贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂抗药性调查 被引量：3

1

作者 梁秋果 王政艳 +2 位作者 杨茜 程金芝 吴家红 《中华地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期476-480,共5页

目的了解贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性水平。方法2015年8 - 9月,用幼虫勺捕法采集贵阳市8个地区的野外致倦库蚊幼虫,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。... 目的了解贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性水平。方法2015年8 - 9月,用幼虫勺捕法采集贵阳市8个地区的野外致倦库蚊幼虫,在实验室饲养至成蚊。采用接触筒法测定成蚊对4种常用杀虫剂的抗药性,计算1 h击倒率和恢复24 h死亡率。根据死亡率判断抗药性水平:< 90%为抗性群体(R);90%~< 98%为可能抗性群体(M);≥98%为敏感群体(S)。结果将致倦库蚊成蚊分别暴露于7.70 g/L敌敌畏、3.30 g/L残杀威、0.25 g/L高效氯氰菊酯和0.20 g/L溴氰菊酯,1 h击倒率范围分别为57.78%(52/90)~91.11%(82/90)、86.67%(78/90)~100.00%(90/90)、23.33%(21/90)~77.78%(70/90)和27.78%(25/90)~88.89%(80/90);恢复24 h死亡率范围分别为61.11%(55/90)~94.44%(85/90)、90.00%(81/90)~97.78%(88/90)、23.33%(21/90)~73.33%(66/90)和21.11%(19/90)~72.22%(65/90)。结论贵阳市致倦库蚊成蚊对4种常用杀虫剂均产生了一定程度的抗药性,其中对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯等拟除虫菊酯类杀虫剂的抗药性较高。 展开更多

关键词 库蚊属 杀虫药抗药性 敌敌畏 除虫菊酯类

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栀子抗呼吸道合胞病毒作用及基于网络药理学和分子对接的机制研究

2

作者 侯长周 张建锋 +3 位作者 安海 杨德函 侯晓杰 张科 《药物评价研究》 CAS 北大核心 2024年第9期1985-1994,共10页

目的研究栀子抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用并预测其机制。方法通过细胞毒性实验、细胞病变效应(CPE)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验,探索栀子提取物对RSV的抑制作用;在中药系统药理学分析平台(TCMSP)中搜索栀子的活性成分并预测其靶点,在... 目的研究栀子抗呼吸道合胞病毒(RSV)作用并预测其机制。方法通过细胞毒性实验、细胞病变效应(CPE)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)实验,探索栀子提取物对RSV的抑制作用;在中药系统药理学分析平台(TCMSP)中搜索栀子的活性成分并预测其靶点,在GeneCards、OMIM、Disgen数据库中获取RSV相关靶点,获取药物-病毒交集基因后构建关键蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并用分子对接进行验证;交集基因通过DAVID数据库进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,预测其作用机制。结果栀子提取物半数细胞毒性浓度(TC_(50))为4.621 mg·mL^(-1),质量浓度为3.5438、1.7719、0.8860 mg·mL^(-1)时有显著抗RSV作用,且随质量浓度增加,抗RSV作用越强。网络药理学共筛选到栀子有效化合物10个[口服生物利用度(OB)≥30%,类药性(DL)>0.18],可视化结果显示有118个节点,主要靶点有蛋白激酶Bα(AKT1)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、表皮生长因子(EGFR)等;GO结果显示主要与蛋白激酶B信号的正向调节、蛋白质磷酸化等生物过程(BP);质膜、大分子复合物等细胞组成(CC);ATP结合、酶结合、蛋白激酶活性等分子功能(MF)有关。KEGG通路富集到117条信号通路(FDR<0.01),主要与肿瘤中程序性死亡分子1配体(PD-L1)的表达和程序性死亡分子1(PD-1)检查点通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K-Akt)、C型凝集素受体(CLRs)等信号通路有关。结论栀子提取物有显著抗RSV作用,可能主要以豆甾醇、吡嗪环辛烯-4a-羧酸、β-谷甾醇、藏红花酸等成分与EGFR、SRC、丝裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)等靶点相结合,通过PD-L1表达和PD-1、PI3K-Akt、CLRs通路等信号通路发挥抗呼吸道合胞病毒作用。 展开更多

