microRNA-7对人肺癌95D细胞体外侵袭的作用 被引量：14

1

作者 徐林 任涛 +4 位作者 秦安东 周涯 罗军敏 姚新生 李颖 《遵义医学院学报》 2011年第1期12-16,共5页

目的探讨微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)对人肺癌95D细胞体外侵袭的作用。方法采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-timePCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用划痕法检测95D细胞的迁移情况,Invasion实验检测95D... 目的探讨微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)对人肺癌95D细胞体外侵袭的作用。方法采用体外转染法将miR-7瞬时转染95D细胞后,应用Real-timePCR特异探针法检测95D细胞中miR-7的表达情况,应用划痕法检测95D细胞的迁移情况,Invasion实验检测95D细胞侵袭能力的变化;用Western印迹法检测95D细胞中胰岛素样生长因子1受体(Insulin growth factor 1 receptor,IGF1R)表达及下游信号的变化。结果与对照组相比,miR-7转染组95D细胞体外侵袭能力明显削弱(<0.05),而IGF1R表达则显著下调,其信号途径分子Akt的磷酸化水平也明显降低。结论 miR-7可以抑制人肺癌95D细胞的体外侵袭,可能作为后续肺癌生物治疗的新靶点。 展开更多

关键词 肺癌 MIRNAS 体外侵袭 胰岛素样生长因子1受体 生物治疗

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miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T淋巴细胞比例的变化 被引量：7

2

作者 张忆雄 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 朱顺飞 陶弋婧 赵娟娟 周涯 郑静 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1157-1160,共4页

目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B... 目的:研究miRNA-126基因敲减小鼠肠系膜淋巴结T及B淋巴细胞数量的变化。方法:检测miRNA-126基因敲减(KD)小鼠肠系膜淋巴结的体积、重量和淋巴结细胞总数;HE染色检测小鼠肠系膜淋巴结的病理形态学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中T及B淋巴细胞数量的变化。结果:与野生型(WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠肠系膜淋巴结体积、重量和淋巴结细胞总数均显著增加(P<0.05),且病理形态学发生异常;肠系膜淋巴结中B淋巴细胞比例和数量无变化(P>0.05),CD4+T细胞数量无变化,而CD4+T细胞百分数明显减少(P<0.05),CD8+T细胞百分数和绝对数量均显著增加(P<0.05)。结论:miRNA-126敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中T淋巴细胞的数量,提示miRNA-126可能影响肠系膜淋巴结的免疫功能。 展开更多

关键词 miRNA-126基因敲减 肠系膜淋巴结 B细胞 T细胞

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miR-126敲减增强小鼠CD4^+T细胞体内活性并促进其向Th1细胞分化 被引量：7

3

作者 崔盼盼 胡燕 +5 位作者 陶弋婧 陈超 赵娟娟 郭萌萌 周涯 徐林 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期347-351,共5页

目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+... 目的观察miR-126基因敲减(KD)小鼠体内CD4+T细胞活性的变化并探讨其意义。方法利用磁珠活化细胞分选技术(MACS)分选miR-126KD小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,实时定量PCR检测细胞内miR-126成熟体的表达水平;荧光激活细胞分选术(FACS)检测CD4+T细胞表面活化标志CD69、CD62L和CD44分子以及Ki-67的表达变化;膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ/PI)双染色法结合流式细胞术检测CD4+T细胞的凋亡情况;实时定量PCR检测CD4+T细胞功能相关细胞因子白细胞介素4(IL-4)、IL-10、IL-12、转化生长因子β(TGF-β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)的mRNA水平变化。结果与野生型(WT)小鼠组相比,miR-126KD小鼠组CD4+T细胞内miR-126成熟体的表达显著下调;FACS结果显示miR-126KD小鼠CD4+T细胞表达CD62L的比例明显减少,而表达CD69、CD44以及Ki-67细胞的比例显著增加,CD4+T细胞的体内凋亡比例显著减少;CD4+T细胞中IL-4、IL-10的mRNA水平明显降低,而IL-12、TGF-β、TNF-α以及IFN-γ的mRNA水平显著增加。结论 miR-126KD小鼠体内CD4+T细胞的活性显著增强并促进其向Th1细胞分化。 展开更多

