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体内外高糖对血管生成素样蛋白3表达的影响
1
作者 肖亚雄 王继红 孔渝菡 《天津医药》 CAS 北大核心 2010年第8期641-643,共3页
目的:观察人体血液中葡萄糖浓度对血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因及蛋白质表达的影响,探讨ANGPTL3与糖尿病发生的关系。方法:以人血清和L02细胞作为研究对象,从临床采集健康人(健康对照组)、高血糖组空腹血清各10例,各组男女比例均为5... 目的:观察人体血液中葡萄糖浓度对血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因及蛋白质表达的影响,探讨ANGPTL3与糖尿病发生的关系。方法:以人血清和L02细胞作为研究对象,从临床采集健康人(健康对照组)、高血糖组空腹血清各10例,各组男女比例均为5∶5。用ELISA法测定血清ANGPTL3蛋白质浓度、全自动生化仪测定血糖浓度。将L02细胞置于含5.6、7.1、11.2及20.0mmol/L葡萄糖培养基中培养,以葡萄糖浓度5.6mmol/L为对照组,用RT-PCR方法检测L02细胞ANGPTL3的mRNA表达量,并用Western Blot方法检测其蛋白质表达量。结果:高血糖组血清ANGPTL3蛋白质含量较健康组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。体外培养基中高浓度葡萄糖可以促进L02细胞ANGPTL3基因和蛋白质表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:体内外高糖环境均可以上调ANGPTL3的表达。ANGPTL3高表达可能与糖尿病发生存在一定关联。 展开更多
关键词 血管生成素类 糖尿病 葡萄糖 血液 体外研究 肝细胞 RNA 信使
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人MCPH1基因重组慢病毒的制备及稳定感染HeLa细胞系的建立
2
作者 麦力 张冀 +4 位作者 刘革力 卜友泉 李韵 樊建军 宋方洲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期290-294,共5页
目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包... 目的 :构建人MCPH1(microcephalin 1)基因重组慢病毒载体并建立稳定过表达MCPH1基因的宫颈癌HeLa细胞株。方法:将MCPH1基因重组到pLenO-DCE质粒中,构建重组质粒pLenO-DCE-MCPH1,经酶切和测序鉴定后,与慢病毒包装质粒共转染293T细胞,包装重组慢病毒,滴度测定后,感染HeLa细胞,用有限稀释法筛选稳定的细胞克隆,real-time PCR和Western blot分别检测细胞中MCPH1 mRNA和蛋白水平。结果:经酶切和测序鉴定,成功构建MCPH1重组慢病毒载体,并成功包装慢病毒,滴度为1.24×109 TU/ml;慢病毒感染HeLa细胞后经有限稀释法成功筛选到MCPH1稳定表达细胞株pLenO-DCEMCPH1-HeLa;real-time PCR证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株较正常组HeLa(P=0.000)和pLenO-DCE-HeLa组(P=0.000)的MCPH1 mRNA水平显著地增高;Western blot进一步证实pLenO-DCE-MCPH1-HeLa细胞株过表达MCPH1。结论:成功构建MCPH1重组慢病毒,并建立了稳定表达MCPH1基因的细胞株pLenO-DCE-MCPH1-HeLa,为进一步研究MCPH1在宫颈癌中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 慢病毒 MCPH1基因 宫颈肿瘤 单克隆细胞
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带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用 被引量：2
3
作者 符少月 焦庆昉 +3 位作者 黄启彬 刘潇淇 易发平 宋方洲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期512-516,共5页
目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillom... 目的:探索带有HPV-16 E6/E7基因的树突状细胞(dendritic cell,DC)疫苗对裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的抗肿瘤作用。方法:体外诱导培养C57BL/6小鼠骨髓的未成熟DC(immature DC,imDC),将已经成功构建的携带人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)-16 E6/E7基因的重组腺病毒感染imDC,Western blot检测E7蛋白的表达;构建裸鼠的人宫颈癌CaSki细胞移植瘤模型,应用DC疫苗诱导的BALB/c小鼠脾脏的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)处理后,观察裸鼠肿瘤体积变化,肿瘤长出第28天后处死裸鼠,小心剥下肿瘤组织,石蜡包埋,HE染色观察各组肿瘤的细胞形态,免疫组织化学技术法检测肿瘤组织中Bcl-2、Bax蛋白的表达情况。结果:成功培养出DC并制备出DC疫苗;第28天各组裸鼠肿瘤体积pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组与pAd-mock-DC-CTL-CaSki组、DC-CTL-CaSki组、CaSki组相比较,pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组裸鼠肿瘤体积最小(P<0.05);免疫组化检测肿瘤组织中Bax蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最高,而CaSki组表达最低;免疫组化检测肿瘤组织中Bcl-2蛋白的表达结果显示pAd-E6/E7-DC-CTL-CaSki组最低,而CaSki组表达最高。结论:带有HPV-16 E6/E7DC疫苗能够诱导CTL抑制裸鼠人宫颈癌CaSki细胞移植瘤的生长。 展开更多
关键词 树突状细胞 人乳头瘤病毒16 T淋巴细胞 CASKI细胞
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