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五味子甲素对人胰腺癌细胞株As Pc-1增殖、凋亡的影响及其机制 被引量：13
1
作者 曾智锐 雷珊 +3 位作者 张金娟 杨宇石 兰金芝 陈腾祥 《山东医药》 CAS 2019年第12期1-4,共4页
目的观察五味子甲素对人胰腺癌细胞株As Pc-1增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将As Pc-1细胞分为5组,分别加入12. 5、25、50、100μmol/L的五味子甲素药液和等量培养基,记为12. 5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L... 目的观察五味子甲素对人胰腺癌细胞株As Pc-1增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法将As Pc-1细胞分为5组,分别加入12. 5、25、50、100μmol/L的五味子甲素药液和等量培养基,记为12. 5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组和对照组,各组培养48 h后采用CCK-8法检测细胞增殖率。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,各组培养9 d后采用细胞平板克隆实验检测细胞克隆数。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,各组培养24 h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率。将As Pc-1细胞分为4组,分别加入25、50、100μmol/L的五味子甲素药液和等量培养基,记为25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组和对照组,采用Western blotting法检测各组细胞β-catenin蛋白和凋亡相关蛋白Bcl2、Bax。将As Pc-1细胞分为2组,分别加入100μmol/L五味子甲素药液和等体积PBS,记为五味子甲素组和对照组,采用免疫荧光法观察各组细胞β-catenin蛋白核定位。结果 12. 5μmol/L组、25μmol/L组、50μmol/L组、100μmol/L组、对照组细胞增殖率分别为95. 3%±3. 5%、73. 2%±1. 8%、56. 6%±3. 3%、41. 4%±2. 9%、100. 0%,其中12. 5μmol/L组与对照组相比,P> 0. 05;其余各组间相比,P均<0. 05。五味子甲素组、对照组的细胞克隆数分别为(410±30)、(180±20)个,细胞凋亡率分别为16. 36%±1. 54%、4. 58%±0. 83%,各指标组间相比,P均<0. 05。随着五味子甲素浓度增加,As Pc-1细胞Bcl2蛋白的相对表达量逐渐下调,而Bax蛋白的相对表达量逐渐增加,全长度β-catenin蛋白和78 k D的β-catenin蛋白的相对表达量也逐渐下调。五味子甲素组β-catenin蛋白在细胞核的聚集明显减少。结论五味子甲素可以抑制人胰腺癌细胞As Pc-1的增殖(呈浓度依赖性)、克隆形成能力,促进细胞凋亡;五味子� 展开更多
关键词 五味子甲素 人胰腺癌细胞As Pc-1 细胞增殖 细胞凋亡 Β-CATENIN蛋白
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芥子碱硫氰酸盐对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响及机制 被引量：4
2
作者 陈腾祥 王婧雅 +5 位作者 曾智锐 雷珊 薛燕 孙远梅 杨宇石 兰金芝 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1731-1737,共7页
目的探究芥子碱硫氰酸盐(sinapine thiocyanate)对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用CCK-8、划痕和Transwell实验,检测不同浓度(0、25、50和100μmol·L^-1)的芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵... 目的探究芥子碱硫氰酸盐(sinapine thiocyanate)对肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭的影响及机制。方法采用CCK-8、划痕和Transwell实验,检测不同浓度(0、25、50和100μmol·L^-1)的芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响;利用生物信息学和分子对接技术,挖掘蛋白靶点并验证芥子碱硫氰酸盐与蛋白靶点PTGS1和PTGS2的结合能力;Western blot检测芥子碱硫氰酸盐对SMMC-7721细胞中PTGS1、PTGS2、Bcl-2、Bax、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平的影响。结果芥子碱硫氰酸盐明显抑制SMMC-7721细胞的增殖、迁移和侵袭的能力(P<0.05);芥子碱硫氰酸盐有27个蛋白靶点,蛋白靶点富集在氮代谢等4个通路上;其中,PTGS1和PTGS2富集在多个信号通路中,且其活性口袋能与芥子碱硫氰酸盐稳定结合;芥子碱硫氰酸盐明显减少肝癌细胞SMMC-7721中PTGS1、PTGS2、Bcl-2、MMP-2和MMP-9的蛋白表达(P<0.05),增加Bax的蛋白表达(P<0.05)。结论芥子碱硫氰酸盐靶向PTGS1和PTGS2,从而抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 肝癌 芥子碱硫氰酸盐 增殖 迁移 PTGS1 PTGS2
