目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株...目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株LX-2,24 h后采用低(0.25 g/L)和高(1 g/L)剂量氧化苦参碱干预培养24 h;采用全自动生化分析仪检测染砷LO2细胞培养上清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;ELISA检测染砷LO2细胞培养上清中转化生长因子β1(TGF-β1)水平;MTT法检测LX-2细胞活力;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平变化;油红O染色光镜下观察LX-2细胞中脂滴。结果:(1)染砷LO2细胞培养上清AST和ALT水平显著增加( P <0.05),此上清加入LX-2细胞培养基中可明显增强LX-2细胞活力( P <0.05),与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞内脂滴数量显著减少,且LX-2活化标志蛋白α-SMA表达水平显著上调( P <0.05);(2)与染砷LO2细胞培养上清共孵育可上调LX-2细胞Atg12、Atg5和LC3Ⅱ蛋白表达,较对照组差异具有显著性( P <0.05);(3)低、高剂量氧化苦参碱干预可抑制与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞的活力( P <0.05),且使LX-2细胞α-SMA、Atg12、Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下调( P <0.05),高剂量氧化苦参碱干预的LX-2细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达水平降低较低剂量氧化苦参碱干预更为显著( P <0.05);(4)低、高剂量氧化苦参碱干预后LX-2细胞内脂滴数量较染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞均显著增多。结论:砷致肝纤维化过程中间接活化HSC与砷损伤肝细胞有关,细胞自噬参与这一过程,且HSC可能通过促进其内脂滴降解而促进自身的活化。氧化苦参碱可通过抑制细胞自噬,减少HSC活化实现其减轻肝纤维化�展开更多
文摘目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤的作用及其可能机制。方法:利用ICA干预棕榈酸(palmitic acid,PA)培养的大鼠肾小管上皮NRK52E细胞,实验分组为对照组、PA组、PA+ICA组及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)抑制剂(AMPK inhibitor,AMPKi)处理的PA+ICA+AMPKi组。采用Western blot检测上皮型钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2和cleaved caspase-3)、线粒体融合蛋白1(mitochondrial fusion protein 1,MFN1)、发动蛋白相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a caspase recruitment domain,ASC)、caspase-1、AMPK和p-AMPK的蛋白水平;应用流式细胞术检测细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平;MitoTracker染色观察线粒体形态,JC-1染色观察细胞内线粒体膜电位的变化情况。结果:ICA的最佳作用浓度为5μmol/L。与对照组比较,PA组的E-cadherin、Bcl-2、MFN1和p-AMPK蛋白水平显著降低(P<0.05),α-SMA、Bax、Drp1、NLRP3、ASC、cleaved caspase-3和caspase-1的蛋白水平显著升高(P<0.05)。经ICA干预后,除AMPK的变化无统计学显著性外,PA+ICA组上述指标的变化趋势均与PA组相反,且ICA干预可增加细胞内线粒体棒状结构,升高线粒体膜电位,减少ROS的产生。加入AMPK抑制剂dorsomorphin后,与PA+ICA组比较,E-cadherin蛋白水平显著降低,α-SMA、MFN1、Drp1、NLRP3、ASC和caspase-1蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论:ICA可延缓脂肪酸所致肾小管上皮细胞间质纤维化的发生发展,其机制可能与激活AMPK、维持线粒体融合-分裂稳态及抑制ROS生成、炎症反应和细胞凋亡有关。
文摘目的:探讨氧化苦参碱干预砷致肝星状细胞(HSC)活化过程中细胞自噬的变化。方法:本实验使用100 μmol/L亚砷酸钠作用于人胎肝细胞株LO2 24 h,收取培养上清。将染砷LO2细胞培养上清与正常培养液按照1 ∶ 4比例混合,用于培养人肝星状细胞株LX-2,24 h后采用低(0.25 g/L)和高(1 g/L)剂量氧化苦参碱干预培养24 h;采用全自动生化分析仪检测染砷LO2细胞培养上清中天冬氨酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平;ELISA检测染砷LO2细胞培养上清中转化生长因子β1(TGF-β1)水平;MTT法检测LX-2细胞活力;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、自噬相关基因12(Atg12)、自噬相关基因5(Atg5)和微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)蛋白表达水平变化;油红O染色光镜下观察LX-2细胞中脂滴。结果:(1)染砷LO2细胞培养上清AST和ALT水平显著增加( P <0.05),此上清加入LX-2细胞培养基中可明显增强LX-2细胞活力( P <0.05),与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞内脂滴数量显著减少,且LX-2活化标志蛋白α-SMA表达水平显著上调( P <0.05);(2)与染砷LO2细胞培养上清共孵育可上调LX-2细胞Atg12、Atg5和LC3Ⅱ蛋白表达,较对照组差异具有显著性( P <0.05);(3)低、高剂量氧化苦参碱干预可抑制与染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞的活力( P <0.05),且使LX-2细胞α-SMA、Atg12、Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达水平显著下调( P <0.05),高剂量氧化苦参碱干预的LX-2细胞自噬标志蛋白LC3-Ⅱ表达水平降低较低剂量氧化苦参碱干预更为显著( P <0.05);(4)低、高剂量氧化苦参碱干预后LX-2细胞内脂滴数量较染砷LO2细胞培养上清共孵育的LX-2细胞均显著增多。结论:砷致肝纤维化过程中间接活化HSC与砷损伤肝细胞有关,细胞自噬参与这一过程,且HSC可能通过促进其内脂滴降解而促进自身的活化。氧化苦参碱可通过抑制细胞自噬,减少HSC活化实现其减轻肝纤维化�
