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人羊膜来源间质干细胞的分离、培养及鉴定 被引量：23
1
作者 李国喜 杨波 +6 位作者 关方霞 杜英 宋来君 张清勇 胡祥 胡平生 徐虹 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期244-247,共4页
目的：探讨来源于人羊膜间质干细胞（ amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs）的分离、培养及鉴定。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，加入胰酶37℃消化30min，共2次，然后加入终浓度1．0g／L的胶原酶... 目的：探讨来源于人羊膜间质干细胞（ amniotic-derived mesenchymal stem cells, AD-MSCs）的分离、培养及鉴定。方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，加入胰酶37℃消化30min，共2次，然后加入终浓度1．0g／L的胶原酶和0．1g／L的DNA酶，37℃消化60min，收集细胞，用含体积分数为10％胎牛血清（FBS）的DMEM／F12培养基进行培养和纯化。倒置显微镜观察细胞形态，取4～6代的细胞用流式细胞仪分析细胞表面标志，取扩增第3代后的AD-MSCs加人全反式维甲酸（RTRA）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）向神经元样细胞诱导分化。结果：来源于羊膜的细胞种植于DMEM／F12培养基中后，可在体外大量扩增并纯化；流式细胞检测显示：CD29、CD44、HLA-ABC阳性表达，CD34、CD45、HLA-DR阴性表达。免疫细胞化学显示AD-MSCs经RTRA和bFGF诱导后表达神经元特异性烯醇化酶，不表达胶质纤维性蛋白。结论：羊膜中存在问质干细胞，其可以在体外培养、扩增、纯化，并可在体外向神经元样细胞分化。 展开更多
关键词 羊膜 间质干细胞 培养 神经元样细胞
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人脐血间质干细胞在脑创伤大鼠脑内移植后的迁移 被引量：15
2
作者 宋来君 张鹏 +6 位作者 杨波 杜英 关方霞 孙剑瑞 万鼎铭 胡祥 胡平生 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期230-233,共4页
目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)脑内移植后的分布和移行,为细胞移植治疗脑创伤奠定基础。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到人UCB-MSCs,并用Hoechst33258标记后备用。自由落体撞击法制作的大鼠脑创伤模型,将已标记的人UCB-MSC... 目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)脑内移植后的分布和移行,为细胞移植治疗脑创伤奠定基础。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到人UCB-MSCs,并用Hoechst33258标记后备用。自由落体撞击法制作的大鼠脑创伤模型,将已标记的人UCB-MSCs移植到大鼠的脑损伤区。一段时间后处死大鼠,取脑组织切片,直接在荧光显微镜下观察移植细胞的存活和迁移。结果细胞移植到大鼠脑内能够长时间存活,移植细胞与宿主细胞有很好的相容性,移植后3周细胞发出蓝白色光,沿移植道呈条带状分布,细胞在条带中央较为密集,在条带周围细胞分布逐渐稀疏。移植后6周,损伤组织中可见荧光标记的细胞,细胞分布较3周时稀疏。结论人UCB-MSCs脑内移植后,能够成活并向脑损伤区迁移,与宿主脑组织整合在一起。 展开更多
关键词 脐血 间质干细胞 培养 移植 迁移 大鼠
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脐血间质干细胞移植对肌萎缩侧索硬化患者血浆和脑脊液中谷氨酸浓度的影响 被引量：7
3
作者 曹勇 杨波 +7 位作者 宋来君 杜英 关方霞 张智峰 孙剑瑞 胡祥 胡平生 李建斌 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期236-238,共3页
