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人白介素-12植物表达载体的构建 被引量:14
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作者 邵敏 周鹤峰 葛正龙 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第10期868-870,共3页
目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过... 目的构建人白介素-12(hIL-12)基因的植物表达载体.方法采用PCR技术从质粒pCA13-hIL-12中扩增hIL-12基因,SmaI,SacI分别酶切hIL-12基因和植物表达载体pBI121,回收,T4DNA连接酶连接得到重组质粒pBI121-hIL-12,双酶切和DNA测序鉴定后,通过三亲杂交法将表达载体pBI121-hIL-12分别导入根癌农杆菌EHA105和GV3101,用PCR法进行鉴定.结果双酶切及DNA序列测定证实hIL-12已插入到表达载体pBI121中,PCR扩增表明构建的重组表达载体pBI121-hIL-12成功转入根癌农杆菌EHA105和GV3101中.结论成功构建了植物表达载体pBI121-hIL-12,为进一步利用转基因植物生产hIL-12奠定了实验基础. 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 植物表达载体 载体构建 根瘤菌属
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碱裂解法提取质粒DNA的研究 被引量:8
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作者 周鹤峰 邵敏 葛正龙 《遵义医学院学报》 2005年第3期225-227,共3页
目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究。方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取。结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多。结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaO... 目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究。方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取。结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多。结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素。 展开更多
关键词 质粒DNA 提取 碱裂解法
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农杆菌介导的hIL-12基因转化马铃薯的研究 被引量:6
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作者 邵敏 周鹤峰 葛正龙 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第3期46-49,共4页
构建CaMv35S启动子驱动人白细胞介素12基因(hIL-12)的植物表达载体pBI121-hIL-12,通过三亲杂交法将重组载体导入根癌农杆菌菌株EHA105,农杆菌介导法转化马铃薯茎段,经卡那霉素抗性筛选,获得28株抗性植株。通过PCR检测,22株为阳性,从PCR... 构建CaMv35S启动子驱动人白细胞介素12基因(hIL-12)的植物表达载体pBI121-hIL-12,通过三亲杂交法将重组载体导入根癌农杆菌菌株EHA105,农杆菌介导法转化马铃薯茎段,经卡那霉素抗性筛选,获得28株抗性植株。通过PCR检测,22株为阳性,从PCR阳性植株中随机选取5株,ELISA法检测茎和叶中hIL-12的表达量,其中2株与对照组相比有显著性差异(p<0.001),hIL-12的表达量分别为(3 714.0±48.8)pg/g和(3 465.0±185.0)pg/g,初步表明外源基因hIL-12已经整合进马铃薯基因组中并得到了表达,为进一步研究重组hIL-12的分离纯化和生物学活性奠定了试验基础。 展开更多
关键词 马铃薯 人白细胞介素12 遗传转化 根癌农杆菌
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刚地弓形虫在我国男性人群的流行及其与男性生殖障碍关系的Meta分析 被引量:5
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作者 杨瑞 李佩珍 +5 位作者 岳续朋 夏嫱 杜联峰 卢彦欣 廖业 郭锦锦 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期810-818,共9页
目的 评价弓形虫在我国男性人群的流行及其对男性生殖的影响,为研究弓形虫致男性生殖损伤提供重要依据及参考数据。方法 计算机检索PubMed、Science Direct、Google Scholar、Ovid、CNKI、维普、万方、CMB数据库,并辅以参考文献追溯和... 目的 评价弓形虫在我国男性人群的流行及其对男性生殖的影响,为研究弓形虫致男性生殖损伤提供重要依据及参考数据。方法 计算机检索PubMed、Science Direct、Google Scholar、Ovid、CNKI、维普、万方、CMB数据库,并辅以参考文献追溯和手工检索方法,检索1990年1月至2015年12月发表的有关国内男性弓形虫流行及弓形虫致男性不育的文献及学位论文。按照纳入、剔除标准与质量评价筛选文献、提取资料后,采用Stata13.0软件进行Meta分析。结果 获得关于弓形虫在男性流行的文献33篇,共调查36 442人。Meta分析结果显示男性弓形虫总感染率为6.96%[95%CI(5.81~8.18)],亚组分析显示地区间总体差异有统计学意义(Qint=62.19,P=0.002),其中东北(5.00%)、华北(5.35%)感染率最低(P〈0.05),西南地区最高(11.18%,P〈0.05),华南(7.77%)、华东(7.09%)、华中(6.12%)、西北(6.94%)差异无统计学意义(P=0.713)。获得弓形虫与男生不育关系文献16篇,首先对正常及不育男性人群弓形虫感染情况的对照研究数据进行meta分析,OR为2.9[95%CI(2.25,3.75)];其次对其中涉及AsAb对照研究数据的7篇文献进行meta分析,OR为5.62[95%CI(3.49,9.04)];最后,将以上7项研究的AsAb数据及其弓形虫感染数据合并为两个亚组进行分析,两组的OR(95%CI)差异并无统计学意义(Qint=3.37,P=0.066)。结论 我国男性弓形虫感染率在各地区差异较大,弓形虫感染及其诱生的AsAb与男性不育关系密切,需引起社会重视和进一步防治措施的研究。 展开更多