关键词 栀子 呼吸道合胞病毒 网络药理学 分子对接 豆甾醇 Β-谷甾醇

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微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织病理学观察及MUC2表达的分析

3

作者 王鸿雁 李小毛 +2 位作者 崔轩胤 张科 牟荣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第9期109-113,121,122,共7页

为了解微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织的病理学特征及黏蛋白2(MUC2蛋白)的表达情况,试验从贵阳市宠物市场随机选取60只宠物仓鼠,采用饱和盐水浮聚法检测仓鼠粪便中的虫卵并进行鉴定,根据仓鼠感染微小膜壳绦虫的情况将仓鼠分为未感染组、... 为了解微小膜壳绦虫感染仓鼠小肠组织的病理学特征及黏蛋白2(MUC2蛋白)的表达情况,试验从贵阳市宠物市场随机选取60只宠物仓鼠,采用饱和盐水浮聚法检测仓鼠粪便中的虫卵并进行鉴定,根据仓鼠感染微小膜壳绦虫的情况将仓鼠分为未感染组、无症状感染组、普通型感染组和重型感染组,解剖所有仓鼠获取肠道内寄生虫及小肠组织,制备小肠组织切片并进行苏木精-伊红(H.E.)染色、阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色及免疫组织化学染色,通过实时荧光定量PCR(qPCR)扩增分析仓鼠小肠MUC2基因相对表达情况。结果表明:微小膜壳绦虫在宠物仓鼠中的感染率为74.5%,其感染可引起仓鼠小肠绒毛损伤、上皮细胞变性坏死、杯状细胞异常、白细胞浸润等病理改变;与未感染组相比,无症状组杯状细胞数量及MUC2基因相对表达量差异不显著(P>0.05),普通型感染组的杯状细胞数量极显著增加(P<0.01),重型感染组的杯状细胞极显著减少(P<0.01),同时重型感染组的MUC2基因及MUC2蛋白表达水平极显著增高(P<0.01)。说明微小膜壳绦虫感染会导致仓鼠小肠绒毛结构破坏,杯状细胞数量及形态异常,并引起杯状细胞分泌MUC2蛋白增多,且重型感染组杯状细胞数量减少,但其分泌的MUC2蛋白量增加。 展开更多

关键词 仓鼠 微小膜壳绦虫 小肠 病理学特征 黏蛋白2

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微小膜壳绦虫对ICR小鼠肠道菌群的影响

4

作者 李小毛 赵敬 +2 位作者 王鸿雁 张科 牟荣 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第17期8-12,108-110,共8页

为了探究微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)对ICR小鼠肠道菌群的影响,试验采用随机分组方式将30只ICR小鼠分为感染组和对照组,每组15只,感染组灌胃感染0.2 mL鉴定和纯化后的微小膜壳绦虫虫卵配制成的虫卵悬浊液(浓度为2500个/mL),对照组... 为了探究微小膜壳绦虫(Hymenolepis nana)对ICR小鼠肠道菌群的影响,试验采用随机分组方式将30只ICR小鼠分为感染组和对照组,每组15只,感染组灌胃感染0.2 mL鉴定和纯化后的微小膜壳绦虫虫卵配制成的虫卵悬浊液(浓度为2500个/mL),对照组灌胃等量生理盐水,并于感染后第2,4,6,8,10天采集空肠内容物,采用16S rDNA扩增子测序分析技术检测16S rDNA扩增产物,所得的数据使用多组间方差分析进行两两比较,对肠道菌群的种类、分布和丰度状况进行研究。结果表明:菌群种类繁多,以厚壁菌门(占比为64%)、拟杆菌门(占比为25%)为主,其次是变形菌门(占比为6%)和放线菌门(占比为3%)。感染微小膜壳绦虫后第4,6,8,10天肠道菌群α多样性Sobs值呈现先下降再上升的趋势,第8天显著低于第4,6,10天(P<0.05);感染组与对照组组间谱系多样性指数差异不显著(P>0.05);与对照组相比,感染组相对丰度上调的菌群主要从属厚壁菌门,有紫单胞菌科、毛螺菌科和乳杆菌科;下调的菌群种类较多,主要从属厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门。与对照组相比,感染后第10天感染组小鼠肠道乳杆菌属的相对丰度升高最明显;葡萄球菌属、咸海鲜球菌属和棒杆菌属的相对丰度降低。说明微小膜壳绦虫感染会导致宿主肠道菌群失调,其中乳杆菌属的相对丰度变化最明显。 展开更多