目的观察脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对肌萎缩侧索硬化(ALS)患者血浆及脑脊液谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法治疗组8例ALS患者采用静脉滴注结合腰椎脊髓蛛网膜下腔注射UCB-MSCs悬液,行UCB-MSCs移植治疗。应用柱前衍生反相高效液相色谱... 目的观察脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对肌萎缩侧索硬化(ALS)患者血浆及脑脊液谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法治疗组8例ALS患者采用静脉滴注结合腰椎脊髓蛛网膜下腔注射UCB-MSCs悬液,行UCB-MSCs移植治疗。应用柱前衍生反相高效液相色谱法分别测定对照组(非神经系统疾病组)和治疗组不同治疗时间血浆和脑脊液中Glu的浓度。结果与治疗前相比,治疗组治疗后3周、3个月血浆、脑脊液Glu浓度降低(P<0.05),但均高于对照组(P<0.05);治疗后3周与3个月相比,治疗组血浆、脑脊液Glu浓度差异无统计学意义(P>0.05)。结论脐血间质干细胞移植治疗能够降低ALS患者血浆、脑脊液中Glu浓度。 展开更多
关键词 脐血间质干细胞 肌萎缩侧索硬化 谷氨酸
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神经生长因子对神经干细胞增殖的影响 被引量：5
4
作者 孙剑瑞 杨波 +6 位作者 杜英 宋来君 关方霞 胡祥 胡平生 徐虹 王云龙 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期241-244,共4页
目的观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12+B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实... 目的观察不同剂量神经生长因子(NGF)对体外培养的神经干细胞(NSCs)增殖的影响。方法取人胚胎组织脑室区/脑室下区(VZ/SVZ)组织分离神经干细胞,培养于DMEM/F12+B27细胞基础培养液中,加入碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为阳性对照组;实验组培养液中分别加入NGF至终浓度的50μg/L、20μg/L、10μg/L、5μg/L、2μg/L;培养液无添加成分作为阴性对照组。用MTT比色分析法测定细胞增殖能力,倒置显微镜下观察细胞增殖情况。结果3dMTT比色显示,50μg/LNGF组细胞增殖较其他各组低(P<0.05);培养10d时细胞活力测定表明各组细胞均有一定程度的增殖,10μg/LNGF组与阳性对照组比较差异无统计学意义,与阴性对照组比较差异有统计学意义。结论在一定浓度范围内NGF能明显促进神经干细胞的增殖。 展开更多
关键词 神经生长因子 神经干细胞 增殖
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人脐血间质干细胞移植对脑创伤大鼠行为学和学习、记忆评分的影响 被引量：5
5
作者 张鹏 宋来君 +7 位作者 杨波 杜英 关方霞 张智峰 万鼎铭 胡祥 胡平生 李建斌 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2006年第2期233-236,共4页
目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对脑创伤大鼠的行为学和学习、记忆评分的影响。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到的UCB-MSCs,移植于自由落体撞击法制作的脑创伤模型大鼠受损脑组织内。分别于移植后2d及7d进行大鼠行为学评... 目的研究人脐血间质干细胞(UCB-MSCs)移植对脑创伤大鼠的行为学和学习、记忆评分的影响。方法健康孕妇顺产脐血经分离、培养得到的UCB-MSCs,移植于自由落体撞击法制作的脑创伤模型大鼠受损脑组织内。分别于移植后2d及7d进行大鼠行为学评分,2周和4周行Y迷宫试验。结果移植后2d、7d2组组内行为学评分比较差异有统计学意义(P<0.05);移植后2周学习评分和4周记忆评分2组间差异亦均有统计学意义(P<0.05)。结论UCB-MSCs移植治疗脑创伤大鼠可提高其学习和记忆能力。 展开更多