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缺氧诱导Calpain 2表达可促进胰腺癌细胞迁移和侵袭 被引量：1
3
作者 曾智锐 雷珊 +6 位作者 张金娟 杨宇石 薛燕 兰金芝 孙远梅 胡晓霞 陈腾祥 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期595-605,共11页
目的:探讨缺氧微环境中卡配因即钙蛋白酶(Calpain)1和Calpain 2蛋白表达情况,以及调控Calpain 2蛋白表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的影响。方法:通过公共数据库GEPIA(Gene Expression Proling Interactive Analysis)分析Calpain 1和... 目的:探讨缺氧微环境中卡配因即钙蛋白酶(Calpain)1和Calpain 2蛋白表达情况,以及调控Calpain 2蛋白表达对胰腺癌PANC-1细胞迁移和侵袭的影响。方法:通过公共数据库GEPIA(Gene Expression Proling Interactive Analysis)分析Calpain 1和Calpain 2 mRNA在胰腺癌组织中的表达情况,以及它们与患者生存预后的相关性。采用蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR法分别检测在常氧(21%O2)和缺氧(1%O2)条件下,胰腺癌PANC-1细胞中Calpain 1、Calpain 2 mRNA和蛋白的表达水平。将靶向Calpain 2编码基因CAPN 2的siRNA转染胰腺癌PANC-1细胞,采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证CAPN 2基因沉默效果。分别在常氧和缺氧条件下培养Calpain 2低表达组和阴性对照组细胞,然后采用划痕愈合实验和Transwell小室法分别检测各组细胞的迁移和侵袭能力,再采用蛋白质印迹法检测各组细胞中Calpain 2、E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,最后用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化。结果:相对于正常胰腺组织,胰腺癌组织中Calpain 1和Calpain 2 mRNA表达水平明显增高(P值均<0.01),并且Calpain 2高表达与胰腺癌患者的不良预后有明显相关性(P=0.013)。相对于常氧条件,缺氧条件下胰腺癌PANC-1细胞中Calpain 1 mRNA和蛋白表达水平变化不明显,而Calpain 2 mRNA和蛋白表达水平明显上调(P值均<0.01)。成功构建Calpain 2低表达的PANC-1细胞株。在常氧条件下,下调Calpain 2表达可明显抑制PANC-1细胞的迁移和侵袭能力(P值均<0.05);缺氧培养可促进PANC-1细胞迁移和侵袭(P值均<0.05);而在缺氧条件下,下调Calpain 2表达可以逆转缺氧培养对PANC-1细胞迁移和侵袭的促进作用(P值均<0.05)。常氧条件下,下调Calpain 2表达的胰腺癌PANC-1细胞中,E-cadherin表达量增多(P <0.05),Vimentin表达量减少(P <0.05),而且PANC-1细胞轮廓变大,部分细胞有凋亡样改变;缺氧条件下,E-cadherin蛋白表 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 细胞低氧 肿瘤微环境 卡配因2 上皮-间质转化 肿瘤侵润
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长链非编码RNA 00460表达下调对胆管癌HuCCT1细胞生物学行为的影响 被引量：2
4
作者 雷珊 曾智锐 +7 位作者 张金娟 张乙凡 薛燕 兰金芝 孙远梅 胡晓霞 沈伊依 陈腾祥 《广东医学》 CAS 2019年第18期2573-2577,共5页
目的探讨长链非编码RNA 00460(LINC00460)对胆管癌HuCCT1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法分析LINC00460在正常胆管细胞及胆管癌细胞HuCCT1的表达差异。空载病毒及LINC00460KD病毒感染HuCCT1后,应用实时荧光定量PCR检测LINC00460... 目的探讨长链非编码RNA 00460(LINC00460)对胆管癌HuCCT1细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法分析LINC00460在正常胆管细胞及胆管癌细胞HuCCT1的表达差异。空载病毒及LINC00460KD病毒感染HuCCT1后,应用实时荧光定量PCR检测LINC00460表达。应用CCK-8法、平板克隆、流式细胞仪检测下调LINC00460对HuCCT1增殖、克隆能力及周期的影响;应用Transwell小室实验检测下调LINC00460对HuCCT1侵袭和迁移能力的影响。蛋白印记检测法检测相关蛋白的表达。结果胆管癌细胞HuCCT1中的表达水平明显高于正常胆管细胞(P<0.05), LINC00460KD病毒感染胆管癌细胞株后,LINC00460表达水平量明显减少。与对照组相比,下调LINC00460后,HuCCT1的增殖活力明显降低, G1期比例明显升高(P<0.05)。同时,下调LINC00460胆管癌细胞HuCCT1侵袭迁移能力明显减弱(P<0.05)。CyclinD1、CDK2和vimentin表达减少,E-cadherin表达明显增多。结论 LINC00460在胆管癌细胞HuCCT1中高表达且促进胆管癌细胞HuCCT1的增殖、迁移和侵袭。 展开更多
