及蛋白质水平(P<0.05),流式细胞术定量分析显示过表达HBx的HepG2细胞中Ep CAM、CD90阳性的干性细胞数量明显升高(P<0.05),实时定量PCR显示干性相关转录因子Nanog、Oct4及其表面标志分子CD44、CD90、Ep CAM水平显著升高。结论 HBx能够显著上调OPN的表达,并增强肝癌细胞的干性,提示HBx/OPN/肝癌细胞干性增强通路可能在HBV相关HCC患者预后不良中具有重要作用。 展开更多

关键词 骨桥蛋白 乙肝病毒X蛋白 肝细胞肝癌 干性

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新型基因组编辑蛋白FnCpf1的表达、鉴定及多克隆抗体的制备 被引量：2

16

作者 孙菱 卢楠 +6 位作者 杨春 康月茜 杨婕 何永林 方陈城 吴宣艳 王瑜伟 《重庆医科大学学报》 CSCD 北大核心 2017年第5期521-525,共5页

目的:构建土拉弗朗西丝菌Novicida亚种Cpf1蛋白编码基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、纯化重组Fn Cpf1蛋白后,制备兔抗Fn Cpf1多克隆抗体。方法:利用PCR技术扩增Fn Cpf1基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中并转化大肠杆菌BL21... 目的:构建土拉弗朗西丝菌Novicida亚种Cpf1蛋白编码基因的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达、纯化重组Fn Cpf1蛋白后,制备兔抗Fn Cpf1多克隆抗体。方法:利用PCR技术扩增Fn Cpf1基因,将其克隆到原核表达载体pET-32a(+)中并转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白的表达,通过镍离子金属螯合磁珠亲和纯化得到纯度较高的Fn Cpf1蛋白,将纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备Fn Cpf1多克隆抗体,并用间接ELISA法检测兔抗血清效价、Western blot鉴定其特异性。结果:扩增得到3 900 bp的目的基因片段,克隆到表达载体pET-32a(+)后,通过双酶切及测序证实pET-32a(+)-Fn Cpf1表达载体构建成功,可诱导表达相对分子质量160 k D的目的蛋白,经SDS-PAGE分析其为可溶性,通过镍离子金属螯合磁珠亲和纯化得到纯度为95%以上的Fn Cpf1蛋白,制备多克隆抗体并检测兔抗Fn Cpf1抗血清ELISA效价达1:512 000,Western blot结果显示制备的抗体可较好地与Fn Cpf1蛋白特异性结合。结论:在原核系统中成功表达了Fn Cpf1重组蛋白,并用纯化后的蛋白制备出兔抗Fn Cpf1抗体,效价及特异性均良好,为进一步探讨Cpf1蛋白的生物学特性打下实验基础。 展开更多

关键词 基因编辑 CRISPR-Cas FnCpf1 多克隆抗体

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HBc蛋白与NIRF蛋白细胞外相互作用鉴定 被引量：2

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作者 杨艳 金方敏 +2 位作者 白露 王筱绘 段昌柱 《生物学杂志》 CAS CSCD 2012年第1期21-24,46,共5页

构建原核表达质粒pGST-HBc,真核表达质粒pFLAG-NIRF,表达并纯化GST-HBc蛋白,表达FLAG-NIRF蛋白,利用GST pull down技术鉴定HBc与NIRF蛋白的相互作用。利用PCR技术分别扩增HBc编码框和NIRF基因全长,并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-... 构建原核表达质粒pGST-HBc,真核表达质粒pFLAG-NIRF,表达并纯化GST-HBc蛋白,表达FLAG-NIRF蛋白,利用GST pull down技术鉴定HBc与NIRF蛋白的相互作用。利用PCR技术分别扩增HBc编码框和NIRF基因全长,并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体p3*FLAG-CMV-10中,构建出pGST-HBc及pFLAG-NIRF。pFLAG-NIRF转染HEK293,培养48 h,收获前10 h加入MG132抑制蛋白酶体,收获细胞,经NP40裂解后离心收集上清pGST-HBc转化BL21(DE3)细菌,优化培养条件使GST-HBc在上清中大量表达,然后用GST4Bgel亲合纯化该蛋白,结合有GST-HBc蛋白与含FLAG-NIRF的细胞上清孵育后,离心收集GST 4Bgel,经洗脱液洗脱后蛋白电泳,western blotting分析。构建了pGST-HBc及pFLAG-NIRF,在上清中成功表达GST-HBc并纯化该蛋白,在细胞中成功表达FLAG-NIRF,GST pull down结果显示两者存在体外相互结合。HBc与NIRF能够在细胞外发生相互结合。 展开更多

关键词 HBC NIRF 相互作用 GST PULL down

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人ETV4蛋白截短体的构建与其在结直肠中的功能分析 被引量：2

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作者 刘浩 刘心 +4 位作者 王义涛 张春冬 卜友泉 雷云龙 易发平 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1199-1204,共6页