关键词 微小RNA-126 基因敲减 CD4+T细胞 活性 细胞因子

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下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响 被引量：6

4

作者 陶弋婧 赵娟娟 +6 位作者 李永菊 郭萌萌 周涯 秦娜琳 郑静 罗军敏 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期6-12,共7页

研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响。利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为p-miR-21-ASO);将重组载体p-miR-21-ASO体外瞬时转染HCT116细胞,real-time... 研究下调miRNA-21表达对人结肠癌HCT116细胞体外生长的影响。利用反义核酸技术设计针对miRNA-21成熟体的ASO序列,构建pcDNA-6.2-miRNA-21-ASO真核表达载体(命名为p-miR-21-ASO);将重组载体p-miR-21-ASO体外瞬时转染HCT116细胞,real-time PCR检测细胞中miRNA-21的表达变化;CCK-8法及克隆形成实验检测HCT116细胞的增殖及克隆形成能力改变;划痕法观察HCT116细胞的体外迁移能力变化;western blot检测细胞中VEGF蛋白的表达变化。结果显示,p-miR-21-ASO载体能下调miRNA-21的表达(P<0.05);CCK-8及克隆形成实验结果显示HCT116细胞的增殖及克隆形成能力明显下降(P<0.05);划痕实验结果发现细胞的体外迁移能力削弱(P<0.05);western blot检测结果表明转染组细胞VEGF表达下调(P<0.05)。结果表明,下调miRNA-21能明显抑制HCT116细胞的体外生长,这可能与VEGF的表达降低有关。 展开更多

关键词 MIRNA-21 结肠癌 真核表达

原文传递

基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立 被引量：5

5

作者 赵娟娟 徐华林 +7 位作者 陶弋婧 郭萌萌 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 《遵义医学院学报》 2015年第6期636-641,共6页

目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引... 目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。 展开更多

关键词 茎-环Real-time PCR法 SYBR GreenⅠ 微小RNA-7 表达

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microRNA-7对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞组成的影响 被引量：5

6

作者 赵娟娟 朱顺飞 +7 位作者 徐华林 胡燕 郭萌萌 陶弋婧 周涯 秦娜琳 郑静 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1163-1168,共6页

目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(... 目的:研究miR-7(MicroRNA-7,miRNA-7)对小鼠肠系膜淋巴结αβT淋巴细胞比例的影响并初步探讨其意义。方法:利用miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠模型,观察其肠系膜淋巴结大小、重量和淋巴结细胞总数,以及HE染色的病理学变化;流式细胞术(FACS)检测淋巴结中αβT淋巴细胞亚群(CD3+T细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞)以及CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化相关分子CD69、CD62L和功能相关因子IFN-γ表达的情况。结果:与野生型(Wild type,WT)小鼠相比,miR-7KD小鼠肠系膜淋巴结大小、重量指数和淋巴结细胞总数均显著增高(P<0.05),且HE染色显示MLNs有病理性改变;肠系膜淋巴结中αβCD3+T细胞比例增加显著,其中以CD4+T细胞比例变化最为明显(P<0.05),而CD19+B淋巴细胞比例明显下调(P<0.05),但各亚群细胞总数均明显增加(P<0.05);最后,CD4+T细胞和CD8+T细胞中的CD62L+细胞的比例均显著下调(P<0.05),而CD69+细胞和IFN-γ+细胞比例均显著上调(P<0.05)。结论:miR-7敲减后可显著影响肠系膜淋巴结中αβT淋巴细胞的组成比例,提示其对肠系膜淋巴结中淋巴细胞的组成和功能具有重要的调控作用。 展开更多

关键词 miR-7基因敲减 肠系膜淋巴结 ΑΒT细胞

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microRNA-7敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响 被引量：5

7

作者 赵娟娟 徐华林 +7 位作者 郭萌萌 陶弋婧 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1257-1261,共5页

