北五味子的液相色谱指纹图谱的建立 被引量：28

1

作者 付绍平 杨博 +2 位作者 陈彤 鱼红闪 金凤燮 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期64-67,共4页

利用反相高效液相色谱法建立中药材北五味子的指纹图谱,为科学评价及有效控制北五味子质量提供了新方法。实验分析了10个不同产地的北五味子样品,采用国家食品药品监督管理局推荐的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"... 利用反相高效液相色谱法建立中药材北五味子的指纹图谱,为科学评价及有效控制北五味子质量提供了新方法。实验分析了10个不同产地的北五味子样品,采用国家食品药品监督管理局推荐的"中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2004A版)"计算处理,建立了由26个指纹峰和19个共有峰组成的北五味子指纹图谱,确定了5个主要的指纹峰。通过夹角余弦法和相关系数法计算了北五味子10个样本与指纹图谱间的相似度,得到了满意的结果。所建立的指纹图谱可以用来区别不同产地北五味子药材的优劣,为进一步控制北五味子的质量提供依据。 展开更多

关键词 液相色谱 指纹图谱 北五味子 质量控制

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金铁锁毛状根诱导及培养体系的建立 被引量：30

2

作者 李景滨 刘同祥 +1 位作者 王培忠 张宗申 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期547-551,共5页

目的:研究金铁锁毛状根制备方法及液体培养条件,为规模化生产金铁锁提供技术支持。方法:利用发根农杆菌ACCC10060菌株侵染金铁锁幼叶及茎段。结果:将外植体与菌液(A6000.8)在含有20 mg.L-1乙酰丁香酮的B5培养基上共培养48 h,可以有效地... 目的:研究金铁锁毛状根制备方法及液体培养条件,为规模化生产金铁锁提供技术支持。方法:利用发根农杆菌ACCC10060菌株侵染金铁锁幼叶及茎段。结果:将外植体与菌液(A6000.8)在含有20 mg.L-1乙酰丁香酮的B5培养基上共培养48 h,可以有效地诱导金铁锁毛状根;叶片比茎段的诱导率高。转化的毛状根具有激素自养和抗卡那霉素的特性,并且组织中含有冠瘿碱,证明该菌对金铁锁组织成功地进行了转化。在无激素的1/2 MS液体培养基中培养35 d后,金铁锁毛状根生物量增加了14.11倍(鲜重)和8.39倍(干重),其总皂苷为0.857%(干重),愈伤组织和原植物中分别为0.388%,0.217%。结论:金铁锁毛状根离体培养系统的成功建立,对进一步规模化培养金铁锁毛状根具有重要意义。 展开更多

关键词 金铁锁 毛状根 发根农杆菌

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木质素合成酶C3H基因的生物信息学分析 被引量：24

3

作者 薛永常 聂会忠 刘长斌 《生物信息学》 2009年第1期13-17,共5页

应用生物信息学的方法对GenBank中拟南芥、火炬松、胡麻、紫花罗兰等植物香豆酸-3-羟基化酶(c3h)基因以及本实验室克隆的欧美杨107的c3h基因(AM920690)核苷酸序列以及翻译的氨基酸序列的组成成分、导肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋... 应用生物信息学的方法对GenBank中拟南芥、火炬松、胡麻、紫花罗兰等植物香豆酸-3-羟基化酶(c3h)基因以及本实验室克隆的欧美杨107的c3h基因(AM920690)核苷酸序列以及翻译的氨基酸序列的组成成分、导肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构及功能域等进行了初步分析预测。分析表明欧美杨107的C3H氨基酸序列不存在导肽,无跨膜结构域,肽链表现为亲水性;二级结构域与P450高度匹配,其高级结构中含有由含铁血红素和半胱氨酸组成的活性中心,并构建了c3h进化树,对其分子进化进行了探讨。 展开更多

