长链非编码RNA分子作用机制研究进展 被引量：6

1

作者 郭东光 陈明艳 +7 位作者 李文明 王丰 郭赞莹 孙国鹏 李鹏 岳锋 朱艳平 王选年 《河南农业科学》 北大核心 2021年第4期1-7,共7页

长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是缺乏开放阅读框架,且长度大于200 nt不编码蛋白质的转录本,其绝对数量大、种类多,在表达模式上具有明显的细胞特异性。lncRNA通过碱基配对与DNA或RNA,或通过RNA高级结构与蛋白质结合,发挥... 长链非编码RNA(Long non-coding RNA,lncRNA)是缺乏开放阅读框架,且长度大于200 nt不编码蛋白质的转录本,其绝对数量大、种类多,在表达模式上具有明显的细胞特异性。lncRNA通过碱基配对与DNA或RNA,或通过RNA高级结构与蛋白质结合,发挥多种生物学功能,共同构成了一个复杂而精细的分子调控网络。结合近年来对lncRNA的研究发现,在阐述lncRNA分子作用机制研究进展的基础上,简要阐述了lncRNA在动物生产性能及动物生长发育方面的相关研究,旨在为进一步研究lncRNA的生物学调节功能提供参考,为lncRNA在畜牧业方面的应用提供科学依据。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 调节机制 RNA编辑 RNA修饰

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西马特罗多克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立 被引量：5

2

作者 司艳芳 李鹏 +3 位作者 郭东光 孙国鹏 岳锋 王选年 《河南农业科学》 北大核心 2020年第6期157-164,共8页

为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CI... 为建立一种特异、敏感、快速、准确的西马特罗(Cimaterol,CIM)残留检测方法,成功合成其完全抗原并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,建立其免疫学检测方法。应用重氮化法偶联西马特罗与载体蛋白BSA、OVA,合成免疫抗原CIM-BSA和检测抗原CIM-OVA,并采用UV、SDS-PAGE、质谱3种方法进行完全抗原的鉴定。用CIM-BSA免疫新西兰大白兔制备抗西马特罗多克隆抗体并建立间接竞争ELISA检测方法。结果表明,成功合成了西马特罗完全抗原,具有合成抗原的分子特征;免疫新西兰大白兔后,成功制备了抗西马特罗多克隆抗体,其效价为1∶64000,对西马特罗的半数抑制质量浓度为4.26μg/L,与特布他林、莱克多巴胺、沙丁胺醇、齐帕特罗等β2型受体激动剂药物无交叉反应。经过条件优化,建立了西马特罗间接竞争性ELISA检测方法,其最低检测限为0.04μg/L,在0.1~12.8μg/L检测范围内,线性关系拟合度为R2=0.9771,拟合曲线方程为y=-0.2469x+0.6623。检测猪尿和饲料样品,回收率分别为96.3%~103.9%和67.0%~105.0%。综上,成功建立了具有良好应用前景的西马特罗间接竞争ELISA免疫学检测方法。 展开更多

关键词 西马特罗 重氮化法 完全抗原 间接竞争ELISA 多克隆抗体 残留检测

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鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白与幽门螺杆菌铁蛋白基因融合PCR扩增及其真核表达载体的构建 被引量：2

3

作者 朱艳平 何勇 +9 位作者 刘佳 邢瑞林 常乐凯 李润芷 岳锋 吴玉苹 李鹏 孙国鹏 张艳芳 王选年 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第10期2860-2866,共7页

为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列... 为获得高活性的鸡传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)VP2蛋白的重组蛋白,本试验对IBDV VP2蛋白基因与能进行自我组装的幽门螺杆菌(Hp)铁蛋白基因进行融合PCR扩增,获得其融合基因。根据成熟VP2蛋白基因cDNA序列和Hp铁蛋白基因的碱基序列,设计合成2对引物,应用融合PCR技术扩增获得融合基因片段VP2-Fe。将目的基因克隆至pMD18-T载体筛选阳性重组克隆质粒,然后将目的基因亚克隆至真核表达载体pPICZaC后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选获得阳性表达质粒。结果显示,通过两轮PCR扩增出长度为1 824 bp的融合基因VP2-Fe,亚克隆至pMD18-T载体,测序结果显示,融合基因无任何碱基的突变,筛选的阳性质粒命名为pMD-VP2-Fe。双酶切回收目的基因大小为1 824 bp,亚克隆至pPICZaC,PCR和双酶切鉴定出现预期大小的片段,将获得的阳性表达质粒命名为pPICZaC-VP2-Fe。本研究为后期利用真核表达载体获得其融合重组蛋白奠定基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒(IBDV) VP 2基因 幽门螺杆菌 铁蛋白 融合PCR