关键词 弓形虫 男性不育 AsAb 感染率 META分析
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从转基因马铃薯中纯化的人白细胞介素-12的生物学活性分析 被引量:3
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作者 黄进 陈佳瑜 +1 位作者 罗果 葛正龙 《遵义医学院学报》 2008年第6期571-572,共2页
目的研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。方法ELISA法测定纯化的hIL-12诱使外周血单个核细胞产生IFN-γ的量。结果纯化的hIL-12在体外能刺激PBMC产生IFN-γ,而野生对照组无作用。结论本实验室从转hI... 目的研究从转人白细胞介素-12(hIL-12)基因马铃薯中纯化的hIL-12的生物学活性。方法ELISA法测定纯化的hIL-12诱使外周血单个核细胞产生IFN-γ的量。结果纯化的hIL-12在体外能刺激PBMC产生IFN-γ,而野生对照组无作用。结论本实验室从转hIL-12基因马铃薯中纯化的hIL-12具有生物学活性。 展开更多
关键词 人白细胞介素-12 纯化 生物学海性 转基因马铃薯
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野生天麻DNA导入马铃薯实现遗传转化的研究 被引量:2
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作者 周鹤峰 邵敏 葛正龙 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期353-355,i0002,共4页
采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,对筛选得到的转化植株进行蛋白及药用成份的分析。结果显示:(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真... 采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,对筛选得到的转化植株进行蛋白及药用成份的分析。结果显示:(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220nm有明显吸收峰。(2)5株经PCR扩增出野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)基因。(3)转基因马铃薯与正常马铃薯的蛋白表达有明显差异,并且在转基因马铃薯中有一条与野生天麻抗真菌蛋白(GAFP)相同的条带。而正常马铃薯中无此条带。(4)通过薄层层析法检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成份天麻素。说明采用浸苗法进行外源总DNA导入是可行的。 展开更多
关键词 野生天麻 浸苗法 天麻素 转基因
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人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
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作者 周鹤峰 邵敏 +3 位作者 孙伟 刘银花 李官成 葛正龙 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期20-24,共5页
利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导... 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 人白细胞介素12 毕赤酵母 分泌表达 活性分析
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利用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯的初步研究 被引量:1
8
作者 周鹤峰 邵敏 葛正龙 《贵州农业科学》 CAS 2005年第4期18-19,共2页
采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分。结果表明:(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2... 采用浸苗法将野生天麻总DNA导入马铃薯试管苗,研究野生天麻总DNA对马铃薯的转化,分析马铃薯转化植株中野生天麻的药用成分。结果表明:(1)在200株转化的马铃薯中有21株的紫外扫描图谱与正常对照组有显著差异,且在220 nm有明显吸收峰。(2)通过薄层层析法(TLC)检测出3株转基因马铃薯表达野生天麻的有效药用成分天麻素。 展开更多
关键词 野生天麻 浸苗法 天麻素 马铃薯 薄层层析法
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医用基因工程教学实践与体会 被引量:1
9
作者 周鹤峰 李官成 苏良辰 《基础医学教育》 2012年第6期425-427,共3页
医用基因工程作为生物工程专业必修课程,其理论内容复杂且实践性强,从教材配置与内容规划、教学手段和教学方法、考核方式等方面阐述了教学实践过程的体会,以期不断提高教学质量,培养具有综合素质的实用型和创新型人才。
关键词 医用基因工程 教学方法 教学实践
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阳离子脂质体介导的hIL-12基因在COS-7细胞中的表达
10
作者 周鹤峰 邵敏 葛正龙 《齐齐哈尔医学院学报》 2005年第7期750-751,共2页
目的观察hIL-12基因在COS-7细胞中的表达。方法阳离子脂质体LipofectamineTM2000将质粒pCA13-hIL-12转入COS-7细胞,PCR法检测基因转染,ELISA法检测hIL-12的表达。结果hIL-12基因成功导入COS-7细胞,并且在COS-7细胞中获得表达。结论hIL-1... 目的观察hIL-12基因在COS-7细胞中的表达。方法阳离子脂质体LipofectamineTM2000将质粒pCA13-hIL-12转入COS-7细胞,PCR法检测基因转染,ELISA法检测hIL-12的表达。结果hIL-12基因成功导入COS-7细胞,并且在COS-7细胞中获得表达。结论hIL-12可以在COS-7细胞中获得表达。 展开更多
关键词 阳离子脂质体 hIL-12基因 COS-7细胞 表达 转染细胞 基因转染
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