关键词 微小膜壳绦虫 ICR小鼠 肠道菌群 菌群失调 乳杆菌属

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MAPK通路主要激酶抑制剂对亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞生长抑制率和凋亡率的影响 被引量：3

5

作者 门万琪 杨汉蕾 +3 位作者 张科 杨林 许士刚 牟荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期797-804,共8页

目的了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制... 目的了解MAPK特异性抑制剂干预后亚洲带绦虫感染乳猪肝细胞MAPK信号通路相关基因表达、细胞活力和细胞凋亡的变化。方法采集亚洲带绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将乳猪随机分为感染组、三种抑制剂干预组和正常对照组,感染组和抑制剂干预组均以定量虫卵15万个/头灌胃感染,灌胃后将抑制剂干预组乳猪分别腹腔注射U0126、SB203580和SP600125 1 mg/kg,隔天1次,连续7次。感染后第15 d麻醉处死各组乳猪获取肝脏。采用cck-8法和流式细胞仪分别检测肝细胞生长抑制率和肝细胞凋亡率,并用RT-PCR技术检测肝细胞ERK1、p38和JNK1基因mRNA的相对表达量。结果感染组和U0126、SB203580、SP600125干预组肝细胞生长抑制率分别为(23.1±1.26)%、(12.59±1.2)%、(16.48±0.7)%、(18.3±0.75)%,U0126组与感染组相比(t=9.223,P<0.05)、SB203580组与感染组相比为(t=11.532,P<0.05)、SP600125组与感染组相比(t=6.775,P<0.05),各干预组均较感染组的生长抑制率明显降低。与感染组相比,U0126干预组的肝细胞凋亡率与感染组相比增高(t=-5.934,P<0.001),SB203580干预组与感染组相比则降低(t=3.821,P<0.01),SP600125干预组与感染组相比(t=-1.545,P>0.05)无显著性差异。与感染组相比,U0126干预组(t=3.462,P<0.05)ERK1 mRNA表达量下调;SB203580干预组(t=3.267,P<0.05)p38 mRNA表达量下调;SP600125干预组(t=3.363,P<0.001)JNK1 mRNA的表达量下调。结论亚洲带绦虫感染乳猪后,MAPK特异性抑制剂可以通过影响乳猪肝细胞MAPK相关基因的mRNA水平减轻肝细胞的生长抑制和凋亡。 展开更多

关键词 亚洲带绦虫 乳猪 肝脏 丝裂原活化蛋白激酶 MAPK抑制剂

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微小膜壳绦虫感染ICR小鼠后的虫体生长发育情况和小肠组织的病理变化 被引量：2

6

作者 杨汉蕾 赵敬 +4 位作者 张科 鄢宇航 门万琪 皮焕婷 牟荣 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期249-255,262,共8页