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齐帕特罗人工抗原合成及其多克隆抗体制备 被引量：3

4

作者 郭东光 陈明艳 +14 位作者 冯春花 王丰 卞爽丽 李文明 王凯露 吕薇薇 郑文珺 陈子怡 孙国鹏 李雪华 田金河 李鹏 朱艳平 岳锋 王选年 《动物医学进展》 北大核心 2022年第5期6-12,共7页

为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行... 为制备齐帕特罗(ZIL)完全抗原,获得抗ZIL多克隆抗体(pAb),将ZIL与4-溴丁酸乙酯反应后,采用EDC/NHS方法使ZIL-丁酸盐中间体与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,分别用紫外全波长扫描(UV)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定后,通过免疫新西兰大白兔获得抗ZIL多抗血清,并对抗体效价、半数抑制浓度(IC_(50))和特异性进行鉴定。HPLC-MS检测结果显示,改造后的主产物分子质量为348.21 u,约占整个反应体系产物的92.23%,与ZIL-丁酸盐分子质量完全相符;SDS-PAGE电泳结果显示,BSA/OVA在电泳中的迁移速率明显大于偶联产物;UV结果显示,相比载体蛋白,偶联产物ZIL-BSA/OVA的特征吸收峰均发生了明显变化;ELISA效价检测结果表明,ZIL多抗血清效价在1∶6400以上,通过建立标准曲线测得IC_(50)分别为0.38 ng/mL和1.13 ng/mL,并且与沙丁胺醇(SAL)、特布他林(TBL)、溴布特罗(BRO)、西马特罗(CIM)、克仑特罗(CLB)、盐酸多巴胺(DH)、莱克多巴胺(RAC)、达氟沙星(DAN)、泰乐菌素(TYL)均不存在任何交叉反应。成功制备了ZIL完全抗原ZIL-BSA/OVA,获得了一种高灵敏度和高特异性的抗ZIL pAb,为后续建立ZIL免疫学快速检测方法奠定了基础。 展开更多

关键词 齐帕特罗 新型瘦肉精 半抗原 完全抗原 多克隆抗体

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猪瘟病毒结构蛋白E0抗体间接ELISA检测方法的建立及优化 被引量：3

5

作者 郭东光 陈明艳 +6 位作者 朱艳平 李鹏 岳锋 崔芳微 李文明 王金海 王选年 《河南农业科学》 北大核心 2019年第11期151-156,共6页

为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h... 为建立一种经济、可靠的猪瘟病毒(CSFV)血清抗体检测方法,采用间接ELISA(E0-ELISA)方法,以在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的重组蛋白E0为包被原,优化反应条件。结果显示,优化后的E0-ELISA在包被原1.0μg/mL质量浓度下37℃包被1 h效果最佳,最佳封闭条件为5%脱脂奶粉溶液37℃作用2 h,待检血清以1∶100稀释后37℃作用60 min效果最佳,二抗以1∶5000稀释后37℃孵育45 min效果最佳。当OD 450<0.370时,判断为猪血清CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为1.99%~7.69%和2.16%~9.23%,表明该方法具有良好的稳定性;E0-ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清时结果均为阴性;当CSFV阳性血清稀释至1∶640时结果仍为阳性,表明该检测方法具有良好的敏感性;与IDEXX CSFV抗体检测试剂盒相比,E0-ELISA检测符合率为92.00%,敏感性为97.86%,特异性为78.33%。综上,成功建立一种经济、稳定、特异性好和敏感性高的CSFV血清抗体间接ELISA检测方法。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 结构蛋白E0 抗体检测 间接ELISA

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齐帕特罗检测方法研究进展 被引量：1

6

作者 陈明艳 卞爽丽 +9 位作者 计浩然 李文明 王丰 孙国鹏 朱艳平 岳锋 李雪华 李鹏 郭东光 王选年 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第21期29-34,40,共7页

