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METTL3 N6-甲基腺嘌呤修饰circSAFB2调控骨肉瘤细胞侵袭和凋亡
1
作者 李劲峰 李炳秋 +6 位作者 纪元元 时利军 宋萌晨 王义生 李月白 毛克亚 刘宏建 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第8期1794-1797,共4页
目的观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63, qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。... 目的观察甲基转移酶(METTL3)介导N6-甲基腺嘌呤(m6A)修饰修饰circSAFB2对骨肉瘤细胞侵袭和凋亡的影响。方法选取经病理确诊的骨肉瘤标本16例及骨肉瘤细胞株MG63, qRT-PCR检测骨肉瘤组织与MG63细胞中METTL3 mRNA和circSAFB2的表达水平。使用SRAMP prediction server在线预测软件对circSAFB2中m6A甲基化位点进行预测, 并通过m6A MeRIP-qPCR对骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2存在m6A甲基化修饰进行验证。应用MeRIP-qPCR检测骨肉瘤组织和MG63细胞中circSAFB2 m6A甲基化修饰水平。分别将METTL3 siRNA重组慢病毒、METTL3 NC重组慢病毒感染骨肉瘤细胞后, 通过放线菌素D、Transwell和流式细胞仪分别检测各组细胞RNA稳定性、侵袭和凋亡, 两样本两组间比较用t检验;多组间比较采用单因素方差分析、组间比较采用LSD法。结果 METTL3 mRNA(2.354±0.224)和circSAFB2(2.072±0.264)在骨肉瘤组织中的表达量高于癌旁组织(1.000±0.089、1.000±0.104, P<0.05)。骨肉瘤细胞系MG63中METTL3(2.429±0.211)和circSAFB2 mRNA(2.271±0.214)表达量高于正常人成骨细胞(1.000±0.100、1.000±0.136, P<0.05)。SRAMP在线m6A甲基化位点预测结果显示, circSAFB2的115和234位存在m6A甲基化修饰位点;骨肉瘤组织和MG63细胞中, m6A抗体免疫共沉淀的circSAFB2丰度(18.397±1.627、23.338±2.225)均显著高于IgG抗体(1.000±0.130、1.000±0.060, P<0.01), 证实circSAFB2上存在m6A甲基化修饰。MeRIP-qPCR检测结果显示, 骨肉瘤组织circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.264±0.217)高于癌旁组织(1.000±0.070, P<0.05);MG63细胞中circSAFB2 m6A RNA甲基化修饰水平(3.379±0.205)高于正常人成骨细胞(1.000±0.064, P<0.05)。转染METTL3 siRNA重组慢病毒的MG63细胞(si-METTL3组), 放线菌素D处理6 h和12 h, circSAFB2表达水平(72.570±4.809、52.195±3.081)低于转染METTL3 NC重组慢病毒组(si-NC组)(87.540±5.539、71.131±4.320, P<0.05)。si-METTL3组侵袭数量(54.333±6.429)低于si-NC组(12 展开更多
关键词 m6A甲基化 骨肉瘤 凋亡 侵袭
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HPV16/18型感染患者的阴道微生态状况分析 被引量：5
2
作者 王盼 张梦真 +1 位作者 侯文静 苏玥辉 《重庆医学》 CAS 2018年第35期4540-4542,共3页
目的探讨HPV不同亚型感染患者的阴道微生态状况。方法选取2016年9月至2017年5月在该院妇科门诊就诊并行HPV、阴道微生态检查的女性患者986例并分析阴道微生态[阴道清洁度、pH、细菌性阴道病(BV)、滴虫感染(TV)、外阴假丝酵母菌病]状况... 目的探讨HPV不同亚型感染患者的阴道微生态状况。方法选取2016年9月至2017年5月在该院妇科门诊就诊并行HPV、阴道微生态检查的女性患者986例并分析阴道微生态[阴道清洁度、pH、细菌性阴道病(BV)、滴虫感染(TV)、外阴假丝酵母菌病]状况。结果986例患者中,HPV阳性256例,占26.0%。256例HPV阳性患者中,HPV16阳性80例(31.3%),HPV18阳性27例(10.5%),其他HPV阳性149例(58.2%)。