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柞蚕溶菌酶基因的克隆和序列分析 被引量：9
1
作者 张波 王林美 +3 位作者 叶博 赵振军 范琦 李树英 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期539-546,共8页
采用cDNA末端扩增(RACE)方法及简并引物克隆了柞蚕溶菌酶(Antheraea pernyilysozyme)基因(Gen-Bank登录号:DQ353869)。该基因cDNA序列全长675 bp,由3个外显子和2个内含子组成,其开放读码框(ORF)长420 bp,编码140个氨基酸。生物信息学分... 采用cDNA末端扩增(RACE)方法及简并引物克隆了柞蚕溶菌酶(Antheraea pernyilysozyme)基因(Gen-Bank登录号:DQ353869)。该基因cDNA序列全长675 bp,由3个外显子和2个内含子组成,其开放读码框(ORF)长420 bp,编码140个氨基酸。生物信息学分析表明,该基因编码蛋白的1-20位氨基酸为信号肽序列,21-140位氨基酸为柞蚕溶菌酶成熟蛋白(分子质量14 kD,等电点8.46)。柞蚕溶菌酶氨基酸序列中含有c型溶菌酶分子所特有的活性中心Glu32、Asp50以及8个半胱氨酸残基,与鳞翅目昆虫溶菌酶的氨基酸序列同源性较高,属非钙结合型c型溶菌酶。柞蚕溶菌酶的模拟三级结构与印度柞蚕(Antheraea mylitta)溶菌酶的三级结构十分相似。 展开更多
关键词 柞蚕溶菌酶基因 cDNA末端扩增 生物信息学分析
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用cDNA末端扩增法克隆柞蚕攻击素(attacin)基因及序列分析 被引量：5
2
作者 张波 王林美 +3 位作者 叶博 李树英 赵振军 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期333-339,共7页
利用cDNA末端扩增(RLM-RACE)方法,克隆了柞蚕攻击素(attac in)基因cDNA序列(GenBank登陆号:AY960680)。柞蚕攻击素基因cDNA序列全长912 bp,其中699 bp的蛋白质编码区可编码233个氨基酸。预测蛋白质分子量为25 kD,等电点(pI)为7.54。柞... 利用cDNA末端扩增(RLM-RACE)方法,克隆了柞蚕攻击素(attac in)基因cDNA序列(GenBank登陆号:AY960680)。柞蚕攻击素基因cDNA序列全长912 bp,其中699 bp的蛋白质编码区可编码233个氨基酸。预测蛋白质分子量为25 kD,等电点(pI)为7.54。柞蚕攻击素基因中包含2个内含子。S ignal P 3.0 Server程序分析结果显示,柞蚕攻击素第1-17位氨基酸为信号肽序列。蛋白质功能区分析预测,柞蚕攻击素在第47-112氨基酸之间为攻击素-N(attac in-N)功能区,第113-233位氨基酸之间为攻击素-C(attac in-C)功能区。以邻接法(ne igh-bor-join ing,NJ)建立了与其它昆虫攻击素的系统关系图。 展开更多
关键词 柞蚕 攻击素 末端扩增
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柞蚕核型多角体病毒对Tn-Hi5细胞的感染性及抗细胞凋亡分析 被引量：1
3
作者 赵振军 王林美 +5 位作者 叶博 岳冬梅 张波 李树英 都兴范 范琦 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期292-299,共8页
细胞凋亡是昆虫宿主细胞抗病毒感染及控制病毒复制增殖的一个复杂的分子生物学机制。前期研究发现柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)的重组病毒Ap NPV-Δph/egfp+能够感染非特异性宿主细胞Tn-Hi5,并表达EGFP蛋白。利用实时荧光定量PCR方法进... 细胞凋亡是昆虫宿主细胞抗病毒感染及控制病毒复制增殖的一个复杂的分子生物学机制。前期研究发现柞蚕核型多角体病毒(Ap NPV)的重组病毒Ap NPV-Δph/egfp+能够感染非特异性宿主细胞Tn-Hi5,并表达EGFP蛋白。利用实时荧光定量PCR方法进一步检测分析Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的复制增殖特点以及子代病毒的感染性;通过检测细胞凋亡信号通路中类caspase-3蛋白酶活性,分析Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后对抗细胞凋亡的作用途径。结果显示,随着病毒感染时间的延长,Ap NPV-Δph/egfp+在Tn-Hi5细胞中的DNA拷贝数增加,被感染的Tn-Hi5细胞能够产生子代病毒,但病毒DNA拷贝数逐代减少;Ap NPV-Δph/egfp+感染Tn-Hi5细胞后可抑制放线菌素D诱导的细胞类caspase-3蛋白酶活性。研究结果证实Ap NPV能够在Tn-Hi5细胞中复制增殖,并具有抑制由放线菌素D诱导的细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 柞蚕核型多角体病毒 Tn-Hi5细胞 复制增殖 细胞凋亡
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栗蚕蛹卵巢细胞的初代培养
4
作者 赵振军 王林美 《安徽农学通报》 2009年第11期79-79,145,共2页
分别采用TC-100加20%胎牛血清做为细胞原代培养基,在27℃,pH6.2-6.4的条件下,对栗蚕(Dicty-opoeajaponica)蛹卵巢组织进行体外培养,细胞贴壁较好,原代培养细胞能够存活两个月之久。细胞形态不一,培养20d后,细胞产生聚集分化现象,每隔7d... 分别采用TC-100加20%胎牛血清做为细胞原代培养基,在27℃,pH6.2-6.4的条件下,对栗蚕(Dicty-opoeajaponica)蛹卵巢组织进行体外培养,细胞贴壁较好,原代培养细胞能够存活两个月之久。细胞形态不一,培养20d后,细胞产生聚集分化现象,每隔7d换液1次。结果表明:TC-100培养基对栗蚕蛹卵巢原代培养细胞来说是比较理想的培养基。 展开更多
关键词 栗蚕蛹 卵巢 细胞培养
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