目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型... 目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;HE染色观察肺组织病理学变化;计算肺泡灌洗液(BAL)中的细胞总数;Real-time PCR检测肺组织炎症相关因子表达变化;流式细胞术(FACS)进一步检测BAL中固有免疫细胞γδT细胞、F4/80巨噬细胞(Macrophages,Mφ)和适应性免疫细胞CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例和绝对数变化;FACS检测CD4^+T细胞活化相关分子CD62L和CD69的表达水平。结果:相对野生型(Wild type,WT)小鼠,HE染色显示miR-7KD小鼠的肺组织小血管充血和炎性细胞浸润明显减少,病理性损伤明显减轻;Real-time PCR结果显示促炎性细胞因子IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),而抗炎性细胞因子IL-4、TGF-β的表达水平明显增加(P<0.05);同时,BAL中总细胞数显著减少(P<0.05);FACS检测进一步显示miR-7KD小鼠的BAL中F4/80^+Mφ细胞的比例及绝对数均明显下调(P<0.05),而γδT细胞的比例上调(P<0.05),但其细胞绝对数无差异(P>0.05);BAL中CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例及其绝对数均显著降低(P<0.05);最后CD4^+T细胞活化膜分子CD62L的表达水平明显上调(P<0.05),而CD69的表达水平显著下调(P<0.05)。结论:miR-7敲减可减轻ALI模型小鼠的肺部损伤,提示其可能在ALI发生中发挥了重要调控作用。 展开更多

关键词 miR-7基因敲减 急性肺损伤 肺泡灌洗液 免疫细胞

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局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤生长和血清干扰素-γ白细胞介素-12的影响 被引量：5

8

作者 周涯 徐林 任社华 《中华物理医学与康复杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期604-606,共3页

目的研究局部湿热联合微波消融对肿瘤生长和血清干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-12（IL-12）的影响，并探讨其意义。方法48只Balb／c小鼠随机分为荷瘤未处理组、微波消融组、局部湿热组、微波消融＋局部湿热组，每组12只。先建立小鼠... 目的研究局部湿热联合微波消融对肿瘤生长和血清干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-12（IL-12）的影响，并探讨其意义。方法48只Balb／c小鼠随机分为荷瘤未处理组、微波消融组、局部湿热组、微波消融＋局部湿热组，每组12只。先建立小鼠乳腺癌实验动物模型，14d后进行微波消融处理，再过7d后进行局部湿热处理，每周1次，共2次。观察各组肿瘤生长情况、生存情况和肺转移情况，并用酶联免疫吸附法检测血清IFN-γ、IL-12的变化。结果微波消融＋局部湿热组的肿瘤生长大小和肺转移指数明显低于微波消融组和局部湿热组（P〈0．05），生存时间明显延长（P〈0．05），血清IFN-γ和IL—12的浓度也显著增加（P〈0．05）。结论局部湿热联合微波消融可以较单一热疗方法更有效地抑制肿瘤生长，这可能与其免疫反应的明显增强有关。 展开更多

关键词 局部湿热 微波消融 肿瘤转移

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医学物理学教学改革探讨 被引量：6

9

作者 周涯 任社华 黎小惠 《医学教育探索》 2007年第6期502-503,共2页

医学物理学是现代医学理论和技术快速发展的重要基础,其教学改革推动了高等医学教育改革的发展。该研究结合相应的实践活动对其教学目标、模式、手段及内容的改革进行了初步的探讨,以期为高等医学教育改革的顺利进行提供帮助。

关键词 医学物理学 教学改革 教学手段

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pG-miR-7-Sponge转基因小鼠载体的构建及鉴定 被引量：4

10

作者 李永菊 周涯 +5 位作者 陈超 朱顺飞 胡燕 秦娜琳 郑静 徐林 《遵义医学院学报》 2014年第2期156-160,共5页

目的构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础。方法利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶... 目的构建pG-miR-7-Sponge转基因小鼠的真核载体并检测其表达活性,为转基因小鼠的建立提供前期实验基础。方法利用miRNA sponge(海绵体)技术原理,合成miR-7-Sponge序列,酶切连接入真核表达载体eGFP-C2并转化Stbl3感受态细胞,克隆PCR、酶切和测序鉴定重组载体eGFP-C2-miR-7-Sponge(简称pG-miR-7-Sp);将重组载体pG-miR-7-Sp体外瞬时转染人肺癌95D细胞,荧光显微镜下观察细胞的GFP表达情况;Real-Time PCR检测细胞中miRNA-7的表达;MTT法检测细胞的增殖变化。结果经克隆PCR、酶切鉴定及测序分析,成功构建了真核表达载体pGmiR-7-Sp;pG-miR-7-Sp瞬时转染95D细胞48 h后,与对照组细胞相比,miR-7表达水平明显降低(P<0.05);同时细胞的生长明显加快(P<0.05)。结论成功构建pG-miR-7-Sp真核表达载体。 展开更多

