斑马鱼造血系统发育与人类血液系统疾病研究进展 被引量：6

1

作者 夏海雄 何志旭 舒莉萍 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期745-749,共5页

斑马鱼（ zebrafish）是一种热带硬骨鱼，目前作为研究造血系统、胚胎发生以及器官形成过程的一种脊椎动物模型。斑马鱼的显著特点是在体外排卵受精，形成的胚胎是透明的，所以在显微镜下可以观察整个器官的形成过程，可以直接观察脉管... 斑马鱼（ zebrafish）是一种热带硬骨鱼，目前作为研究造血系统、胚胎发生以及器官形成过程的一种脊椎动物模型。斑马鱼的显著特点是在体外排卵受精，形成的胚胎是透明的，所以在显微镜下可以观察整个器官的形成过程，可以直接观察脉管系统循环通路。斑马鱼基因组测序工程研究结果显示，其基因与人类基因保守度约85%，从而使得斑马鱼逐渐成为连接非脊椎动物（果蝇、线虫等）和哺乳动物（小鼠）的“桥梁”，越来越受到科研者的关注。 展开更多

关键词 斑马鱼 胚胎发育 造血系统 突变 造血干细胞

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FLASH基因在野生型斑马鱼早期表达以及与HoxB4基因的关系 被引量：1

2

作者 金璐 丁可军 +4 位作者 孙琮杰 陈露 周艳华 舒莉萍 何志旭 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第10期1178-1182,1191,共6页

目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有E... 目的:观测FLASH基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎早期的表达及与Hox B4基因的关系。方法:以Hox B4转基因斑马鱼系为研究对象,分为实验组、实验对照组和空白对照组,实验组为Hox B4转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的过表达Hox B4的带有EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-Hoxb4-EGFP),实验对照组为EGFP转基因斑马鱼系与Cre鱼系交配所得的表达EGFP荧光的胚胎(Tg:Lmo2-Cre,Lmo2-LDEL-EGFP),空白对照组为Tuebingen野生型斑马鱼的胚胎;采用FLASH反义mRNA探针做原位杂交并观察其表达。结果:观察到Tuebingen组中3. 7、9～24 hpf的神经外侧板、头部和脊索及18～30 hpf的原肾管可见黑色的阳性杂交信号,36 hpf后未见; 18～72 hpf的空白对照组与实验对照组间FLASH表达水平无差异,实验组18～30 hpf神经系统、造血系统FLASH的表达下调。结论:FLASH基因可能是Hox B4基因的下游靶基因。 展开更多

关键词 斑马鱼 HoxB4基因 FLASH基因 转基因 原位杂交

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Irx5a基因过表达对斑马鱼胚胎早期造血的影响

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作者 金璐 李燕 +4 位作者 李志操 吴西军 周艳华 何志旭 舒莉萍 《实验动物与比较医学》 CAS 2017年第4期309-314,共6页

目的探讨易洛魁族同源盒5a(Irx5a)基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFPmRNA斑马鱼胚胎作为实验组、显微注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA斑马鱼胚胎作为实验对照组、... 目的探讨易洛魁族同源盒5a(Irx5a)基因对斑马鱼胚胎早期造血相关转录调控因子的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期,显微注射Irx5a-EGFPmRNA斑马鱼胚胎作为实验组、显微注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)mRNA斑马鱼胚胎作为实验对照组、野生型斑马鱼作为空白对照组,应用qPCR检测相关造血转录调控因子在斑马鱼胚胎受精后9 h(9 hpf)、12 h、18 h、24 h和30 h时相的表达水平。结果实时荧光定量PCR结果表明,在原始造血转录因子1mo2、scl中,实验组从9hpf^24hpf较另外两组间明显减低;在定向造血转录因子中,c-myb实验组从12 hpf^24 hpf较另外两组间明显减低,runxl实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低;髓系造血转录因子pu.1和红系造血转录调控因子gata-1实验组从9 hpf^30 hpf较另外两组间明显减低,且差异有统计学意义。结论 Irx5a基因在斑马鱼原始造血、成体造血、红系造血、髓系造血的重要转录调控因子中发挥着抑制作用。 展开更多