关键词 香豆酸-3-羟基化酶 生物信息学 分子进化

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木质素生物合成中C3H/HCT的研究进展 被引量：20

4

作者 王雪霞 薛永常 赵文超 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期650-653,共4页

木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)... 木质素是由三种不同的木质素单体聚合而成的,其含量和单体组成与植物体的综合利用密切相关。木质素单体的生物合成途径涉及到许多酶的参与,C3H/HCT是发现较晚的两个酶,在从对-香豆酰辅酶A(p-coumaroyl CoA)到咖啡酰辅酶A(caffeoyl CoA)的羟基化过程中起作用,是控制木质素H-单体与G/S-单体相互转化的关键酶。该文主要对C3H/HCT的研究进展及在木质素生物合成中的作用进行了阐述。 展开更多

关键词 C3H HCT 木质素生物合成

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影响金铁锁毛状根生长及皂苷积累的因素 被引量：18

5

作者 田思迪 李云芳 +2 位作者 张宗申 刘同祥 于振艳 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期824-826,共3页

目的优化金铁锁毛状根液体培养基、碳源、激素和培养条件,促进毛状根生长及皂苷的积累。方法将毛状根置于添加了碳源和植物生长调节剂的液体培养基中培养,观察其形态、色泽变化,测定其生物量和皂苷含量。结果金铁锁毛状根在含有30 g.L-... 目的优化金铁锁毛状根液体培养基、碳源、激素和培养条件,促进毛状根生长及皂苷的积累。方法将毛状根置于添加了碳源和植物生长调节剂的液体培养基中培养,观察其形态、色泽变化,测定其生物量和皂苷含量。结果金铁锁毛状根在含有30 g.L-1蔗糖的12MS中生长最快;6-BA、2,4-D均能促进皂苷的合成,但对毛状根的生长有抑制作用;添加少量的NAA、IAA、IBA都能促进毛状根的生长和皂苷产量的提高,当分别添加0.5 mg.L-1NAA、IAA、IBA时,皂苷产量较对照品提高53.42%,25.55%,79.60%。结论通过液体培养基、碳源、激素等因素的改变,可以提高金铁锁毛状根的生长速度和皂苷的含量。 展开更多

关键词 金铁锁 毛状根 液体培养 皂苷

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灵芝深层发酵生产胞外多糖和灵芝酸的动力学分析 被引量：15

6

作者 徐鹏 钱竹 +2 位作者 董亮 王伟 赵长新 《应用与环境生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期562-565,共4页

利用Sigmoid函数构建了灵芝深层发酵生产胞外多糖和灵芝酸的非结构动力学模型，并根据Boltzmann拟合求解出模型参数，模型预测值能够较好地吻合实验所测值．细胞最大比生长速率μmax为4．63×10^-2h^-1，葡萄糖最大比消耗速率qs，ma... 利用Sigmoid函数构建了灵芝深层发酵生产胞外多糖和灵芝酸的非结构动力学模型，并根据Boltzmann拟合求解出模型参数，模型预测值能够较好地吻合实验所测值．细胞最大比生长速率μmax为4．63×10^-2h^-1，葡萄糖最大比消耗速率qs，max为6．70×10^-2h^-1，胞外多糖最大比合成速率qEPS,max为4．65×10^-3h^-1，灵芝酸最大比合成速率qGA,max为9．09×10^-4h^-1．灵芝胞外多糖的合成与细胞的生长呈现部分偶联关系；灵芝酸的合成与细胞的生长呈现偶联关系，偶联系数αGA为0．0204g g^-1．胞外多糖对葡萄糖的最大得率系数（YEPS/S）为0．214gg^-1；灵芝发酵40～80h代谢碳流迅速从菌体自身生长迁移至胞外多糖合成，用于合成胞外多糖的最大碳流为23．6％． 展开更多

关键词 灵芝多糖 灵芝酸 动力学 Sigrnoid模型

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铁皮石斛原球茎悬浮培养及其多糖积累的研究 被引量：14

7

作者 王增利 史昊 张宗申 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第2期129-131,共3页