目的:研究ETV4转录因子各保守结构在转录调节结直肠癌细胞增殖以及迁移过程中的作用以及机制。方法:利用PCR介导的克隆技术,在前期构建的ETV4载体基础上,构建含不同ETV4结构域的蛋白截短体ETV4(1~339)(包含酸性结构域)与ETV4(340~484)(... 目的:研究ETV4转录因子各保守结构在转录调节结直肠癌细胞增殖以及迁移过程中的作用以及机制。方法:利用PCR介导的克隆技术,在前期构建的ETV4载体基础上,构建含不同ETV4结构域的蛋白截短体ETV4(1~339)(包含酸性结构域)与ETV4(340~484)(含DNA结合结构域)。利用CCK-8试剂盒检测不同截短体对结直肠癌细胞增殖的影响,利用细胞划痕实验检测不同截短体对结直肠癌细胞迁移的影响。进一步利用定量PCR技术检测表达不同截短体过表达细胞中上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物的变化情况。结果:CCK-8实验结果显示截短体ETV4(1~339)无明显促进结直肠癌细胞增殖的作用,而截短体ETV4(340~484)和全长蛋白都可明显促进结直肠癌细胞增殖(P<0.01)。细胞划痕实验显示截短体ETV4(340~484)和全长蛋白可促进结直肠癌细胞迁移而截短体ETV4(1~339)却无此作用。进一步对EMT标志物检测发现ETV4(340~484)和全长蛋白可导致E-cadherin表达下降,N-cadherin、Vimentin和Twist表达上调(P<0.01),而ETV4(1~339)中EMT标志物无明显变化。结论:本实验首次证明,ETV4促进结直肠癌细胞增殖和迁移主要是通过ETV4中的ETS结构域起作用,并且可能通过介导EMT标志物来调控结直肠癌细胞转移。 展开更多

关键词 ETV4 转录因子 结直肠癌 细胞增殖 迁移

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特异性ILK siRNA对膀胱癌移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响 被引量：2

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作者 高娟 朱军 +2 位作者 潘湘阳 李红彦 陈俊霞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第18期1947-1950,共4页

目的探讨应用整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)特异siRNA沉默ILK基因的表达对膀胱癌裸鼠移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响。方法实验分3组:BIU-87细胞组(正常BIU-87细胞)、BIU-87-NC组(转染阴性对照质粒的BIU-87细胞)... 目的探讨应用整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)特异siRNA沉默ILK基因的表达对膀胱癌裸鼠移植瘤生长及p-Akt、p-GSK3β表达的影响。方法实验分3组:BIU-87细胞组(正常BIU-87细胞)、BIU-87-NC组(转染阴性对照质粒的BIU-87细胞)、BIU-87 siRNA(转染干扰质粒的BIU-87细胞)。将ILK特异性siRNA转染人膀胱癌BIU-87细胞,筛选稳定表达ILK siRNA的BIU-87细胞,将其注入裸鼠皮下,检测裸鼠移植瘤的大小和质量,HE染色观察移植瘤组织的形态学变化,利用免疫组化技术检测移植瘤组织中微血管的变化及p-Akt和p-GSK3β的表达。结果 BIU-87siRNA组较BIU-87与BIU-87-NC组,瘤体质量显著降低(P<0.01),抑瘤率分别为64.73%和66.73%。BIU-87 siRNA组癌细胞较BIU-87与BIU-87-NC组体积减小,核浆比例明显缩小,细胞核染色较浅,核分裂相显著减少,BIU-87 siRNA组微血管较BIU-87与BIU-87-NC组明显减少甚至无血管出现,BIU-87 siRNA组p-Akt和p-GSK3β的表达呈弱阳性反应。结论特异性ILK siRNA能抑制膀胱癌裸鼠移植瘤的生长,并通过降低p-Akt和p-GSK3β的表达抑制膀胱癌裸鼠移植瘤的增殖。 展开更多

关键词 整合素连接激酶 膀胱癌 移植瘤 生长

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NIRF蛋白的原核表达及纯化 被引量：2

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作者 杨艳 金方敏 +1 位作者 钱冠华 段昌柱 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2011年第1期56-60,共5页

目的 原核表达NIRF基因,并纯化NIRF蛋白。方法 PCR扩增全长NIRF基因,克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用GST 4B球珠亲和纯化目的蛋白。结果重组表达质粒pGST-NIRF经酶切鉴定证明构建正确。22℃条... 目的 原核表达NIRF基因,并纯化NIRF蛋白。方法 PCR扩增全长NIRF基因,克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1中,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并用GST 4B球珠亲和纯化目的蛋白。结果重组表达质粒pGST-NIRF经酶切鉴定证明构建正确。22℃条件下培养,菌体A600值达1.8时,加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG诱导7 h,能使GST-NIRF在上清中大量表达;纯化的重组GST-NIRF蛋白纯度达85%以上,可与GST抗体和NIRF抗体发生特异性结合。结论已成功在大肠杆菌中表达了GST-NIRF蛋白,纯化的蛋白可用于NIRF的生物功能活性研究。 展开更多

关键词 NIRF GST标签 原核细胞 基因表达 纯化

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