关键词 斑马鱼 5a(Irx5a) 造血转录调控因子

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Irx5a在野生型斑马鱼早期发育中的表达

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作者 舒莉萍 何志旭 +1 位作者 许威 丁可军 《贵阳医学院学报》 CAS 2016年第7期755-759,共5页

目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Ir... 目的:观测Irx5a基因在Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法:利用Trizol法提取斑马鱼胚胎的总RNA,应用RT-PCR方法扩增Irx5a基因,将其克隆入pCS^(2+)质粒中,经菌落PCR、双酶切法及DNA测序鉴定正确后,利用体外转录体系制备Irx5a的反义mRNA探针;用该反义mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交。结果:构建和鉴定了Irx5a-pCS^(2+)重组质粒,经斑马鱼全胚胎原位杂交检测Irx5a基因的表达,发现从3.7 hpf开始有表达,并且在胚胎神经系统和造血系统都有明显表达。结论:Irx5a基因可能参与了Tuebingen野生型斑马鱼胚胎发育早期的神经系统和造血系统的发育。 展开更多

关键词 Irx5a pCS^2+质粒 DNA 重组 RNA探针 全胚胎原位杂交技术

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多层螺旋CT对急性阑尾炎及其并发症的诊断价值 被引量：35

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作者 杨家辉 毛巨江 +2 位作者 崔冬冰 熊光静 黄富豪 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第11期1349-1352,共4页

目的:探讨多层螺旋CT(MSCT)对急性阑尾炎及其并发症的诊断价值。方法:收集75例术后病理证实为急性阑尾炎患者的术前MSCT平扫联合重建[包括多平面重建(MPR)、曲面重建(CPR)、最大密度投影(MIP)、容积再现技术(VRT)]联合CT增强的病例资料... 目的:探讨多层螺旋CT(MSCT)对急性阑尾炎及其并发症的诊断价值。方法:收集75例术后病理证实为急性阑尾炎患者的术前MSCT平扫联合重建[包括多平面重建(MPR)、曲面重建(CPR)、最大密度投影(MIP)、容积再现技术(VRT)]联合CT增强的病例资料,总结急性阑尾炎及并发症的CT表现,并与急性阑尾炎病理分型进行比较,记录MSCT平扫联合增强联合重建对急性阑尾炎的诊断符合率。结果:本组64排螺旋CT平扫联合重建(MPR、CPR、MIP、VR)联合增强技术对急性阑尾炎诊断符合率为80%,75例患者中,经MSCT联合重建联合CT增强诊断急性化脓性阑尾炎43例(57.3%)、坏疽性或穿孔型阑尾炎9例(12.0%)、急性单纯性阑尾炎8例(10.67%)、阑尾周围脓肿1例(1.3%);漏诊7例、误诊为盲肠肿瘤3例、误诊为脂膜炎3例、误诊为盆腔炎1例,诊断符合率81.3%、漏诊率9.3%、误诊率9.3%。结论:MSCT平扫联合重建联合增强技术对阑尾炎及其并发症具有一定的诊断价值。 展开更多

关键词 阑尾炎 急性 诊断 并发症 多层螺旋CT

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基于转录组学分析CD146在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞条件培养液状态下的EAhy.926细胞中的基因表达差异 被引量：1

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作者 王澜 王子素 +1 位作者 李培霆 曾家顺 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1093-1110,共18页