将利用铁皮石斛种子诱导的原球茎在液体条件下培养,研究植物激素和有机添加物对原球茎增殖以及多糖积累的影响。结果表明,在N6液体培养基中附加1.0mg/L NAA+1.0mg/LKT+5%香蕉汁提取物+5%土豆汁提取物,最有利于铁皮石斛原球茎增殖和多糖... 将利用铁皮石斛种子诱导的原球茎在液体条件下培养,研究植物激素和有机添加物对原球茎增殖以及多糖积累的影响。结果表明,在N6液体培养基中附加1.0mg/L NAA+1.0mg/LKT+5%香蕉汁提取物+5%土豆汁提取物,最有利于铁皮石斛原球茎增殖和多糖积累,培养30d时,原球茎鲜质量达到122.9g/L,多糖含量在25d时达到24.2%。结果提示,利用液体培养规模化生产铁皮石斛原球茎是可行的,是铁皮石斛大田传统栽培方式的重要替代途径。 展开更多

关键词 铁皮石斛 原球茎 液体培养 多糖含量

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高产谷胱甘肽酵母菌株的选育及其代谢通量分析 被引量：11

8

作者 俞志敏 徐凯 +2 位作者 徐鹏 汤佳鑫 赵长新 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期110-115,共6页

利用UV和HNO2及其复合诱变处理S.cerevisiae的原生质,筛选得到ZnCl2和半胱氨酸抗性菌株S.cerevisiae YZM-14(ZnCl2r,Cysr),其谷胱甘肽(GSH)产量(84.72mg/L)、生物量(7.63g/L)及胞内GSH含量(11.10mg/g)分别是出发菌株的2.79倍、1.63倍和1... 利用UV和HNO2及其复合诱变处理S.cerevisiae的原生质,筛选得到ZnCl2和半胱氨酸抗性菌株S.cerevisiae YZM-14(ZnCl2r,Cysr),其谷胱甘肽(GSH)产量(84.72mg/L)、生物量(7.63g/L)及胞内GSH含量(11.10mg/g)分别是出发菌株的2.79倍、1.63倍和1.71倍,且性状稳定。根据细胞比生长速率和GSH得率变化曲线,将GSH生物合成过程分为三个阶段,第二阶段诱变菌株与出发菌株相比PP途径代谢通量增加8.1mmol/(g.h),GSH前体合成途径通量增加,且诱变菌株的有机酸分泌通量减少,提高了细胞的碳源利用效率,增大了GSH的生成。 展开更多

关键词 谷胱甘肽 酿酒酵母 诱变育种 代谢通量分析

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高效液相色谱法测定南、北五味子中木脂素含量 被引量：11

9

作者 杨博 陈彤 +4 位作者 李学龙 徐鹏 付绍平 鱼红闪 金凤燮 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第2期102-106,共5页

建立了用高效液相色谱法测定南、北五味子中5种木脂素成分(五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素)的分析方法。以甲醇和水为流动相,采用梯度洗脱,对21个不同产地的南、北五味子样本进行了色谱分离,并利用标准物... 建立了用高效液相色谱法测定南、北五味子中5种木脂素成分(五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素)的分析方法。以甲醇和水为流动相,采用梯度洗脱,对21个不同产地的南、北五味子样本进行了色谱分离,并利用标准物质、保留时间和紫外光谱对木脂素进行定性。结果表明,样品中各组分的色谱峰基本达到基线分离,该方法重复性好、灵敏度高,为评价南、北五味子中的木脂素活性成分提供了一种可靠的分析方法。 展开更多

关键词 南五味子 北五味子 高效液相色谱 木脂素

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光强对悬浮培养下铁皮石斛原球茎生长的影响 被引量：11

10

作者 杨小兵 王增利 +2 位作者 史昊 张宗申 金朝霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第1期116-119,共4页

以长势均一、色泽深绿的铁皮石斛原球茎为试验材料,分别在1 000lx、2 000lx和3 000lx的光强下进行12h/d的光照培养,每隔7d测定其鲜质量、多糖含量、叶绿素含量及叶绿素a/b,研究光强对悬浮培养下铁皮石斛原球茎生长的影响。结果表明,2 00... 以长势均一、色泽深绿的铁皮石斛原球茎为试验材料,分别在1 000lx、2 000lx和3 000lx的光强下进行12h/d的光照培养,每隔7d测定其鲜质量、多糖含量、叶绿素含量及叶绿素a/b,研究光强对悬浮培养下铁皮石斛原球茎生长的影响。结果表明,2 000lx光强完全满足液体条件下铁皮石斛原球茎生长的要求,鲜质量和多糖(23.4%)的积累最高,同时叶绿素含量也最大,光强较低时,其叶绿素a/b值也较低,这与自然生境下铁皮石斛的相关参数一致。表明提供一定光强和光周期,采取悬浮方式规模化培养铁皮石斛原球茎是可行的。 展开更多

