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关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响 被引量：5
1
作者 张雯 许厚强 +5 位作者 陈伟 陈祥 赵佳福 桓聪聪 夏丹 周迪 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1196-1206,共11页
【目的】生肌决定因子(myogenic determination gene,MyoD)家族是肌肉生成过程中参与分子调控作用的一个重要家族。该家族包括MyoD1,Myf5,Myo G和Myf6,只表达在成熟的骨骼肌细胞和其前期细胞中;在其他的非肌细胞中,MyoD基因家族会被抑... 【目的】生肌决定因子(myogenic determination gene,MyoD)家族是肌肉生成过程中参与分子调控作用的一个重要家族。该家族包括MyoD1,Myf5,Myo G和Myf6,只表达在成熟的骨骼肌细胞和其前期细胞中;在其他的非肌细胞中,MyoD基因家族会被抑制。该家族中,MyoD1负责早期胚胎成肌祖细胞的激活并参与胚后骨骼肌的生长、发育和修复等的调节,以维持个体骨骼肌的相对稳定,是启动和维持骨骼肌细胞分化和生长的重要因素,具有尤为重要的作用,已成为研究热点。目前MyoD1在多态性和关联性分析等方面的研究较多,表达调控方面主要是研究小鼠、鸡和猪肌细胞生成机理;在牛上对它的研究主要在转录后和翻译水平的表达,但对MyoD1在转录调控方面的作用机制还不明确。文章研究关岭牛MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响,为探讨牛MyoD1的表达调控机制奠定基础。【方法】通过设计特异性引物克隆关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子片段P1和P2;同时利用双酶切的方法分别将CDS区和克隆的启动子序列连入pcDNA3.1(+)和p GL3-Basic基本骨架,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G和含萤火虫荧光素酶报告基因的报告载体p GL3-P1、p GL3-P2。重组质粒经酶切和测序鉴定后,利用共转染的方法将真核表达载体和报告载体转染小鼠C2C12细胞,30 h后裂解细胞并检测细胞裂解液的双荧光素酶活性。最后根据荧光素酶的相对活性来分析MyoD基因家族对MyoD1启动子活性的影响。【结果】克隆得到的关岭牛MyoD基因家族CDS区和MyoD1启动子序列测序正确,载体pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD、pcDNA3.1(+)-Myo G、p GL3-P1和p GL3-P2经酶切和测序鉴定,证实载体构建成功;与相应剂量的对照组相比,转染pcDNA3.1(+)-Myf5、pcDNA3.1(+)-Myf6、pcDNA3.1(+)-MyoD后,p GL3-P1的相对荧光素酶活性明显增� 展开更多
关键词 关岭牛 转录因子 启动子 MyoD基因家族 报告基因 荧光素酶活性
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PID1基因在白洗猪不同组织器官中的表达研究及生物信息学分析 被引量：1
2
作者 苑洪霞 冯文武 +1 位作者 孙振梅 陈祥 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期83-87,248,共6页
为了探究PID1基因在白洗猪各组织器官中的表达水平及其结构和功能特性,为PID1基因对猪脂肪沉积的作用及其蛋白质特性研究提供理论基础,试验以白洗猪为研究对象,运用实时荧光定量PCR和Nest PCR法分析PID1基因mRNA在白洗猪9个不同组织器... 为了探究PID1基因在白洗猪各组织器官中的表达水平及其结构和功能特性,为PID1基因对猪脂肪沉积的作用及其蛋白质特性研究提供理论基础,试验以白洗猪为研究对象,运用实时荧光定量PCR和Nest PCR法分析PID1基因mRNA在白洗猪9个不同组织器官中的表达水平,运用T克隆、蓝白斑筛选等技术克隆PID1基因的CDS区,进一步运用生物信息学软件分析PID1蛋白的生物特性。结果表明：PID1基因mRNA表达量在肝脏中最高,心脏中最低,其表达水平依次为肝脏〉肾脏〉肺脏〉小肠〉胃〉脾脏〉大肠〉肌肉〉心脏;白洗猪PID1基因的克隆CDS区与NCBI上传的序列一致;白洗猪PID1基因编码217个氨基酸,分子质量为24.8 ku,属亲水性蛋白,在PID1蛋白的二级结构中α螺旋比率较大,跨膜区预测分析未发现跨膜区域。 展开更多
关键词 白洗猪 PID1 荧光定量PCR 二级结构 结构域
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加利福尼亚兔和新西兰兔UCP1基因第5外显子多态性和生物信息学研究 被引量：1
3
作者 李维 林家栋 +4 位作者 刘若余 谢海强 李思 杜雪琴 肖超能 《江苏农业科学》 北大核心 2016年第1期41-44,共4页
本试验以加利福尼亚兔和新西兰兔为研究对象,分别用磁珠法动物基因组DNA抽提试剂盒提取新西兰兔和加利福尼亚兔的DNA,通过构建DNA池,扩增UCP1基因的第5外显子及第4内含子部分序列。扩增产物进行双向测序,利用DNAStar和BLAST分析测序结... 本试验以加利福尼亚兔和新西兰兔为研究对象,分别用磁珠法动物基因组DNA抽提试剂盒提取新西兰兔和加利福尼亚兔的DNA,通过构建DNA池,扩增UCP1基因的第5外显子及第4内含子部分序列。扩增产物进行双向测序,利用DNAStar和BLAST分析测序结果。结果发现:在加利福尼亚兔中没有发现SNP位点,在新西兰兔中有4个多态性位点,分别为G743T、A744G、C819A和G849T,其中G743T为同义突变,A744G为错义突变,导致编码的苏氨酸(Thr)变为丙氨酸(Ala);C819A、G849T突变位点位于内含子区。多态位点的出现对UCP1基因的RNA二级结构产生的影响表现在其最小自由能由-1.93 MJ/mol变为-1.932 MJ/mol,同时SNPs位点对UCP1基因蛋白结构也有一定影响。 展开更多
关键词 UCP1基因 新西兰兔 加利福尼亚兔 SNPS RNA二级结构
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贵州地方猪种RN、RYR1基因的快速检测方法研究
4
作者 徐敏 陈祥 +1 位作者 冯文武 许厚强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第11期125-127,130,共4页
为了探讨贵州地方猪种酸肉基因（RN）、氟烷基因（RYR1）的快速检测方法,试验采用PCRRFLP技术对宗地花猪、杜洛克公猪与白洗母猪杂交后代（DBF1）猪和三元商品猪进行RN、RYR1基因检测,并对RN、RYR1基因频率及基因型频率进行统计。结果... 为了探讨贵州地方猪种酸肉基因（RN）、氟烷基因（RYR1）的快速检测方法,试验采用PCRRFLP技术对宗地花猪、杜洛克公猪与白洗母猪杂交后代（DBF1）猪和三元商品猪进行RN、RYR1基因检测,并对RN、RYR1基因频率及基因型频率进行统计。结果表明：宗地花猪群体（n=72）全为抗应激敏感基因型（HalNN）;DBF1猪（n=26）和三元商品猪（n=18）无应激敏感基因型（Halnn）,HalNN基因型频率分别为96.15%、91.67%。DBF1猪和三元商品猪未检测出RN-基因;宗地花猪检测出RN-/RN-、RN-/RN＋、RN＋/RN＋三种基因型,基因型频率分别为2.28%、9.72%、87.50%。 展开更多
关键词 地方猪种 RN基因 RYR1基因 检测方法 应激敏感基因 基因频率
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