关键词 微小RNA-7 海绵体 95D细胞 载体构建 基因表达

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局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠CD4^+ CD25^+调节性T淋巴细胞比例和功能的影响 被引量：2

11

作者 周涯 李永菊 +1 位作者 周洪练 任社华 《基础医学与临床》 CSCD 2015年第9期1188-1193,共6页

目的探讨局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例和功能的影响。方法小鼠随机分为荷瘤组、局部湿热/微波消融处理组和局部湿热联合微波消融处理组共4组,每组12只。先建立小鼠乳腺癌实验动物模型... 目的探讨局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中CD4+CD25+调节性T细胞(Tregs)比例和功能的影响。方法小鼠随机分为荷瘤组、局部湿热/微波消融处理组和局部湿热联合微波消融处理组共4组,每组12只。先建立小鼠乳腺癌实验动物模型,分别进行局部湿热、微波消融或局部湿热联合微波消融处理。用FACS检测脾细胞中Tregs的比例变化;real-time PCR检测Foxp3 mRNA水平;FACS检测CTLA-4和GITR的表达;ELISA法检测TGF-β和IL-10的含量;增殖抑制实验观察CD4+CD25-T细胞体外增殖。结果与单一局部湿热处理组和微波消融处理组相比,Tregs在局部湿热联合微波消融处理组中的比例显著降低(P<0.05)。并且,Tregs细胞的Foxp3、CTLA-4和GITR的表达也明显降低(P<0.05),同时TGF-β和IL-10的分泌及抑制功能也显著削弱(P<0.05)。结论湿热联合微波消融可以较单一治疗方法更有效的抑制肿瘤生长,这与其降低CD4+CD25+调节性T细胞的比例和功能密切相关。 展开更多

关键词 乳腺癌 微波消融 局部湿热 CD4+CD25+调节性T细胞

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MicroRNA-126基因敲减小鼠腹腔巨噬细胞功能的变化及意义 被引量：2

12

作者 郭萌萌 赵娟娟 +6 位作者 陶弋婧 胡燕 秦娜琳 郑静 田丹 周涯 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期322-327,共6页

研究microRNA-126(miR-126)基因敲减小鼠腹腔巨噬细胞的功能变化,初步探讨其意义。采用real-time PCR检测LPS刺激前后野生型(wild type,WT)小鼠腹腔巨噬细胞miR-126表达变化,CCK8法检测其增殖情况;观察miR-126基因敲减(knock down,KD)... 研究microRNA-126(miR-126)基因敲减小鼠腹腔巨噬细胞的功能变化,初步探讨其意义。采用real-time PCR检测LPS刺激前后野生型(wild type,WT)小鼠腹腔巨噬细胞miR-126表达变化,CCK8法检测其增殖情况;观察miR-126基因敲减(knock down,KD)小鼠腹腔巨噬细胞的形态变化,并用real-time PCR检测miR-126表达变化;CCK8法检测LPS刺激下miR-126KD小鼠腹腔巨噬细胞增殖变化;FACS检测巨噬细胞表面MHCⅡ类分子和CD86分子的表达变化;最后,real-time PCR检测巨噬细胞表达炎症因子IL-6、TGF-β和Ⅰ型精氨酸酶(arginase 1,Arg-1)等的变化情况。结果显示,WT小鼠腹腔巨噬细胞在LPS刺激后miR-126表达水平下调,显著低于未刺激组(P<0.05),而增殖能力明显增强(P<0.05);与WT小鼠相比,miR-126KD小鼠腹腔巨噬细胞的miR-126表达量明显下调(P<0.05);形态上,WT小鼠腹腔巨噬细胞有较长伪足,多呈梭形,而miR-126KD小鼠腹腔巨噬细胞多呈圆形,细胞边缘光滑较少见伪足;LPS作用48h后,miR-126KD小鼠腹腔巨噬细胞的增殖能力明显强于WT小鼠(P<0.05);且其膜MHCⅡ类分子和CD86分子表达也较WT小鼠显著上调(P<0.05);LPS刺激下,miR-126KD小鼠腹腔巨噬细胞CCL-1表达显著增加,而IL-6、TGF-β和Arg-1的表达水平显著减少(P<0.05)。这些结果提示,miR-126基因敲减可显著影响小鼠腹腔巨噬细胞的增殖能力和功能相关分子的表达,提示miR-126对小鼠腹腔巨噬细胞的功能具有重要的调控作用。 展开更多

