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高羊茅FaCCA1基因克隆、表达分析及基因编码蛋白的亚细胞定位
被引量：
2
1
作者
陈锡
陈莹
+3 位作者
刘晓霞
舒健虹
王小利
赵德刚
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1767-1777,共11页
生物钟节律基因(circadian clock gene)CCA1在植物光周期途径中具有十分重要的作用。以高羊茅‘黔草1号’cDNA为模板,利用同源扩增结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从高羊茅中获得与拟南芥CCA1高度同源...
生物钟节律基因(circadian clock gene)CCA1在植物光周期途径中具有十分重要的作用。以高羊茅‘黔草1号’cDNA为模板,利用同源扩增结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从高羊茅中获得与拟南芥CCA1高度同源的cDNA全长序列,命名为FaCCA1。利用BLAST在线软件对该基因进行生物信息学分析,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达,观察Fa CCA1基因编码蛋白的亚细胞定位,并利用RT-qPCR技术分析不同光照条件下FaCCA1基因表达水平。结果表明,该序列cDNA全长为2433bp,含有一个完整的开放阅读框,长度为2148 bp,编码蛋白含有715个氨基酸,蛋白分子量为77.80 kDa,理论等电点为5.91。亚细胞定位结果显示FaCCA1基因所编码的蛋白定位于细胞核。系统进化树分析表明FaCCA1与禾本科植物的CCA1蛋白亲缘关系较近,其中与大麦亲缘关系最近,达到80%以上。FaCCA1基因表达量在长日照高于短日照,表达水平出现昼夜节律钟变化模式,表明高羊茅FaCCA1表达量受光周期调控。这为高羊茅FaCCA1基因的功能研究提供参考资料,为高羊茅的分子育种利用提供了改良靶标。
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关键词
高羊茅
FaCCA1
亚细胞定位
表达分析
原文传递
FaGST基因过量表达获得拟南芥转基因植株
被引量：
1
2
作者
陈锡
陈莹
+4 位作者
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
王小利
《贵州农业科学》
CAS
2022年第7期21-25,共5页
【目的】探明FaGST基因的功能和分子调控机制,为其后期的抗性利用与研究提供科学依据。【方法】利用前期构建的pCAMBIA1300-35S空载体和pCAMBIA1300-35S-FaGST过表达载体,将其转化感受态(DH5α)细胞后导入农杆菌GV3101,利用花序侵染法...
【目的】探明FaGST基因的功能和分子调控机制,为其后期的抗性利用与研究提供科学依据。【方法】利用前期构建的pCAMBIA1300-35S空载体和pCAMBIA1300-35S-FaGST过表达载体,将其转化感受态(DH5α)细胞后导入农杆菌GV3101,利用花序侵染法转化拟南芥,通过潮霉素(Hyp)进行筛选、PCR鉴定,并利用实时荧光定量PCR检测其表达量。【结果】FaGST基因成功导入拟南芥中,获得6株空载体转基因拟南芥植株和8株转FaGST基因拟南芥植株;8株转基因拟南芥植株的FaGST基因表达量为1.31~2.06,较野生型拟南芥植株表达量(1.00)显著或极显著提高。【结论】成功获得拟南芥转基因纯合植株,FaGST基因在拟南芥植株中已过量表达。
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关键词
拟南芥
FaGST
花序侵染
表达量
下载PDF
职称材料
FaGST基因改良菊苣新种质创制
3
作者
陈锡
陈莹
+5 位作者
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
赵德刚
王小利
《种子》
北大核心
2022年第3期32-36,共5页
谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GSTs)在植物抵御逆境胁迫中具有非常重要的作用。从高羊茅叶片中克隆获得FaGST基因,对其进行酶切位点分析,设计酶切引物,通过BamHI和PstI双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pCAMBIA 1300-...
谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GSTs)在植物抵御逆境胁迫中具有非常重要的作用。从高羊茅叶片中克隆获得FaGST基因,对其进行酶切位点分析,设计酶切引物,通过BamHI和PstI双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pCAMBIA 1300-35 S上,成功构建pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体。将过表达载体转化感受态(DH 5α)细胞,利用农杆菌介导法遗传转化菊苣,通过潮霉素(Hyp)进行筛选后获得阳性植株。经PCR鉴定呈阳性,结果表明,pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体已成功导入菊苣中,获得转基因菊苣阳性苗9株,利用实时荧光定量PCR对其表达量进行检测,发现该基因表达量明显提高。这将为下一步分析该基因的抗逆性研究奠定基础。
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关键词
菊苣
FaGST
遗传转化
表达分析
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职称材料
题名
高羊茅FaCCA1基因克隆、表达分析及基因编码蛋白的亚细胞定位
被引量：
2
1
作者
陈锡
陈莹
刘晓霞
舒健虹
王小利
赵德刚
机构
贵州
省农业
科学
院/
贵州
省草业
研究
所
贵州大学
生命科学
学院
/
山地
植物
资源
保护
与
种质
创新
教育部
重点
实验室
/
喀斯特
山区
植物
资源
利用
与
育种
国家
地方
联合
工程研究