黑色素瘤细胞黏附分子CD146作为一种新的内皮细胞标志物,其表达与肿瘤、自身免疫性疾病的进展密切相关。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、慢性多关节炎症为特征表现的系统性自身免疫性疾病,滑膜血管翳作为RA的代... 黑色素瘤细胞黏附分子CD146作为一种新的内皮细胞标志物,其表达与肿瘤、自身免疫性疾病的进展密切相关。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性、慢性多关节炎症为特征表现的系统性自身免疫性疾病,滑膜血管翳作为RA的代表性病理产物在疾病的发生发展中起着重要作用。为了研究CD146分子在人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(human rheumatoid arthritis fibroblast like synovial cell,HFLS-RA)条件培养液状态下的人脐静脉内皮细胞株EAhy.926的基因表达差异及其影响机制,本研究通过慢病毒介导的RNA干扰技术抑制EAhy.926细胞中CD146的表达。培养并提取HFLS-RA上清液制备条件培养液。将转染后的EAhy.926细胞用HFLS-RA条件培养液培养24 h构建RA损伤模型,并对其进行转录组测序,筛选出差异表达基因(differentiallly expressed genes,DEGs),并通过GO、KEGG通路分析,探索CD146调控的DEGs主要参与的相关信号通路及生物学过程。结果显示,与对照组细胞相比,HFLS-RA条件培养液状态下CD146敲低的EAhy.926细胞有341个DEGs,其中上调基因有173个,下调基因有168个;GO、KEGG通路分析发现DEGs主要富集在Wnt信号通路、PPAR信号通路、TRP通道的炎症介质调节、脂肪细胞因子信号通路上,参与了细胞黏附、细胞运动、细胞定位、半胱氨酸生物合成过程等生物过程。本研究通过转录组学分析发现在HFLS-RA条件培养液状态下,CD146分子可能通过多条关键信号通路及多个基因影响EAhy.926。研究结果为探讨CD146分子在类风湿关节炎滑膜血管生成中的作用及机制的研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 转录组 CD146 类风湿关节炎 EAhy.926

原文传递

微小RNA-21与NSCLC放化疗抵抗的研究新进展 被引量：6

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作者 郑文 赵娟娟 +2 位作者 何志旭 陈超 徐林 《遵义医学院学报》 2017年第2期214-217,共4页

近年研究发现,微小RNA(microRNAs,miRNAs)家族成员miRNA-21与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的化疗、放疗抵抗及EGFR-TKI耐药密切相关,提示其可作为NSCLC放化疗的潜在新靶标。本文就其相关研究最新进展作一综述。

关键词 微小RNA-21 非小细胞肺癌 化疗 EGFR-TKI 放疗

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沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖及凋亡的影响

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作者 张艺 吴道秋 +4 位作者 汤弘婷 李梦醒 刘虹麟 陈忠良 李琴山 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2023年第24期3838-3844,共7页

背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉... 背景:研究报道敲低MKRN1可以抑制肿瘤细胞的生长,但MKRN1是否作为肿瘤相关蛋白在机体发挥作用还需进一步研究。由于siRNA介导的基因沉默是瞬时表达,持续时间短且常规慢病毒技术存在脱靶效应,利用四环素调控(Tet-on)慢病毒系统构建稳定沉默MKRN1基因的细胞系有着可逆的优势,且可规避上述缺点,对于深入研究MKRN1的生物学功能有重要的意义。目的:构建Tet-on慢病毒系统介导的MKRN1基因沉默载体,研究沉默MKRN1基因表达对人胚胎肾细胞HEK-293T增殖、凋亡的影响。方法:采用RNAi技术,针对MKRN1基因设计3条shRNA(命名为sh1,sh2,sh3),将3条shRNA序列连入四环素诱导表达载体pTripz中验证连入序列;通过三质粒系统转染HEK-293T细胞,并用含有1 mg/L强力霉素的完全培养基培养,进行慢病毒包装,收取48 h及72 h病毒液,将其浓缩后感染HEK-293T细胞,感染48 h后用荧光显微镜观察病毒感染效率。通过实时荧光定量PCR、Western blot检测MKRN1的敲减效率;Western blot检测四环素诱导表达系统是否构建成功;通过集落形成实验及Western blot检测沉默MKRN1表达后对HEK-293T细胞增殖、凋亡能力的影响。结果与结论:(1)设计的3条MKRN1-短发夹RNA(sh1、sh2、sh3),均成功连入Tet-on载体,且各组载体序列正确;通过慢病毒成功感染HEK-293T细胞;(2)实时荧光定量PCR及Western blot检测发现3条shRNA序列中1号序列敲低MKRN1水平明显降低(P<0.05),且沉默组不加入强力霉素诱导后目的基因的表达得到回复;(3)集落形成实验发现沉默MKRN1后HEK-293T细胞增殖能力下降(P<0.05);Western blot检测敲低MKRN1后,增殖细胞核抗原表达下调,细胞凋亡相关指标BAX表达增加,Bcl2表达下调,Bcl2/BAX的比值下调(P<0.001);(4)结论:采用Tet-on慢病毒载体系统构建了稳定沉默MKRN1的HEK-293T细胞株,且沉默MKRN1后能够抑制HEK-293T细胞的增殖,并促进其凋亡。通过构建稳定沉默MKRN1的HEK-293T� 展开更多