关键词 脐血 间质干细胞 移植 脑创伤 行为学 大鼠
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自体骨髓间充质干细胞培养后经肝动脉介入治疗失代偿期肝硬化1例 被引量：3
6
作者 焦红亮 杨波 +7 位作者 关方霞 李建斌 詹三华 杜英 胡祥 迟连凯 梁硕 史辛艺 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第45期8535-8538,共4页
背景:骨髓间充质干细胞在特定环境下可分化成肝干细胞及肝细胞,从而参与肝结构和功能的修复和重构。目的:进一步验证自体骨髓间充质干细胞培养后经肝动脉介入治疗肝硬化的安全性、可行性及疗效。方法:1例肝硬化患者进行自体骨髓单个核... 背景:骨髓间充质干细胞在特定环境下可分化成肝干细胞及肝细胞,从而参与肝结构和功能的修复和重构。目的:进一步验证自体骨髓间充质干细胞培养后经肝动脉介入治疗肝硬化的安全性、可行性及疗效。方法:1例肝硬化患者进行自体骨髓单个核细胞移植,骨穿采集自体骨髓体外分离纯化骨髓单个核细胞。骨髓单核细胞培养4d后经肝动脉插管将其移植入肝脏。移植后4周观察血清白蛋白、胆碱酯酶、凝血酶原活动度、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、凝血酶原时间、纤维蛋白原变化情况,观察患者并发症及预后。结果与结论:培养后骨髓间充质干细胞数量明显增多,患者移植前后各项指标变化情况:移植前血清白蛋白、胆碱酯酶、凝血酶原活动度、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、凝血酶原时间、纤维蛋白原分别为29.43g/L,2378.5U/L,47.4%,112.78U/L,79.36U/L,17.91s,2.01g/L。移植后4周分别为33.30g/L,2866.5U/L,55.8%,79.01U/L,56.37U/L,16.26s,2.35g/L。移植后无严重不良事件发生。结果表明,自体骨髓间充质干细胞移培养后植治疗可使失代偿期肝硬化患者肝功能明显改善,治疗安全有效且不良反应小,可作为中晚期肝硬化患者的临床治疗方案。 展开更多
关键词 骨髓 间充质干细胞 肝硬化 培养
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亚甲蓝/光化学法灭活病毒对血浆成分的影响 被引量：9
7
作者 焦红亮 关方霞 +4 位作者 杨波 李建斌 单泓 杜英 胡祥 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期100-102,共3页
背景:对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的:观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法:随机选择40份采血后6h内40... 背景:对血液进行病毒灭活是保障安全输血的措施之一,亚甲蓝/光化学法灭活人血浆中病毒的效果已被证实,但其对血浆成分影响的报道很少。目的:观察亚甲蓝光化学法病毒灭活血浆对血液成分结构和功能的影响。方法:随机选择40份采血后6h内400mL全血制备的新鲜血浆称质量留样,然后与亚甲蓝病毒灭活过滤器无菌连接,亚甲蓝的终浓度在0.9～1.3μmol/L。将加入亚甲蓝的血浆置入4℃病毒灭活箱的搁架上,摆动频率60次/min,利用32000～38000Lx光照强度的可见光4℃照射35min,将光照后的血浆通过病毒灭活过滤器滤除亚甲蓝和残余白细胞,混匀后留样10mL,立即置于-80℃冰箱冻存。检测照射前后样品的血浆量、亚甲蓝浓度、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib含量的变化。结果与结论:血浆病毒灭活后血浆容量、FⅧ∶C、FⅤ∶C、VWF、Fib的回收率分别为(96.39±1.73)%、(82.55±9.25)%、(81.03±15.27)%、(93.25±6.17)%、(81.61±14.25)%。亚甲蓝光化学法灭活血浆病毒对血浆中大多数成分的影响不明显,可以满足临床安全输血的需求。 展开更多
关键词 亚甲蓝 输血 凝血因子 病毒灭活 血浆