其中清洁度Ⅲ～Ⅳ度、pH≥4.5、BV、TV的发生率分别为89.8%(230/256)、89.0%(228/256)、36.3%(93/256)、12.1%(31/256),均高于HPV阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。HPV16/18阳性患者中,BV发生率45.8%,高于非HPV16/18阳性患者的发生率(32.2%),差异有统计学意义(P<0.05),而两组清洁度Ⅲ～Ⅳ度、pH≥4.5、TV、VVC比较,差异无统计学意义(P>0.05)。多因素分析结果显示HPV16/18阳性与BV有明显相关性(OR=1.886,95%CI:1.113～3.196,P<0.05)。结论 HPV阳性时,清洁度Ⅲ～Ⅳ度、pH≥4.5、BV、TV发生率升高,尤其BV发病率升高与HPV16/18感染有关。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒16 人乳头瘤病毒18 阴道病 细菌性 滴虫性阴道炎 外阴阴道假丝酵母菌病
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宫颈癌相关成纤维细胞的分离与鉴定 被引量：5
3
作者 侯文静 张梦真 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2016年第3期171-175,共5页
目的宫颈癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)在宫颈癌的进展中起着重要作用,原代成纤维细胞培养与体内微环境更为接近。本研究旨在分离纯化并鉴定CAF,初步探讨CAF的生物学特性。方法选择郑州大学第一附属医院妇科2015-... 目的宫颈癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAF)在宫颈癌的进展中起着重要作用,原代成纤维细胞培养与体内微环境更为接近。本研究旨在分离纯化并鉴定CAF,初步探讨CAF的生物学特性。方法选择郑州大学第一附属医院妇科2015-01-04-03-27收治的患者6例。用胶原酶消化法分离宫颈正常成纤维细胞(normal fibroblast,NF)和CAF;显微镜下观察细胞形态;用CCK-8法绘制生长曲线;ELISA法检测细胞上清中人转化生长因子β1(transforming growth factor betal 1,TGF-β1)的分泌水平;免疫荧光法及蛋白质印迹法检测细胞标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin,α-SMA)和成纤维细胞活化蛋白α(fibroblast activation proteinα,FAPα)。结果 CAF大小、形状不一,密度接触抑制消失;NF大小、形状一致,存在密度接触抑制。CAF的生长速度快于NF,z=-2.160,P=0.031。CAF中TGF-β1的浓度为(449.93±19.99)ng/L,而NF中为(209.50±16.25)ng/L,二者差异有统计学意义,z=-2.611,P=0.008。CAF高表达α-SMA和FAPα,而NF不表达α-SMA和FAPα,两者均表达Vimentin。结论成功分离纯化并鉴定CAF。CAF具有平滑肌和成纤维细胞双重特性,其增殖能力及细胞活性均强于NF。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 肿瘤相关成纤维细胞 原代细胞培养 肿瘤微环境
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宫颈癌组织IEX-1表达及其与HPV感染相关性研究 被引量：4
4
作者 张庆庆 韩丽萍 +2 位作者 余海洋 刘丽雅 李元 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期93-97,共5页
目的即刻早期反应基因(immediate early response gene X-1,IEX-1)是一种凋亡易感基因,在多种人类恶性肿瘤中表达失调,但在宫颈癌组织中的表达相关研究较少,检测宫颈癌组织IEX-1的表达,了解其在宫颈癌发生发展中的作用,分析其与人乳头... 目的即刻早期反应基因(immediate early response gene X-1,IEX-1)是一种凋亡易感基因,在多种人类恶性肿瘤中表达失调,但在宫颈癌组织中的表达相关研究较少,检测宫颈癌组织IEX-1的表达,了解其在宫颈癌发生发展中的作用,分析其与人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染的关系。