关键词 MKRN1基因 四环素诱导调控表达系统 基因表达调控 慢病毒

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气相色谱内标法测定松节中α-蒎烯的含量 被引量：3

9

作者 周孟 廖祥明 +4 位作者 王珊 杨雄 李勇军 巩仔鹏 张荣红 《中国民族民间医药》 2018年第6期10-14,共5页

目的:采用气相色谱法对不同来源的松节药材中α-蒎烯含量进行检测,为松节药材的质量控制提供依据。方法:使用ZB-5毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),程序升温,初始温度60℃,保持2 min,以20℃/min速率升温至160℃,再以120℃/min... 目的:采用气相色谱法对不同来源的松节药材中α-蒎烯含量进行检测,为松节药材的质量控制提供依据。方法:使用ZB-5毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm),程序升温,初始温度60℃,保持2 min,以20℃/min速率升温至160℃,再以120℃/min速率升温至260℃,保持2 min。进样口温度200℃,氢焰离子化检测器(FID)温度300℃,进样量1μL,分流比10∶1。用环己酮为内标物,按内标法以峰面积计算含量。结果:α-蒎烯在0.125~4 mg/m L浓度范围内线性关系良好(r=0.9996,n=6),平均加样回收率为103.8%(RSD=0.7%,n=9)。结论:该方法具有灵敏、简便、准确的特点,可对松节药材进行有效的质量控制。 展开更多

关键词 松节 Α-蒎烯 气相色谱法 含量测定

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基于静电纺织技术构建血液生物膜的初探及生物相容性评价 被引量：3

10

作者 孙宇 邹强 +6 位作者 李轩泽 吴展羽 杨龙 王建吉 刘琴 马敏先 叶川 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第6期901-905,共5页

背景:已有研究表明纤维蛋白原可作为组织工程支架材料,若将血液中的纤维蛋白原提纯再利用,可制作出无免疫原性、生物相容性良好的支架材料。目的:探索静电纺丝技术制备血液生物膜的方法,评价支架的生物相容性。方法:将新鲜猪血液经分离... 背景:已有研究表明纤维蛋白原可作为组织工程支架材料,若将血液中的纤维蛋白原提纯再利用,可制作出无免疫原性、生物相容性良好的支架材料。目的:探索静电纺丝技术制备血液生物膜的方法,评价支架的生物相容性。方法:将新鲜猪血液经分离、离心、纯化等步骤提纯出纤维蛋白原,分别经真空冷冻干燥机(A组)、低温喷雾干燥机(B组)、56℃烘箱干燥(C组)处理,采用静电纺织技术制作成纤维薄膜支架材料,检测3组支架材料的接触角,采用扫描电镜观察支架材料的三维结构。将3组电纺支架材料分别与骨髓间充质干细胞共培养,培养7 d后,扫描电镜观察细胞生长情况;培养1-4 d,Alamar Blue试剂盒检测B组支架材料表面细胞增殖。结果与结论:(1)扫描电镜显示,A组可见纤维结构,纤维粗细不均并有大量液滴状结构;B组可见排列有序的多层纤维结构,纤维直径、孔径大小接近一致,仅见少量液滴状结构;C组未见纤维结构,为大小不等的液滴状结构;(2)A-C组支架材料的接触角分别为(82±3)°、(67±5)°、(80±3)°,3组材料接触角都<90°,表明亲水性良好;(3)共培养7 d后,骨髓间充质干细胞均可黏附于3组支架材料上,其中B组材料表面的细胞分布较为均匀,细胞黏附生长于纤维表面,细胞核形态相对规则;A、C组可见少量细胞黏附生长于支架上,C组细胞量最少,细胞核形态不规则,两组均未见明显纤维结构;(4)Alamar Blue实验结果显示,随着培养时间的延长,B组支架材料表面的细胞呈增殖趋势,生长状态良好;(5)结果表明,采用静电纺织技术可制备出血液纤维蛋白原生物膜,其具有良好的生物相容性。 展开更多

