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题名MDR1基因稳定表达的人肝癌多药耐药细胞株的建立
被引量：4
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作者
王学军
戴宗晴
刘志苏
张有顺
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机构
郧阳医学院附属东风医院肝胆外科研究所
武汉大学中南医院肝胆外科
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出处
《实用癌症杂志》
2003年第6期580-582,共3页
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文摘
目的 建立多药耐药基因 (MDR1)稳定表达的人肝癌Bel 740 2耐药细胞株 ,为应用RNA干扰技术逆转肿瘤多药耐药基因的表达提供实验模型。方法 应用阿霉素 (ADM )长期培养筛选建立Bel 740 2耐药细胞株 ,应用MTT法、流式细胞仪(FCM )及逆转录聚合酶链反应 (RT PCR )对该细胞株相关特性 (耐药范围、致死剂量、p 糖蛋白功能及其表达阳性率、MDR 1基因检测 )进行比较研究。结果 经MTT法检测 ,耐药细胞株耐药性明显增高 ,FCM检查发现从敏感细胞到耐药细胞 ,其阿霉素潴留功能由 77.7%降至 2 5 .1% ,P 糖蛋白 (P gp)阳性率由 1.4%升高至 5 4.0 % ,RT PCR检查显示该细胞中MDR1mRNA呈高表达。结论 成功建立了稳定表达MDR1基因的人肝癌Bel 740 2耐药细胞株 ,该细胞中P gp呈高表达 。
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关键词
MDR1基因
稳定表达
肝癌
多药耐药细胞株
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Keywords
Multi-drug resistant strain
Human hepatocarcinoma Bel-7402 cell
MDR1 gene
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分类号
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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题名介导MDR1的RNAi腺病毒载体的构建
被引量：2
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作者
张志云
郑启昌
戴宗晴
张有顺
邹灿
黄玲
王菊
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机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院肝胆外科
郧阳医学院附属东风总医院肝胆外科研究所
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出处
《肿瘤防治研究》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第11期798-801,共4页
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基金
湖北省教育厅资助项目(2004D006)
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文摘
目的介导MDR1的RNAi腺病毒载体,探讨RNA干扰MDR1基因对人肝癌细胞的作用。方法根据MDR1mRNA序列构建表达MDR1mRNA特异的shRNA的腺病毒穿梭质粒pshuttle-MDR1。与腺病毒载体体内重组为pAd-MDR1后转染人肝癌细胞SMMC-7721,以FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率,以共聚焦显微镜检测细胞内Rh123的潴留,WesternBlot检测P-gp蛋白量的变化。结果构建成pshuttle-MDR1经限制性酶切和PCR证实与设计一致,将pAd-MDR1转染肝癌细胞SMMC-7721后,FCM检测细胞表面膜蛋白P-gp表达阳性率为22.9%和30.8%,远低于对照组(85.8%)。WesternBlot经病毒感染的SMMC-7721/R的P-gp含量明显低于对照SMMC-7721/R,而与SMMC-7721/S细胞接近。结论成功构建了pshuttle-MDR1腺病毒载体,并有效干扰了肝癌细胞细SMMC-7721MDR1的表达。
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关键词
RNAI
肝癌细胞
多药耐药基因
腺病毒载体
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Keywords
RNA interference
Hepatocellular carcinoma cell
MDR1
Adenovirus vector
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分类号
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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