方法收集2011-01-01-2015-10-31郑州大学第一附属医院病理科存档蜡块标本132份,采用免疫组化法检测IEX-1在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及良性宫颈病变组织中的表达情况,分析IEX-1的表达与宫颈癌临床病理关系。采用RT-qPCR法及蛋白质印迹法检测Siha(HPV16+)、HeLa(HPV18+)和C-33a(HPV-)3种宫颈癌细胞株中IEX-1mRNA及蛋白的表达,siRNA法靶向沉默E6后Siha细胞E6、IEX-1的mRNA及蛋白表达,分析与HPV感染的关系。结果 IEX-1在宫颈良性病变、CIN组织和宫颈癌组织中的表达分别为72.4%、58.7%和21.1%,差异有统计学意义,χ~2=21.345,P=0.001。宫颈癌组织IEX-1的表达与患者年龄、病理类型、HPV感染型别及FIGO分期无关,均P>0.05。IEX-1的表达与宫颈癌分化程度、淋巴结转移情况及宫旁浸润密切相关,均P<0.05。C-33a细胞中IEX-1mRNA表达量为21.652±9.020,明显高于Siha细胞的1(t=7.34,P<0.001)和HeLa细胞的1.742±0.854(t=6.21,P<0.001);IEX-1蛋白表达量为18.017±1.351,明显高于Siha细胞的1.519±0.391(t=8.16,P<0.001)和HeLa细胞的1.957±0.363(t=7.19,P<0.001)。干扰组E6mRNA水平为0.218±0.106,低于阴性对照组的1.031±0.072(t=9.21,P<0.001)和空白对照组(t=8.46,P<0.001);干扰组E6蛋白表达量为0.184±0.274,低于阴性对照组的0.692±0.133(t=8.71,P<0.001)和空白对照组的0.783±0.097(t=8.06,P<0.001)。干扰组IEX-1mRNA水平为20.083±0.672,低于阴性对照组的1.193±0.408(t=9.04,P<0.001)和空白对照组,t=7.56,P<0.001;干扰组IEX-1蛋白表达量为0.672±0.135,低于阴性对照组的0.137±0.071(t=7.92,P<0.001)和空白对照组的0.081± 展开更多
关键词 宫颈癌 即刻早期反应基因-1 人乳头瘤病毒 宫颈上皮内瘤变
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中期妊娠合并卵巢良性肿瘤的腹腔镜手术治疗 被引量：15
5
作者 韩丽萍 陈岩岩 +2 位作者 张会敏 余海洋 Hada Abha 《中国妇产科临床杂志》 CSCD 北大核心 2016年第1期28-30,共3页
目的探讨腹腔镜手术治疗中期妊娠合并卵巢良性肿瘤的安全性与可行性。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院行手术治疗的27例中期妊娠（13~28周）合并卵巢良性肿瘤患者的临床资料（腹腔镜手术13例,开腹手术14例）。结果腹腔镜手术组出血... 目的探讨腹腔镜手术治疗中期妊娠合并卵巢良性肿瘤的安全性与可行性。方法回顾性分析郑州大学第一附属医院行手术治疗的27例中期妊娠（13~28周）合并卵巢良性肿瘤患者的临床资料（腹腔镜手术13例,开腹手术14例）。结果腹腔镜手术组出血量少于开腹手术组[（16±6）ml vs（39±25）ml,P=0.004],切口疼痛评分、术后肛门排气时间、住院时间及术后盆腔粘连发生率均小于开腹手术组（P〈0.05）,两组患者新生儿体重及Apgar评分未见明显差异（P〉0.05）。结论腹腔镜手术治疗中期妊娠合并卵巢良性肿瘤安全可行。 展开更多
关键词 妊娠 卵巢良性肿瘤 腹腔镜 开腹
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二甲双胍对改善子宫内膜癌孕激素耐药的研究 被引量：6
6
作者 牛艺洁 史惠蓉 谢娅 《中国妇幼保健》 CAS 2016年第3期605-607,共3页
目的通过研究二甲双胍对子宫内膜癌(EC)孕激素耐药细胞增殖的影响以探讨二甲双胍能否改善EC细胞中孕激素的耐药。方法在EC细胞系Ishikawa细胞的基础上,以醋酸甲羟孕酮(MPA)为诱导剂,采用逐步递增的方法持续给药,体外培养诱导建立EC孕激... 目的通过研究二甲双胍对子宫内膜癌(EC)孕激素耐药细胞增殖的影响以探讨二甲双胍能否改善EC细胞中孕激素的耐药。方法在EC细胞系Ishikawa细胞的基础上,以醋酸甲羟孕酮(MPA)为诱导剂,采用逐步递增的方法持续给药,体外培养诱导建立EC孕激素耐药细胞;用CCK-8的方法研究细胞系Ishikawa细胞和MPA-R-Ishikawa细胞的生长增殖情况,以及MPA和二甲双胍对2种细胞增殖的影响。结果 1成功建立了EC孕激素耐药细胞(MPA-R-Ishikawa),细胞系Ishikawa细胞和MPA-R-Ishikawa细胞的倍增时间差异无统计学意义(t=0.249,P=0.808);2低浓度的MPA对耐药细胞MPA-RIshikawa的增殖有轻微的刺激作用,高浓度的MPA对耐药细胞MPA-R-Ishikawa的抑制作用不明显,而MPA对细胞系Ishikawa细胞具有显著的抑制作用;3二甲双胍对细胞系Ishikawa细胞和MPA-R-Ishikawa细胞的增殖均有抑制作用,具有浓度依赖性,但对后者的作用更显著。结论二甲双胍能够抑制EC孕激素耐药细胞的增殖,可能会改善EC孕激素的耐药。 展开更多