关键词 MIR-126 基因敲减 巨噬细胞 LPS IL-6

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TTF-1启动子调控microRNA-7真核表达载体的构建 被引量：2

13

作者 陈超 赵娟娟 +6 位作者 胡艳 郭萌萌 陶弋婧 周涯 秦娜琳 郑静 徐林 《遵义医学院学报》 2014年第3期263-270,共8页

目的构建甲状腺转录因子(TTF-1)启动子调控miR-7表达的真核表达载体,并观察其表达miR-7对人肺癌细胞体外生长的影响。方法抽提人肺癌95D细胞基因组DNA,PCR分别扩增TTF-1启动子序列(promoter)和miR-7前体序列,纯化产物分别经Kpn I/Mul I... 目的构建甲状腺转录因子(TTF-1)启动子调控miR-7表达的真核表达载体,并观察其表达miR-7对人肺癌细胞体外生长的影响。方法抽提人肺癌95D细胞基因组DNA,PCR分别扩增TTF-1启动子序列(promoter)和miR-7前体序列,纯化产物分别经Kpn I/Mul I双酶切和Mul I/HindⅢ双酶切,克隆入PGL3-basic-载体,构建pGL3-basic-TTF-1-promoter-miR-7真核表达载体(命名为p-T-miR-7);将p-T-miR-7真核载体体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Real-time PCR探针法检测细胞中miR-7的表达水平;CCK-8实验和克隆形成实验检测细胞增殖情况;划痕实验检测转染后细胞的体外迁移情况。结果经酶切和测序鉴定成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体p-T-miR-7;转染后72 h,与对照相比,p-T-miR-7转染组中miR-7的表达水平增加约2.5倍(P<0.05);CCK-8实验和克隆形成实验显示,p-T-miR-7转染组中95D细胞的增殖能力明显下降(P<0.05);划痕实验进一步显示,细胞的体外迁移能力也显著削弱(P<0.05)。结论成功构建TTF-1启动子调控的miR-7真核表达载体,这为后续肺癌基因治疗策略开发提供重要前期实验基础。 展开更多

关键词 肺癌 甲状腺转录因子 微小RNA-7 真核表达

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微RNA-21表达下调可抑制人结肠癌SW620细胞在裸鼠体内的生长 被引量：1

14

作者 丁涛 崔盼盼 +9 位作者 陶弋婧 郭萌萌 赵娟娟 贾力 王海嵘 周涯 陈超 秦娜琳 何志旭 徐林 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期117-125,共9页

目的 :探讨反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)下调微RNA-21(micro RNA-21,mi R-21)表达对高侵袭性人结肠癌SW620细胞在裸鼠体内生长的影响。方法 :首先建立人结肠癌SW620细胞的裸鼠荷瘤模型,并于肿瘤局部分别注射p-mi R-21... 目的 :探讨反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASOs)下调微RNA-21(micro RNA-21,mi R-21)表达对高侵袭性人结肠癌SW620细胞在裸鼠体内生长的影响。方法 :首先建立人结肠癌SW620细胞的裸鼠荷瘤模型,并于肿瘤局部分别注射p-mi R-21-ASOs重组质粒或p-Cont对照质粒,然后观察裸鼠体内肿瘤的生长变化。末次注射5 d后,处死裸鼠,剥取肿瘤组织,测量各组肿瘤组织的大小和质量。采用HE染色法观察肿瘤组织形态学变化;TUNEL法检测肿瘤局部细胞凋亡情况;免疫组织荧光法检测肿瘤组织中增殖核抗原Ki-67蛋白的表达变化;实时荧光定量PCR法检测肿瘤组织中mi R-21成熟体的表达,以及细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)2、CDK3、CDK4和CDK6的表达变化;蛋白质印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-PKB,又称为p-Akt)和磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinase,p-ERK)的表达水平。结果 :与p-Cont对照组相比,p-mi R-21-ASOs质粒转染组的肿瘤生长缓慢(P<0.05),剥离肿瘤的质量明显减少(P<0.01),肿瘤组织中可见大片坏死区域,而且肿瘤细胞中mi R-21成熟体的表达水平明显下调(P<0.01)。mi R-21表达下调后,肿瘤组织中Ki-67的表达量明显减少(P<0.01),而相对凋亡细胞数明显增多(P<0.05);并且,细胞周期相关分子CDK2、CDK3、CDK4和CDK6的表达均明显下调(P值均<0.001),Akt和ERK蛋白的磷酸化水平也均明显下调(P值均<0.05)。结论 :ASOs下调mi R-21表达可显著抑制人高侵袭性结肠癌细胞在裸鼠体内的生长,提示mi R-21可作为结肠癌基因治疗的一个潜在新靶标。 展开更多