关键词 铁皮石斛 原球茎 光照 叶绿素

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杂交构树体细胞胚诱导研究 被引量：10

11

作者 张朝晖 张宗申 +1 位作者 陈阳 李毅 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2016年第12期127-131,共5页

以杂交构树叶片为材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。结果表明,光照强度750 lx、构树幼叶面积4~5 cm^2有利于诱导愈伤组织。最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,pH值6.0,其愈伤组织诱导率达94.6%。构树愈伤... 以杂交构树叶片为材料,建立通过愈伤组织制备体细胞胚的技术途径。结果表明,光照强度750 lx、构树幼叶面积4~5 cm^2有利于诱导愈伤组织。最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D,pH值6.0,其愈伤组织诱导率达94.6%。构树愈伤组织最佳继代培养基为MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L KT,p H值6.2,愈伤组织增殖速度快。选择表面颗粒多、质地松软、浅黄色或白色的愈伤组织进行体细胞胚诱导,最佳诱导培养基为MS+2.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA,p H值6.4,体细胞胚的发生频率达到96.0%。 展开更多

关键词 杂交构树 愈伤组织 体细胞胚

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渗透压对酿酒酵母胞内代谢关键酶活性的影响 被引量：8

12

作者 汤佳鑫 王继花 +1 位作者 俞志敏 赵长新 《酿酒科技》 北大核心 2008年第5期45-49,共5页

对耐高渗酵母与普通酿酒酵母在丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活性特征的差异进行比较分析,建立酶活力测定方法。发现耐高渗酵母在高渗环境的诱导下,其EMP途径、磷酸戊糖途径的关键酶... 对耐高渗酵母与普通酿酒酵母在丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活性特征的差异进行比较分析,建立酶活力测定方法。发现耐高渗酵母在高渗环境的诱导下,其EMP途径、磷酸戊糖途径的关键酶活力都高于普通酿酒酵母。耐高渗酵母具有高活力的乙醇脱氢酶,其能高效地将丙酮酸转化成乙醇。并且三羧酸循环中的关键酶异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性也得到加强。这些酶活力的增强维持了耐高渗酵母在高渗、高酒精环境下的生长需要与能量代谢的平衡。 展开更多

关键词 酿酒酵母 丙酮酸激酶PYK 6-磷酸葡萄糖脱氢酶G6PDH 异柠檬酸脱氢酶ICDH 乙醇脱氢酶YADH

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马铃薯酪氨酸酶体外筛选美白剂测定体系的建立 被引量：9

13

作者 徐鹏 付绍平 +2 位作者 王伟 赵长新 章克昌 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期385-388,共4页

以儿茶酚为底物,研究了自制马铃薯酪氨酸酶的动力学性质,建立了利用马铃薯酪氨酸酶体外筛选美白剂的测定体系,测定了12种中药提取物的酪氨酸酶抑制活性。结果表明,马铃薯酪氨酸酶的适宜反应条件为:30℃、pH=6.5;以儿茶酚为底物,酶促反... 以儿茶酚为底物,研究了自制马铃薯酪氨酸酶的动力学性质,建立了利用马铃薯酪氨酸酶体外筛选美白剂的测定体系,测定了12种中药提取物的酪氨酸酶抑制活性。结果表明,马铃薯酪氨酸酶的适宜反应条件为:30℃、pH=6.5;以儿茶酚为底物,酶促反应产物的最大吸收波长为420 nm;马铃薯酪氨酸酶的动力学参数如下:Vmax=0.284 9 min-1;Km=5.441 2 mmol/L;在12种中药的乙醇〔φ(C2H5OH)=50%〕提取液中,生药质量浓度达到2 g/L时,红花(Carthamus tinctorius L.)、杨梅叶(Myrica rubra S.)、黄芩(Scutellaria baicalensis G.)和绿茶(Camellia sinensis L.)相对L-抗坏血酸(ρ=0.2 g/L)的酪氨酸酶抑制率分别达到128.62%、83.64%、79.65%和66.48%,它们在美白化妆品领域有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 美白化妆品 酪氨酸酶 测定体系 中药