关键词 纤维蛋白原 血液生物膜 静电纺织 细胞增殖趋势 血液纤维蛋白原生物膜 生物膜 血液 组织工程

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CIK细胞联合西妥昔单抗对结直肠癌细胞的杀伤效应 被引量：3

11

作者 孔娟 龙世棋 +3 位作者 王念雪 刘尧翠 王代琴 赵星 《贵州医科大学学报》 CAS 2017年第5期503-507,522,共6页

目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合西妥昔单抗对KRAS突变(DLD-1)及野生型(Caco-2)结直肠癌细胞的杀伤效应。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离正常外周血的单个核细胞(PBMC),在体外经抗-CD3单抗及多种细胞因子联合诱导生成CIK... 目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)联合西妥昔单抗对KRAS突变(DLD-1)及野生型(Caco-2)结直肠癌细胞的杀伤效应。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离正常外周血的单个核细胞(PBMC),在体外经抗-CD3单抗及多种细胞因子联合诱导生成CIK细胞;ELISA实验检测CIK细胞培养前后上清中干扰素-γ(IFN-γ)及转化生长因子-β(TGF-β)的水平,流式细胞检测DLD-1及Caco-2细胞表面表皮生长因子受体(EGFR)及CIK细胞表面分子的表达,采用实时无标记细胞分析仪(RTCA)检查CIK细胞联合西妥昔单抗对DLD-1及Caco-2细胞的杀伤作用。结果:DLD-1及Caco-2肿瘤细胞表面均高表达EGFR,培养前后CIK细胞亚群可见培养后CD8^+T、CD3^+CD56^+NKT及CD16^+CD56^+NK细胞比例均较培养前显著增高;与培养第一天比较,培养至第14天,CIK细胞培养基上清中细胞因子IFN-γ水平显著增高(P<0.01),而同时TGF-β的水平显著降低(P<0.01);RTCA检测发现CIK细胞联合西妥昔单抗对DLD-1及Caco-2杀伤作用明显高于单一的CIK细胞组。结论:CIK联合西妥昔单抗对EGFR受体阳性的野生型结直肠癌细胞与突变型结直肠癌细胞均有杀伤效果。 展开更多

关键词 结直肠癌 西妥昔单抗 细胞因子诱导的杀伤细胞 联合治疗

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间充质干细胞对肺动脉高压的治疗作用及其对肿瘤坏死因子α/活化T淋巴细胞核因子的影响 被引量：3

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作者 吴西军 刘俊峰 何志旭 《中华实用儿科临床杂志》 CSCD 北大核心 2017年第13期1018-1021,共4页

目的阐释肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/活化T淋巴细胞核因子（NFAT）通路是间充质干细胞（MSC）治疗肺动脉高压（PH）过程中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的主要作用途径。方法利用人脐带来源的MSC对野百合碱诱导的PH大鼠模型进行治疗。大鼠... 目的阐释肿瘤坏死因子-α（TNF-α）/活化T淋巴细胞核因子（NFAT）通路是间充质干细胞（MSC）治疗肺动脉高压（PH）过程中抑制肺动脉平滑肌细胞增殖的主要作用途径。方法利用人脐带来源的MSC对野百合碱诱导的PH大鼠模型进行治疗。大鼠分为对照组、PH模型组、MSC治疗组。观察大鼠一般情况，检测血流动力学，采用病理切片、免疫组织化学染色等方法检测肺组织结构改变情况，同时检测TNF-α/NFAT的变化情况。结果与PH模型组大鼠比较，MSC治疗组一般情况明显趋于正常，右心室收缩压（RVSP）下降[（30.37±3.13） mmHg比（47.90±3.45） mmHg，1 mmHg＝0.133 kPa]，主动脉压（MAoP）上升[（115.03±16.01） mmHg比（92.78±16.28） mmHg]，动脉中膜增厚情况明显减轻[（17.22±1.21）%比（31.68±2.26）%]，血浆TNF-α水平明显降低[（842±76） ng/L比（245±24） ng/L]，肺组织TNF-α水平降低（0.172±0.024比0.248±0.051），差异均有统计学意义（均P〈0.05）。MSC治疗组肺动脉NFATc2的活化明显受抑制。结论MSC治疗PH是通过TNF-α/NFAT通路抑制炎症相关的肺动脉血管平滑肌细胞过度增殖，从而发挥治疗作用。 展开更多