中心
出处
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第9期1767-1777,共11页
基金
国家自然科学基金(31860674)
贵州省科技计划([2019]1302)。
文摘
生物钟节律基因(circadian clock gene)CCA1在植物光周期途径中具有十分重要的作用。以高羊茅‘黔草1号’cDNA为模板,利用同源扩增结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术从高羊茅中获得与拟南芥CCA1高度同源的cDNA全长序列,命名为FaCCA1。利用BLAST在线软件对该基因进行生物信息学分析,通过农杆菌介导的烟草瞬时表达,观察Fa CCA1基因编码蛋白的亚细胞定位,并利用RT-qPCR技术分析不同光照条件下FaCCA1基因表达水平。结果表明,该序列cDNA全长为2433bp,含有一个完整的开放阅读框,长度为2148 bp,编码蛋白含有715个氨基酸,蛋白分子量为77.80 kDa,理论等电点为5.91。亚细胞定位结果显示FaCCA1基因所编码的蛋白定位于细胞核。系统进化树分析表明FaCCA1与禾本科植物的CCA1蛋白亲缘关系较近,其中与大麦亲缘关系最近,达到80%以上。FaCCA1基因表达量在长日照高于短日照,表达水平出现昼夜节律钟变化模式,表明高羊茅FaCCA1表达量受光周期调控。这为高羊茅FaCCA1基因的功能研究提供参考资料,为高羊茅的分子育种利用提供了改良靶标。
关键词
高羊茅
FaCCA1
亚细胞定位
表达分析
Keywords
tall fescue
FaCCA1
subcellular localization
expression analysis
分类号
S688.4 [农业科学—观赏园艺]
原文传递
题名
FaGST基因过量表达获得拟南芥转基因植株
被引量：
1
2
作者
陈锡
陈莹
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
王小利
机构
贵州
省草业
研究
所
贵州大学
生命科学
学院
/
山地
植物
资源
保护
与
种质
创新
教育部
重点
实验室
/
喀斯特
山区
植物
资源
利用
与
育种
国家
地方
联合
工程研究
中心
出处
《贵州农业科学》
CAS
2022年第7期21-25,共5页
基金
贵州省科技计划项目“GST基因改良菊苣种质创新及应用研究”[黔科合基础(2019)1302]。
文摘
【目的】探明FaGST基因的功能和分子调控机制,为其后期的抗性利用与研究提供科学依据。【方法】利用前期构建的pCAMBIA1300-35S空载体和pCAMBIA1300-35S-FaGST过表达载体,将其转化感受态(DH5α)细胞后导入农杆菌GV3101,利用花序侵染法转化拟南芥,通过潮霉素(Hyp)进行筛选、PCR鉴定,并利用实时荧光定量PCR检测其表达量。【结果】FaGST基因成功导入拟南芥中,获得6株空载体转基因拟南芥植株和8株转FaGST基因拟南芥植株;8株转基因拟南芥植株的FaGST基因表达量为1.31~2.06,较野生型拟南芥植株表达量(1.00)显著或极显著提高。【结论】成功获得拟南芥转基因纯合植株,FaGST基因在拟南芥植株中已过量表达。
关键词
拟南芥
FaGST
花序侵染
表达量
Keywords
Arabidopsis thaliana
FaGST
inflorescence infection
expression level
分类号
S505.53 [农业科学—作物学]
Q943.2 [生物学—植物学]
下载PDF
职称材料
题名
FaGST基因改良菊苣新种质创制
3
作者
陈锡
陈莹
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
赵德刚
王小利
机构
贵州
省农业
科学
院/
贵州
省草业
研究
所
贵州大学
生命科学
学院
/
山地
植物
资源
保护
与
种质
创新
教育部
重点
实验室
/
喀斯特
山区
植物
资源
利用
与
育种
国家
地方
联合
工程研究
中心
出处
《种子》
北大核心
2022年第3期32-36,共5页
基金
贵州省科技计划项目([2019]1302)
贵州省高层次创新人才培养项目([2016]4003)
+1 种基金
国家自然科学基金项目(31860674)
黔科合平台人才([2018]5634-2)。
文摘
谷胱甘肽转移酶(glutathione transferases,GSTs)在植物抵御逆境胁迫中具有非常重要的作用。从高羊茅叶片中克隆获得FaGST基因,对其进行酶切位点分析,设计酶切引物,通过BamHI和PstI双酶切将目的基因片段连接在真核表达载体pCAMBIA 1300-35 S上,成功构建pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体。将过表达载体转化感受态(DH 5α)细胞,利用农杆菌介导法遗传转化菊苣,通过潮霉素(Hyp)进行筛选后获得阳性植株。经PCR鉴定呈阳性,结果表明,pCAMBIA 1300-35 S-FaGST过表达载体已成功导入菊苣中,获得转基因菊苣阳性苗9株,利用实时荧光定量PCR对其表达量进行检测,发现该基因表达量明显提高。这将为下一步分析该基因的抗逆性研究奠定基础。
关键词
菊苣
FaGST
遗传转化
表达分析
Keywords
chicory
FaGST
genetic transformation
expression analysis
分类号
S548 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
高羊茅FaCCA1基因克隆、表达分析及基因编码蛋白的亚细胞定位
陈锡
陈莹
刘晓霞
舒健虹
王小利
赵德刚
《植物生理学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
2
原文传递
2
FaGST基因过量表达获得拟南芥转基因植株
陈锡
陈莹
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
王小利
《贵州农业科学》
CAS
2022
1
下载PDF
职称材料
3
FaGST基因改良菊苣新种质创制
陈锡
陈莹
刘晓霞
刘重阳
吴溪
姚文琴
赵德刚
王小利
《种子》
北大核心
2022
0
下载PDF
职称材料
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