齐帕特罗(zilpaterol,ZIL)是β2肾上腺素受体(β2-adrenergic receptors,β2AR)激动剂的一种,被动物食用后,可以明显增加动物的胴体瘦肉率,提高生长速率,减少饲料消耗。经美国、加拿大、巴西、哥伦比亚等15个国家批准用于牛的饲料添加剂... 齐帕特罗(zilpaterol,ZIL)是β2肾上腺素受体(β2-adrenergic receptors,β2AR)激动剂的一种,被动物食用后,可以明显增加动物的胴体瘦肉率,提高生长速率,减少饲料消耗。经美国、加拿大、巴西、哥伦比亚等15个国家批准用于牛的饲料添加剂,给全世界食品安全带来严重威胁。目前,食品安全检测技术较低是影响我国食品安全现状的重要原因。因此,建立有效、快速、简便、高灵敏度的食品污染物检测方法是当务之急。文章综述了当前针对ZIL残留检测方法研究进展的同时,结合ZIL生物学效应及其残留特性等,指出目前关于ZIL残留检测存在的问题及在检测方面的未来发展方向,旨在为进一步建立高灵敏度的快速检测方法提供科学依据,同时为进一步丰富我国食品安全检测技术体系,提高我国食品安全检测水平和检测速度提供理论基础。 展开更多

关键词 食品安全 齐帕特罗 瘦肉精 检测方法 残留

原文传递

氨肽酶液态发酵条件的优化 被引量：2

7

作者 孟广超 张艳芳 王选年 《中国调味品》 CAS 北大核心 2021年第1期71-76,共6页

为提高米曲霉产氨肽酶的活性,对影响氨肽酶液态发酵的因素进行单因素实验,利用Plackett-Burman实验设计在单因素实验的基础上选取对氨肽酶活性影响最大的3个因素进行Box-Behnken实验,建立数学模型进行响应面分析得到最大值的预测以及对... 为提高米曲霉产氨肽酶的活性,对影响氨肽酶液态发酵的因素进行单因素实验,利用Plackett-Burman实验设计在单因素实验的基础上选取对氨肽酶活性影响最大的3个因素进行Box-Behnken实验,建立数学模型进行响应面分析得到最大值的预测以及对预测值进行验证。最终结果确定为温度为36℃,pH值6.6,牛肉膏的添加量1.82 g/L时,氨肽酶活性最大预测值为485.88 U/mL,验证酶活性为479.22 U/mL,较未优化前提高了298%,为氨肽酶的工业化提供了理论支持。 展开更多

关键词 氨肽酶活性 响应面分析 液态发酵 工艺优化 米曲霉

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ARTP技术选育米曲霉氨肽酶高产菌株 被引量：2

8

作者 张艳芳 孟广超 王选年 《中国调味品》 CAS 北大核心 2021年第12期31-34,41,共5页

为提高米曲霉产氨肽酶的活性,对米曲霉CICC2066进行常压室温等离子体(ARTP)诱变处理,通过多轮筛选之后获得一株高产氨肽酶的米曲霉菌株M_(5),氨肽酶活性为241.2 U/mL,较出发的CICC2066提高了1.21倍。经过5次传代培养之后,产酶性能稳定,... 为提高米曲霉产氨肽酶的活性,对米曲霉CICC2066进行常压室温等离子体(ARTP)诱变处理,通过多轮筛选之后获得一株高产氨肽酶的米曲霉菌株M_(5),氨肽酶活性为241.2 U/mL,较出发的CICC2066提高了1.21倍。经过5次传代培养之后,产酶性能稳定,表明ARTP技术能够有效地提高米曲霉产氨肽酶的活性。 展开更多