关键词 结肠肿瘤 微RNAS 细胞凋亡 异种移植模型抗肿瘤试验 小鼠 近交BALB/c

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局部湿热联合微波消融对小鼠乳腺癌动物模型中T淋巴细胞的比例和功能的影响 被引量：1

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作者 周涯 任社华 +2 位作者 覃明 罗军敏 徐林 《黔南民族医专学报》 2009年第3期161-165,共5页

目的:研究局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中T淋巴细胞的比例和功能的影响,并探讨其意义。方法:建立小鼠乳腺癌实验动物模型;用FACS检测局部湿热联合微波消融处理后荷瘤小鼠脾细胞中T细胞及其CD4亚群和CD8亚群的比例变化;... 目的:研究局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中T淋巴细胞的比例和功能的影响,并探讨其意义。方法:建立小鼠乳腺癌实验动物模型;用FACS检测局部湿热联合微波消融处理后荷瘤小鼠脾细胞中T细胞及其CD4亚群和CD8亚群的比例变化;体外增殖实验观察脾细胞中T淋巴细胞增殖功能;FACS检测T淋巴细胞IFN-γ的表达水平。结果:局部湿热联合微波消融处理组荷瘤小鼠脾细胞中T淋巴细胞的比例明显增高(P<0.05),其中CD4+T细胞比例变化最显著,并且T淋巴细胞的增殖能力和IFN-γ的表达也明显增加(P<0.05)。结论:局部湿热联合微波消融术可以较单一热疗方法更有效的抑制肿瘤生长。 展开更多

关键词 局部湿热 微波消融 T淋巴细胞

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小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体的构建

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作者 徐林 张凤 +3 位作者 秦安东 周涯 姚新生 罗军敏 《遵义医学院学报》 2010年第4期316-318,共3页

目的构建小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。方法从前期构建的原核表达载体PET-32a-CD25胞外段上酶切下CD25胞外段;将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并进行酶切及测序鉴定;用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-CD2... 目的构建小鼠CD25分子胞外段的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达。方法从前期构建的原核表达载体PET-32a-CD25胞外段上酶切下CD25胞外段;将其亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1,并进行酶切及测序鉴定;用Lipofectamine 2000将pcDNA3.1-CD25胞外段转染中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovary,CHO)进行表达,并用ELISA法对表达产物进行测定。结果酶切、测序验证成功构建真核表达载体pcDNA3.1-CD25e,并在CHO细胞中有效表达CD25e蛋白。结论成功构建小鼠CD25胞外段的真核表达载体,可在CHO细胞中表达,并具有良好的免疫反应性,为后续实验提供了前期基础。 展开更多

关键词 CD25胞外段 真核表达 T细胞疫苗

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小鼠乳腺癌实验动物模型中树突状细胞的功能检测及意义 被引量：1

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作者 徐林 张忆雄 +4 位作者 周涯 罗军敏 姚新生 汤贤英 孙万邦 《遵义医学院学报》 2008年第2期116-119,共4页