关键词 间充质干细胞 肺动脉高压 肿瘤坏死因子 活化T淋巴细胞核因子

原文传递

呼肠孤病毒在肿瘤治疗研究进展 被引量：2

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作者 何志旭 赵星 《中国小儿血液与肿瘤杂志》 CAS 2017年第1期3-6,共4页

在过去的几十年间,溶瘤病毒（oncolytic virus,OV）在肿瘤治疗中已取得了很多突破性进展。野生型或经改造的OV可通过在肿瘤细胞内大量复制增殖来溶破肿瘤细胞,而对正常细胞无破坏作用。野生型呼肠孤病毒（reovirus）可选择性在肿瘤细胞... 在过去的几十年间,溶瘤病毒（oncolytic virus,OV）在肿瘤治疗中已取得了很多突破性进展。野生型或经改造的OV可通过在肿瘤细胞内大量复制增殖来溶破肿瘤细胞,而对正常细胞无破坏作用。野生型呼肠孤病毒（reovirus）可选择性在肿瘤细胞内增殖,已证实其对多种来源的肿瘤细胞均可发挥溶瘤效应。 展开更多

关键词 呼肠孤病毒 治疗应用 溶瘤病毒 REOVIRUS 野生型 临床试验 细胞生长 病毒基因组 破坏作用 应用领域

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汉防己甲素衍生物HL-27对BLM解旋酶生物学特性的影响

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作者 张望明 葛章文 +3 位作者 晏文涛 潘卫东 焦彦朝 刘杰麟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期934-939,共6页

目的研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶生物学特性的影响。方法利用荧光偏振技术研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶DNA结合活性、解链活性的影响;利用孔雀绿-磷钼酸铵比色法研究汉防己甲素衍生物HL-27对B... 目的研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶生物学特性的影响。方法利用荧光偏振技术研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶DNA结合活性、解链活性的影响;利用孔雀绿-磷钼酸铵比色法研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶ATPase活性的影响;利用紫外吸收光谱法研究汉防己甲素衍生物HL-27对BLM^(642-1290)解旋酶构象的影响。结果当HL-27浓度达到33.34μmol·L^(-1)时,其对dsDNA或ssDNA与BLM^(642-1290)解旋酶结合活性的抑制率分别为41.35%、59.54%;当HL-27浓度达到50 μmol·L^(-1)时,其对BLM^(642-1290)解旋酶解链活性的抑制率为78.68%;当HL-27的浓度为100μmol·L^(-1)时,其对BLM^(642-1290)解旋酶ATPase活性的抑制率为43.8%。结论汉防己甲素衍生物HL-27可以抑制BLM^(642-1290)解旋酶的DNA结合活性、解链活性与ATPase活性。 展开更多

关键词 BLM642-1290解旋酶 HL-27 荧光偏振 结合活性 解链活性 ATPASE活性

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抗冻保护剂中蔗糖浓度决定卵母细胞脱除抗冻保护剂的方法 被引量：1

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作者 周艳华 范安然 黄文竹 《赤峰学院学报（自然科学版）》 2017年第19期81-82,共2页