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氮源和磷源对金铁锁毛状根悬浮培养的影响 被引量：9

14

作者 刘军 陈显化 +2 位作者 金朝霞 王冰 张宗申 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2013年第6期409-412,共4页

以生物量和总皂苷两个参数为指标,研究了氮源(NH+4,NO-3)与磷源(PO3-4)浓度对金铁锁毛状根悬浮培养过程中的影响。培养基中NH+4与NO-3的浓度比为1∶2时,毛状根生物量和总皂苷的收获量都达到最高值,PO3-4的浓度在6.25mmol/L时具有同样的... 以生物量和总皂苷两个参数为指标,研究了氮源(NH+4,NO-3)与磷源(PO3-4)浓度对金铁锁毛状根悬浮培养过程中的影响。培养基中NH+4与NO-3的浓度比为1∶2时,毛状根生物量和总皂苷的收获量都达到最高值,PO3-4的浓度在6.25mmol/L时具有同样的效果;毛状根对培养液中NO-3和PO3-4吸收利用与其生长周期基本一致,它们的含量在20d左右下降到最低;综合考虑,氮源和磷源的最佳组合为NH+410mmol/L,NO-320mmol/L,PO3-46.25mmol/L。 展开更多

关键词 金铁锁 毛状根 悬浮培养 次级代谢

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高等植物纤维素合酶超家族 被引量：9

15

作者 刘长斌 薛永常 聂会忠 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期533-535,共3页

从1996年第一个植物纤维素合酶基因的鉴定,人们对植物体内纤维素合成的研究已经走过了10年的历程。10多年中,人们取得了很大的成果,也有很多问题有待解决。该文主要介绍拟南芥和毛果杨基因组中的纤维素合酶超家族。

关键词 纤维素 纤维素合酶 类纤维素合酶 纤维素合酶超家族

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南五味子液相色谱指纹图谱研究 被引量：4

16

作者 李学龙 杨博 +3 位作者 徐鹏 付绍平 鱼红闪 金凤燮 《大连工业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第1期4-8,共5页

利用反相高效液相色谱法建立了南五味子指纹图谱。采用Hypersil ODS2色谱柱(5μm,200 mm×4.6 mm),甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长235 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃。建立了由41个指纹峰和19个共有峰组成的液相色谱指纹图... 利用反相高效液相色谱法建立了南五味子指纹图谱。采用Hypersil ODS2色谱柱(5μm,200 mm×4.6 mm),甲醇-水为流动相进行梯度洗脱,检测波长235 nm,体积流量1.0 mL/min,柱温35℃。建立了由41个指纹峰和19个共有峰组成的液相色谱指纹图谱,并对不同产地的南五味子药材进行了相似度比较。结果表明,方法准确可靠,重现性好,可用于不同产地南五味子药材的指纹图谱建立和质量评价,为有效控制南五味子药材的内在质量提供依据。 展开更多

关键词 南五味子 指纹图谱 质量控制

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耐高糖酿酒酵母原生质体制备与再生过程研究 被引量：7

17

作者 俞志敏 栾静 +2 位作者 徐鹏 王继花 赵长新 《酿酒科技》 北大核心 2008年第4期45-48,共4页

对1株耐高糖酿酒酵母的原生质体制备和再生条件进行了研究。结果表明,发酵7h后为对数生长中期,适宜原生质体化;L1(65)确定制备原生质体的最佳条件为蜗牛酶浓度(1.0%)、KCl高渗缓冲液(0.7mol/L)、酶解时间(1.5h)、预处理剂(0.1%β-巯基乙... 对1株耐高糖酿酒酵母的原生质体制备和再生条件进行了研究。结果表明,发酵7h后为对数生长中期,适宜原生质体化;L1(65)确定制备原生质体的最佳条件为蜗牛酶浓度(1.0%)、KCl高渗缓冲液(0.7mol/L)、酶解时间(1.5h)、预处理剂(0.1%β-巯基乙醇)和酶解温度(26℃),在此条件下原生质体形成率和再生率分别为80.84%和36.03%;原生质体形成后在7%蔗糖高渗培养基上夹层培养再生率较高(39.78%)。 展开更多