关键词 ARTP 米曲霉 氨肽酶 高产菌株

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PK-15细胞中猪瘟病毒的增殖特点研究

9

作者 郭东光 陈明艳 +7 位作者 崔芳微 李文明 何海汛 司艳芳 刘佳 陈威 高小静 王选年 《动物医学进展》 北大核心 2020年第10期30-35,共6页

为探讨猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15细胞后的病毒增殖特点,以CSFV Shimen株细胞毒和PK-15细胞为研究材料,通过建立病毒感染细胞模型,将已感染靶细胞连续传至3代,采用IDEXX CSFV抗原检测试剂盒、反转录PCR(RT-PCR)和免疫过氧化物酶单层细胞试... 为探讨猪瘟病毒(CSFV)感染PK-15细胞后的病毒增殖特点,以CSFV Shimen株细胞毒和PK-15细胞为研究材料,通过建立病毒感染细胞模型,将已感染靶细胞连续传至3代,采用IDEXX CSFV抗原检测试剂盒、反转录PCR(RT-PCR)和免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)检测CSFV复制水平和感染情况。结果表明,成功建立细胞感染模型且无细胞病变产生;CSFV抗原检测试剂盒和RT-PCR检测结果显示,随细胞传代次数的增加,CSFV复制水平明显提高;同代次细胞随培养时间的延长,CSFV复制水平也逐渐提高,且靶细胞的培养方式对CSFV的增殖效果有明显影响;IPMA检测结果表明,相同条件下,靶细胞对CSFV敏感性存在明显不同,随培养时间的延长,阳性细胞数量逐渐增加并且感染程度逐渐加强。以上结果表明,病毒感染时间、阳性细胞数量、培养方式及细胞敏感性是影响CSFV体外增殖效果的重要因素,研究结果为进一步提高CSFV体外增殖滴度奠定了基础。 展开更多

关键词 猪瘟病毒 PK-15细胞 病毒增殖 病毒感染

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长链非编码RNA对免疫功能的调控作用研究进展 被引量：1

10

作者 郭东光 陈明艳 +9 位作者 王丰 卞爽丽 崔芳微 李文明 郭赞莹 孙国鹏 李鹏 朱艳平 岳锋 王选年 《动物医学进展》 北大核心 2021年第7期90-95,共6页

免疫系统中基因的精确表达和调控是生物体产生对病原体强大免疫能力及限制自身免疫的重要因素。越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)与免疫功能密切相关,能够通过调控免疫细胞分化发育以及免疫细胞效应功能参与免疫反应的调节。... 免疫系统中基因的精确表达和调控是生物体产生对病原体强大免疫能力及限制自身免疫的重要因素。越来越多的研究表明,长链非编码RNA(lncRNA)与免疫功能密切相关,能够通过调控免疫细胞分化发育以及免疫细胞效应功能参与免疫反应的调节。论文结合lncRNA调控作用的分子机制,阐述相关lncRNA在免疫应答和免疫调节过程中发挥的生物学效应,以期为从事lncRNA调控免疫应答机制研究提供参考。 展开更多

关键词 长链非编码RNA 免疫系统 免疫调节

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PCV2 Cap蛋白刺激PBMCs中IL-21和IL-17A基因转录水平的变化

11

作者 朱艳平 刘佳 +5 位作者 何勇 岳锋 李文明 郭东光 孟广超 王选年 《湖南农业科学》 2021年第4期7-11,共5页

为了研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白能否模拟PCV2在体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),使猪白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)和IL-17A基因转录水平发生变化,试验根据IL... 为了研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Cap蛋白能否模拟PCV2在体外刺激外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),使猪白细胞介素21(interleukin-21,IL-21)和IL-17A基因转录水平发生变化,试验根据IL-21和IL-17A的基因序列,设计引物,利用实时荧光定量PCR检测IL-21和IL-17A基因的转录水平。为进一步分析IL-21和IL-17A转录调节的机制,研究还通过实时荧光定量PCR检测了PD-L1的转录水平。结果表明:PCV2 Cap蛋白和PCV2在体外均能刺激PBMCs,导致IL-21、IL-17A和PD-L1基因的转录水平升高,其中PCV2 Cap蛋白导致的IL-21基因转录水平升高更多,几乎是PCV2刺激时表达量的2倍,IL-17A基因的转录水平基本和PCV2刺激时保持一致;PCV2 Cap蛋白能模拟PCV2刺激PD-L1基因转录水平发生变化,但是与PCV2感染时转录水平变化趋势并不完全一致,PCV2刺激时PD-L1的转录水平更高,预示着PD-L1基因与IL-21和IL-17A基因的转录可能存在一定的调节关系。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 CAP蛋白 外周血单核细胞 IL-21 IL-17A PD-L1 转录水平

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