本研究实验一采用三种添加不同浓度蔗糖的预处理液(S1,S2,S3)分别处理小鼠卵母细胞20mim,以PBS溶液或0.5mol/L蔗糖溶液脱除抗冻保护剂,统计卵母细胞的存活率.S1液为含10%v/v的PBS溶液;S2液在S1液的基础上蔗糖浓度添加至0.034mol/L;S3液... 本研究实验一采用三种添加不同浓度蔗糖的预处理液(S1,S2,S3)分别处理小鼠卵母细胞20mim,以PBS溶液或0.5mol/L蔗糖溶液脱除抗冻保护剂,统计卵母细胞的存活率.S1液为含10%v/v的PBS溶液;S2液在S1液的基础上蔗糖浓度添加至0.034mol/L;S3液在S1液的基础上蔗糖浓度添加至0.38mol/L.结果显示:以PBS液直接脱除抗冻保护剂,S1,S2,S3组卵母细胞的存活率分别为0,20%,54%.以0.5mol/L的蔗糖溶液脱除抗冻保护剂,S1,S2,S3组卵母细胞存活率分别为43%,50%,75%.实验二所有卵母细胞以S1液预处理3min,然后分别以ES1,ES2,ES3液处理30s,采用PBS,0.25mol/L或0.5mol/L蔗糖溶液脱除抗冻保护剂.ES1液为40%v/v的EG溶液中添加了0.3mol/L的蔗糖;ES2液的蔗糖浓度为0.5mol/L;ES3液的蔗糖浓度为0.8mol/L.结果显示,随着蔗糖浓度的提高,卵母细胞以PBS脱除抗冻保护剂的存活率显著提高(ES3组57%vs ES1组3%).该研究表明,预处理液或玻璃化液中添加蔗糖,均能影响卵母细胞脱除抗冻保护剂的方法.结论 ,在卵母细胞冷冻实验中,应根据冷冻液的成分设计相应的抗冻保护剂脱除方法. 展开更多

关键词 卵母细胞 抗冻保护剂 蔗糖浓度 抗冻保护剂脱除

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三种干细胞向雌性生殖细胞诱导的可行性探讨 被引量：1

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作者 周桦 何志旭 +3 位作者 范安然 周从容 赵淑云 黄官友 《生殖与避孕》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期800-805,820,共7页

雌性生殖细胞缺乏所致的不孕症目前尚无根本的治疗方法,干细胞的研究为这类患者带来了希望。随着胚胎干细胞(ESCs)/诱导性多能干细胞(iPSCs)建系技术的日趋成熟,体外诱导ESCs/iPSCs生成雌性生殖细胞的研究也取得了一定进展,目前已经有... 雌性生殖细胞缺乏所致的不孕症目前尚无根本的治疗方法,干细胞的研究为这类患者带来了希望。随着胚胎干细胞(ESCs)/诱导性多能干细胞(iPSCs)建系技术的日趋成熟,体外诱导ESCs/iPSCs生成雌性生殖细胞的研究也取得了一定进展,目前已经有卵母细胞样细胞的形成,但所生成细胞的生殖生物学功能还有待进一步证实。近年来雌性生殖干细胞的发现及对其进一步的了解使获取更接近生理状态的卵子成为可能。本文对近年几种干细胞及其在生殖领域的研究进行综述,以探讨其临床应用的可行性。 展开更多

关键词 雌性生殖细胞 胚胎干细胞(ESCs) 诱导性多能干细胞(iPSCs) 雌性生殖干细胞 分化

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N-苯基苯甲酰胺衍生物的设计合成及抗HIV-1活性研究

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作者 周盂 廖祥明 +3 位作者 蔺良才 张荣红 李锐 徐国波 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期1248-1254,共7页