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腰椎穿刺移植自体骨髓间充质干细胞治疗脑梗死后遗症6例 被引量：5
8
作者 焦红亮 关方霞 +6 位作者 杨波 李建斌 詹三华 杜英 胡祥 赵琳娜 韩小改 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2010年第49期9172-9175,共4页
背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,而且取材方便,扩增迅速,免疫原性低,在移植过程避免了免疫排斥等反应,是治疗脑梗死等神经系统疾病的理想种子细胞。目的:探讨自体骨髓间充质干细胞培养后经腰穿治疗脑梗死后遗症的安全性、可行... 背景:骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,而且取材方便,扩增迅速,免疫原性低,在移植过程避免了免疫排斥等反应,是治疗脑梗死等神经系统疾病的理想种子细胞。目的:探讨自体骨髓间充质干细胞培养后经腰穿治疗脑梗死后遗症的安全性、可行性及疗效。方法:6例脑梗死后遗症患者进行自体骨髓间充质干细胞移植,骨穿采集自体骨髓单个核细胞,体外分离培养骨髓间充质干细胞4d后经腰椎穿刺移植蛛网膜下腔,移植后观察疗效及并发症。结果与结论:培养后骨髓间充质干细胞数量明显增多,患者手术前后肌力和NIHSS评分通过统计分析有显著性差异(P<0.05),总体症状改善较术前有明显改善;移植后无严重不良事件发生。结果提示,自体骨髓间充质干细胞培养后移植治疗可使脑梗死后遗症患者症状明显改善,治疗安全有效且不良反应小。 展开更多
关键词 脑梗死后遗症 骨髓间充质干细胞 培养 移植 腰椎穿刺
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脐血间充质干细胞混合培养及临床实验研究
9
作者 李建斌 单泓 +2 位作者 杨波 关方霞 焦红亮 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期373-378,共6页
目的分析比较脐带血间质干细胞单份与双份混合培养细胞增殖诱导分化为神经样细胞及临床输注效果观察。方法应用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液在多联袋中以密度梯度法无菌获取脐血单个核细胞,并检测CD133+细胞数。将制备的单个核细胞接... 目的分析比较脐带血间质干细胞单份与双份混合培养细胞增殖诱导分化为神经样细胞及临床输注效果观察。方法应用Ficoll-Hypaque淋巴细胞分离液在多联袋中以密度梯度法无菌获取脐血单个核细胞,并检测CD133+细胞数。将制备的单个核细胞接种于含有B27和bFGF的DMEM/F12培养瓶中,置于37℃体积分数为5%CO2饱和湿度的培养箱内培养。当细胞培养3d时,随机取培养的6份脐血间充质干细胞(2/3量)为A组,6份脐血间充质干细胞(2/3量)为B组,将A、B组各剩余的1/3量脐血间充质干细胞混合为C组。3组细胞密度均调整为1.0×104/ml。以活细胞计数法比较3组细胞不同时间的扩增数量,免疫组织化学检测脐血间充质干细胞巢蛋白的表达,流式细胞仪检测分离后及培养10d后CD133+细胞数。将单份培养和混合培养7d的脐带血间充质干细胞分别经静脉输注入脑卒中后遗症患者体内,每次输注2份,每例患者平均输注6份,每份间隔时间平均4d。于治疗前和治疗3个月后评价患者神经功能状态、肢体运动功能及日常生活活动能力。结果活细胞计数检测显示,将2份不同脐血间充质干细胞混合后,细胞贴壁、增殖比单份脐血间充质干细胞快(P<0.05)。3组细胞经bF-GF诱导后均表达巢蛋白,表达率差异无统计学意义(P>0.05),流式细胞仪检测CD133+细胞数,结果显示A、B2组差异无统计学意义(P>0.05),而混合脐血MSCsC组与单份脐血MSCsA、B组差异均有统计学意义(P<0.05)。2组患者治疗前与治疗3个月后相比,神经功能状态、肢体运动功能及日常生活活动能力评分均明显升高(P<0.01),但治疗后2组之间无明显差异(P>0.05),均未发现免疫排斥及不良反应。结论混合培养时脐血间充质干细胞之间有互相促增殖作用,应用bFGF诱导的脐血间充质干细胞可以表达巢蛋白。 展开更多
关键词 脐血 间充质干细胞 诱导分化 混合培养 静脉输注
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