关键词 微生物 耐高糖酿酒酵母 原生质体 制备 再生

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TCA循环中间产物对酿酒酵母胞内代谢关键酶活性的影响 被引量：7

18

作者 李明达 赵睿 +2 位作者 姜晓雷 姚峻 赵长新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期331-335,共5页

对酿酒酵母在添加苹果酸、柠檬酸和琥珀酸的混合培养基与其在YEPD培养基中胞内丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活力差异进行了对比分析。结果表明:添加苹果酸使胞内丙酮酸激酶、异柠檬... 对酿酒酵母在添加苹果酸、柠檬酸和琥珀酸的混合培养基与其在YEPD培养基中胞内丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活力差异进行了对比分析。结果表明:添加苹果酸使胞内丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活分别下降34.82%、57.23%、39.15%、12.10%;添加柠檬酸使胞内丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶的酶活分别下降50.17%、42.20%、48.40%;添加琥珀酸使胞内丙酮酸激酶、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶、乙醇脱氢酶的酶活分别下降34.16%、34.16%、50.87%、50.87%、12.37%。丙酮酸激酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶对3种有机酸的耐受性较差,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶、乙醇脱氢酶对3种有机酸的耐受具有选择性。 展开更多

关键词 酿酒酵母 TCA循环 代谢酶活 有机酸

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杨树木质素合成酶hct基因的克隆及核苷酸序列分析 被引量：7

19

作者 王雪霞 曹方 薛永常 《辽宁林业科技》 2009年第6期4-7,共4页

根据毛果杨全序列(AC185363.2)中唯一具有转移酶功能的保守区设计引物,以正在分化的2年生欧美杨107次生木质部总RNA为模板经RT-PCR扩增出hct基因片段,与pMD20-T载体连接,重组质粒经特异引物扩增、限制性内切酶酶切和测序鉴定。结果表明... 根据毛果杨全序列(AC185363.2)中唯一具有转移酶功能的保守区设计引物,以正在分化的2年生欧美杨107次生木质部总RNA为模板经RT-PCR扩增出hct基因片段,与pMD20-T载体连接,重组质粒经特异引物扩增、限制性内切酶酶切和测序鉴定。结果表明,扩增片段长度为709bp,包含一个708bp的开放阅读框,与毛果杨全序列及HCT2(EU603314)的同源性均为98%,编码的氨基酸序列与毛果杨HCT2氨基酸(ACC63883.1)的同源性为98%,断定我们克隆的cDNA为hct,属于转移酶超家族,GenBank登录号为FM202091,该重组质粒命名为pMD20-T-hct。 展开更多

关键词 木质素 hct基因 CDNA克隆 序列分析

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酿酒酵母FFC2146胞内蛋白及胞外蛋白双向电泳条件优化及图谱建立 被引量：6

20

作者 王祥余 朴永哲 +3 位作者 翟明昌 王晓丹 程贺 赵长新 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期270-274,共5页

通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的培养基、培养条件及蛋白质提取方案的优化,建立了酿酒酵母胞外和胞内蛋白双向电泳图谱制作方法。在YNB培养基中培养20 h,经过离心取上清-超滤-冻干可得到酿酒酵母胞外蛋白质样品;用SDS缓冲... 通过对酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的培养基、培养条件及蛋白质提取方案的优化,建立了酿酒酵母胞外和胞内蛋白双向电泳图谱制作方法。在YNB培养基中培养20 h,经过离心取上清-超滤-冻干可得到酿酒酵母胞外蛋白质样品;用SDS缓冲液悬浮酵母细胞-煮沸-超声-增溶,得到了酿酒酵母胞内蛋白质样品。经过双向电泳分离、硝酸银染色和PDQuest图像分析可以检测到了200多种酿酒酵母胞外蛋白和500多种酿酒酵母胞内蛋白。 展开更多

关键词 蛋白质 双向电泳 酿酒酵母

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