目的设计合成HIV-1病毒感染因子(Vif)抑制剂RN-18的衍生物并测试其抗HIV-1活性。方法以RN-18为先导化合物,针对其两个支链及中间苯环设计合成衍生物,以p24含量来检测化合物抑制HIV-1的增殖活性,最后通过MTT法评价抗病毒效果较好化合物... 目的设计合成HIV-1病毒感染因子(Vif)抑制剂RN-18的衍生物并测试其抗HIV-1活性。方法以RN-18为先导化合物,针对其两个支链及中间苯环设计合成衍生物,以p24含量来检测化合物抑制HIV-1的增殖活性,最后通过MTT法评价抗病毒效果较好化合物的细胞毒性。结果共合成得到28个RN-18衍生物,结构经MS、NMR表征。活性测试表明,7个化合物抗HIV-1活性较RN-18更为显著,其中化合物26的活性提升了11倍以上,EC50值达到了21.8μmol·L^(-1)。结论将RN-18的苯环替换为杂环可普遍提高抗HIV-1活性,为该类化合物的进一步优化指明了方向。 展开更多

关键词 N-苯甲酰胺衍生物 病毒感染因子 抗艾滋病毒活性 抑制剂 构效关系

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高表达hoxb4转基因斑马鱼胚胎定向造血阶段cdh5-mRNA的表达

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作者 吴西军 姚冬静 +5 位作者 刘庆 杨小燕 王念雪 王一慧 舒莉萍 何志旭 《贵州医科大学学报》 CAS 2019年第11期1247-1253,共7页

目的:探讨高表达hoxb 4转基因系斑马鱼胚胎定向造血发育中cdh 5-mRNA的表达。方法:实验分为野生型(WT)对照组、增强绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎,收取定向造血阶段32、36、40、44、48 hpf的胚胎各30枚;将pCS... 目的:探讨高表达hoxb 4转基因系斑马鱼胚胎定向造血发育中cdh 5-mRNA的表达。方法:实验分为野生型(WT)对照组、增强绿色荧光蛋白(EGFP)对照组及高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎,收取定向造血阶段32、36、40、44、48 hpf的胚胎各30枚;将pCS^2+-cdh 5重组质粒进行单酶切,用T3 RNA体外转录体系转录得到地高辛标记的cdh 5基因的反义mRNA片段,以其为探针对各组胚胎进行全胚胎原位杂交,显微镜下观察32、36、40、44、48 hpf的造血组织区域cdh 5-mRNA杂交信号并拍照记录灰度值。结果:32、36 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织AGM区、PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05),EGFP对照组与WT对照组差异无统计学意义(P>0.05);40、44 hpf时高表达hoxb 4实验组斑马鱼胚胎造血组织PBI区cdh 5-mRNA的表达较EGFP对照组及WT对照组增高,差异均有统计学意义(P<0.05),EGFP对照组与WT对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);48 hpf时3组斑马鱼胚胎在造血组织区域均未见cdh 5-mRNA杂交信号。结论:在高表达hoxb 4转基因斑马鱼胚胎中,cdh 5-mRNA在定向造血阶段相应造血区域高表达。 展开更多

关键词 基因表达 原位杂交 胚胎 造血 发育 调控

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敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株的构建

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作者 黄晏军 郑艺 +2 位作者 汤长宁 刘金河 刘杰麟 《贵州医科大学学报》 CAS 2018年第5期503-507,共5页

目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sg... 目的:应用规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR/Cas9)技术构建敲除BLM基因的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株。方法:根据CRISPR/Cas9技术靶点设计原则,在BLM基因的3号外显子设计2条靶向小向导RNA(sgRNA),利用PX459 V2质粒载体,构建PX459 V2-sgRNA重组质粒;将建构成功的重组质粒转染至MDA-MB-231细胞中,通过嘌呤霉素筛选获得阳性克隆,使用Cruiser^(TM)核酸内切酶检测打靶效率,将打靶效率较高的阳性克隆进行单克隆培养,再利用免疫印迹法检测筛选出敲除BLM基因的MDA-MB-231乳腺癌细胞株。结果:测序结果表明重组质粒构建成功,免疫印迹法显示敲除BLM基因后的MDA-MB-231细胞中BLM蛋白明显降低,与空白对照组相比,BLM-KO组BLM表达水平明显低于对照组。结论:应用CRISPR/Cas9技术成功构建了BLM基因敲除的MDA-MB-231细胞株。 展开更多

关键词 规律成簇间隔短回文重复序列系统 基因敲除 BLM基因 MDA-MB-231细胞 乳腺癌

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