目的观察在肿瘤生长过程中DCs的功能是否存在变化,并探讨其意义。方法建立小鼠乳腺癌动物模型,用FACS分析荷瘤早、晚期时间点肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例及其MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80、CD86的表达;用ELISA法检测DCs的细胞因子I... 目的观察在肿瘤生长过程中DCs的功能是否存在变化,并探讨其意义。方法建立小鼠乳腺癌动物模型,用FACS分析荷瘤早、晚期时间点肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例及其MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80、CD86的表达;用ELISA法检测DCs的细胞因子IL-4、IL-10、IFN-γ和TNF-α的分泌情况;观察DCs对CD4+T细胞增殖及对CD8+T细胞杀伤功能的影响。结果与荷瘤早期相比,荷瘤晚期肿瘤浸润淋巴细胞中DCs的比例从11.76±2.3%增加到17.45±3.2%(p<0.05);晚期DCs下调表达MHC分子及协同刺激分子CD86,而上调表达IL-4、IL-10;晚期DCs刺激CD4+T细胞增值的能力明显减弱,并且对CD8+T细胞的杀伤能力的刺激作用也显著降低。结论随着荷瘤时间的延长,DCs的成熟度及其对T淋巴细胞的免疫刺激作用逐渐降低,这可能与肿瘤的免疫逃逸密切相关。 展开更多

关键词 免疫逃逸 树突状细胞 肿瘤免疫

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微信公众平台在大学物理教学中的应用

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作者 冯帅 周洪练 黎小慧 《广东化工》 CAS 2018年第14期238-239,共2页

本文根据微信公众平台的功能和特点,将微信公众平台引入到大学物理的教学实践中。对该微信公众平台的内容设计进行简要介绍,并通过调查问卷统计出了学生对该平台的评价,得出给学生学习带来了方便,增加了学习兴趣,并且平台设计也深受他... 本文根据微信公众平台的功能和特点,将微信公众平台引入到大学物理的教学实践中。对该微信公众平台的内容设计进行简要介绍,并通过调查问卷统计出了学生对该平台的评价,得出给学生学习带来了方便,增加了学习兴趣,并且平台设计也深受他们的欢迎。微信公众平台与课程教学相结合是一种有效的教育教学方法。 展开更多

关键词 微信公众平台 大学物理 教学改革

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微小RNA-126基因敲减对CD4^+T细胞体外功能的影响

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作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 李永菊 贾力 王海嵘 周涯 罗军敏 徐林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期158-163,共6页

目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平... 目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4^+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4^+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P<0.001);miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P<0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P<0.05);同时Ki-67^+的比例也明显增加(P<0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P<0.001),IL-4的比例显著下调(P<0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P>0.05);最后,CD4^+T细胞的凋亡比例显著减少(P<0.05)。结论 miR-126基因敲减后CD4^+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础。 展开更多

关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 活化 增殖 凋亡

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局部湿热联合微波消融对小鼠乳腺癌动物模型中树突状细胞的比例和功能的影响

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作者 徐林 周涯 +2 位作者 任社华 罗军敏 覃明 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2009年第24期2947-2951,共5页

目的:研究局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中树突状细胞的比例和功能的影响,并探讨其意义.方法:建立小鼠乳腺癌实验动物模型;用FACS检测局部湿热联合微波消融处理后荷瘤小鼠脾细胞中DC细胞比例变化及其MHC-Ⅱ类分子和协同... 目的:研究局部湿热联合微波消融对乳腺癌荷瘤小鼠脾细胞中树突状细胞的比例和功能的影响,并探讨其意义.方法:建立小鼠乳腺癌实验动物模型;用FACS检测局部湿热联合微波消融处理后荷瘤小鼠脾细胞中DC细胞比例变化及其MHC-Ⅱ类分子和协同刺激分子CD80,CD86的表达水平;MTT法检测DC细胞对T淋巴细胞增殖的刺激作用;FACS检测DC细胞对T细胞的细胞因子IFN-γ,IL-4分泌的影响.结果:局部湿热联合微波消融处理组荷瘤小鼠脾细胞中DC细胞的比例明显增高,DC细胞的MHC-II类分子和协同刺激分子CD86的表达明显上调,并且DCs刺激T淋巴细胞增殖和IFN-γ分泌的能力明显增强.结论:局部湿热联合微波消融术可以较单一热疗方法更有效的增加DC细胞的比例和增强其功能. 展开更多

关键词 局部湿热 微波消融 树突状细胞 细胞因子

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