关键词 胆管肿瘤 增殖 转移 长链非编码RNA
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LINC00152在胰腺癌中的表达及临床意义 被引量：3
5
作者 雷珊 曾智锐 +3 位作者 薛燕 兰金芝 孙远梅 陈腾祥 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2019年第9期1429-1432,共4页
目的检测LINC00152在胰腺癌多个细胞系及组织中的表达,并探讨其表达水平与胰腺癌患者临床、病理特征之间的关系。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00152在6株人胰腺癌细胞系和1株人胰腺导管上皮细胞中的表达,同时检测在100例胰腺... 目的检测LINC00152在胰腺癌多个细胞系及组织中的表达,并探讨其表达水平与胰腺癌患者临床、病理特征之间的关系。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测LINC00152在6株人胰腺癌细胞系和1株人胰腺导管上皮细胞中的表达,同时检测在100例胰腺癌组织及相其配对的相邻的非癌组织中LINC00152的表达情况,并分析LINC00152的表达水平与胰腺癌患者临床病理特征及生存预后之间的关系。结果 qRT-PCR显示,相对于人胰腺正常细胞系(HPDE),LINC00152的表达水平在6株人胰腺癌细胞系(PANC-1,MIA PaCa-2,Panc03.27,AsPC-1,SW1990,CFPAC-1)中明显地升高(均P <0.01);在人胰腺癌临床组织样本中,癌组织的LINC00152的表达水平明显高于癌旁组织(P <0.01),胰腺癌中LINC00152表达水平与淋巴结转移及临床分期密切相关(均P <0.05),而与患者的性别、年龄以及患者肿瘤的直径大小无关(均P> 0.05),Kaplan-Meier生存分析结果显示,相对于LINC00152低表达的患者,高表达患者的预后差(P <0.05)。结论 LINC00152的表达量在胰腺癌组织和细胞中异常增高,与胰腺癌的发生发展相关,可能是一个胰腺癌诊断以及治疗的有效靶点。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 淋巴转移 长链非编码RNA 预后
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雷公藤甲素对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα磷酸化水平的影响
6
作者 郭曼岚 漆敏 +4 位作者 刘蔚雯 勾梦壮 孙密欣 刘亚伟 陈腾祥 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第4期412-417,共6页
目的:观察雷公藤甲素(Tp)对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα等信号通路分子的影响。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞,用40 nmol/L Tp刺激24 h,分别于刺激0、24 h时对细胞进行拍照,观察细胞形态,应用Path Scan分别检测细胞内信号... 目的:观察雷公藤甲素(Tp)对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα等信号通路分子的影响。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞,用40 nmol/L Tp刺激24 h,分别于刺激0、24 h时对细胞进行拍照,观察细胞形态,应用Path Scan分别检测细胞内信号通路分子ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点,AMPKα的Thr172位点及p53的Ser15位点的磷酸化水平,并通过Western blot验证p53蛋白在人结肠癌细胞SW480,SW620和HCT116细胞中的磷酸化水平。结果:40 nmol/L Tp刺激24 h后,人大肠癌SW480细胞变大、形态不规整、触角变长,细胞表型发生改变;Path Scan结果表明,Tp刺激24 h时,SW480细胞ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点及p53的Ser15位点磷酸化水平增高,AMPKα的Thr172磷酸化水平降低;Western blot实验结果显示,Tp刺激24 h时,人结肠癌SW480、SW620和HCT116细胞中p53蛋白的磷酸化水平上调。结论:Tp可能是通过ERK1/2、Akt、p53和AMPKα信号通路影响结肠癌细胞表型改变。 展开更多
关键词 雷公藤甲素 结肠肿瘤 P53 ERK1/2 体外培养 SW480细胞
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