关键词 子宫内膜癌 二甲双胍 孕激素
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微小RNA-23a-3p负调控Runx2基因抑制骨髓间充质干细胞成骨分化诱导绝经后骨质疏松的研究 被引量：4
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作者 纪元元 李劲峰 +8 位作者 寇红伟 陈松峰 苏会芳 冷子宽 尚春风 朱迪 姬彦辉 王义生 刘宏建 《中华实验外科杂志》 CAS 北大核心 2022年第1期112-115,共4页
目的观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例,检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs,将miR-2... 目的观察微小RNA(miR)-23a-3p通过调控Runx2基因对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法绝经后骨质疏松症(PMOP)患者及正常的女性志愿者各30例,检测两组血清中miR-23a-3p表达水平。建立雌性小鼠骨质疏松模型后提取BMSCs,将miR-23a-3p inhibitor和miR-阴性对照(NC)分别转染入BMSCs,检测miR-23a-3p表达水平,同时检测成骨基因Runx2、骨钙素(OCN)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)信使RNA(mRNA),酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞内碱性磷酸酶(ALP)含量。培养HEK293细胞,将miR-23a-3p模拟物和miR-NC分别于野生型Runx23’端非编码区(3’UTR)(WT)或突变型Runx23’UTR(Mut)重组质粒共转染,使用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。最后将miR-23a-3p inhibitor和miR-23a-3p inhibitor+siRunx2分别转染入BMSCs,检测Runx2蛋白、OCN、CollagenⅠmRNA含量及ALP含量,两样本两组间比较采用t检验。结果PMOP患者血清中miR-23a-3p表达量高于对照组(0.872±0.307比0.382±0.183,t=7.514,P<0.05)。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中miR-23a-3p表达量低于转染miR-NC组(0.480±0.045比1.361±0.113,t=-16.213,P<0.05),差异有统计学意义。转染miR-23a-3p inhibitor的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、CollagenⅠmRNA表达量及ALP含量高于转染miR-NC组[0.608±0.065比0.234±0.041,0.523±0.053比0.229±0.046,0.652±0.060比0.381±0.030,(5.569±0.377)U/L比(2.513±0.308)U/L,t=9.409、9.036、10.846、14.036,P<0.05],差异有统计学意义。生物信息学分析及双荧光素酶报告基因检测进一步证实了Runx2是miR-23a-3p的直接靶点。转染miR-23a-3p inhibitor+siRunx2的BMSCs中Runx2蛋白、OCN、CollagenⅠmRNA表达量及ALP含量低于转染miR-23a-3p inhibitor组[0.373±0.051比0.600±0.083,0.321±0.015比0.645±0.030,0.417±0.027比0.617±0.065,(3.733±0.056)U/L比(6.751±0.091)U/L,t=5.188、21.491、6.414、63.040,P<0.05],差异有统计学意义。结论miR-23a-3p通过负调控Runx2基因的表达抑制BMSCs成骨分化。 展开更多
关键词 微小RNA 骨髓间充质干细胞 绝经后骨质疏松症 成骨分化
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