目的观察微小膜壳绦虫(H.nana)在小鼠肠内的生长发育情况和小鼠小肠组织的病理变化。方法将H.nana虫卵分别以60、100、300、500、1000个的感染量经口灌胃的方式感染140只ICR小鼠(5个实验组,每组28只),同期28只对照组小鼠以生理盐水灌胃... 目的观察微小膜壳绦虫(H.nana)在小鼠肠内的生长发育情况和小鼠小肠组织的病理变化。方法将H.nana虫卵分别以60、100、300、500、1000个的感染量经口灌胃的方式感染140只ICR小鼠(5个实验组,每组28只),同期28只对照组小鼠以生理盐水灌胃,观察各组小鼠一般状况、体质量、每克粪便虫卵数(EPG);在感染后第5、10、15、20、25天每组随机麻醉处死5只小鼠,观测各组小鼠小肠组织病理学特征。结果各实验组小鼠感染后第3天出现精神萎靡、食量下降、活动减少、皮毛色泽变暗、毛发蓬乱等症状,症状随虫卵感染量加重;感染量为60、100和300个虫卵的实验组小鼠体质量与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与对照组比较,感染量为500个虫卵的实验组小鼠体质量在感染后第2天明显减轻(P<0.05),感染量为1000个虫卵的实验组小鼠体质量在感染后第2天和第7天也明显减轻(P<0.05);但感染量为500个虫卵的实验组检出虫卵时间最早,排卵持续时间最长(P<0.05),可作为H.nana感染ICR小鼠动物模型建立的参考感染量;各实验组小鼠感染后第5天未检获虫体,感染后第10天感染60个虫卵的实验组小鼠成虫检获率60%,其他实验组小鼠虫体检获率100%,虫体主要分布于距离回盲部6~12 cm处的小肠内,感染后第15、20、25天实验组小鼠虫体检获率均100%,虫体主要分布于距离回盲部1~8 cm处的小肠内;实验组肠组织病理变化与对照组相比,感染后第5天~第25天未观察到损伤修复肉芽肿组织,但H.nana寄生部位可见炎症细胞增多,特别是嗜酸性粒细胞明显增多。结论H.nana感染ICR小鼠动物模型中,500个虫卵感染量最为稳定,H.nana在小鼠体内从幼虫到成虫的发育是从肠壁逐渐向肠腔迁移的过程,可引起寄生部位肠组织炎症细胞的增多。 展开更多

关键词 微小膜壳绦虫 小鼠 近交ICR 小肠 模型 动物 生长发育 组织病理学

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白纹伊蚊唾液蛋白Alb-AG5-3的基因特征分析及真核表达

7

作者 高敏 吴家红 +10 位作者 程金芝 张霞 牟小会 聂映 彭哲慧 李志强 赵久刚 商正玲 刘磊 蓝静 刘红美 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第9期1039-1046,共8页

目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY82610... 目的 初探白纹伊蚊唾液蛋白Antigen5-3(Alb-AG5-3)的结构与功能特征,并采用果蝇S2真核表达体系表达Alb-AG5-3。方法 采取同源比对的方式,从NCBI数据库中钓取Antigen5-3序列,根据白纹伊蚊分泌蛋白Antigen5-3基因参考序列(GenBank:AY826105.1)设计特异性引物,从白纹伊蚊安顺株中扩增基因全长。经序列比对后利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(Expasy)以及生物信息学在线软件SignalP、TMHMM、SOPMA、SWISS-MODEL、AlphaFold等对该蛋白进行生物信息学分析。Trizol法提取白纹伊蚊雌蚊与雄蚊整蚊以及吸血前后雌蚊唾液腺RNA,qRT-PCR检测Alb-AG5-3在RNA相对表达量;以白纹伊蚊整蚊cDNA为模板,特异性扩增除信号肽外的Alb-AG5-3编码区,PCR产物经切胶回收纯化后与昆虫真核表达载体pMT/BiP/V5连接,构建真核重组质粒pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3。随后转入果蝇S2细胞中,500μmol/L CuSO4诱导重组蛋白Alb-AG5-3的表达。收集上清,采用Western blot鉴定V5表达标签,镍柱亲和层析纯化重组蛋白Alb-AG5-3。结果 生物信息学分析该基因CDS(Coding sequence)区扩增全长为768 bp,编码255个氨基酸,二、三级结构预测以无规则卷曲和a-螺旋为主,具CAP超家族经典的PR-1结构域,该基因编码的蛋白是一种强亲水性(GRAVY:-0.864)的富含半胱氨酸的分泌蛋白。Alb-AG5-3 mRNA在雌蚊中表达量高于雄蚊且吸血后的表达量显著下调。成功构建了白纹伊蚊唾液蛋白pMT/BiP/V5-Alb-AG5-3真核表达质粒并通过果蝇S2表达体系表达出真核蛋白,镍柱亲和纯化后的Alb-AG5-3经Western blot检测能被V5标签蛋白抗体识别。结论 成功构建白纹伊蚊Alb-AG5-3真核质粒并在果蝇S2细胞中表达真核蛋白Alb-AG5-3,镍柱亲和纯化后获得单一的Alb-AG5-3蛋白以备后续分析。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 唾液腺 Alb-AG5-3蛋白 真核表达

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伊蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白促进DENV-2早期感染BHK-21细胞作用研究 被引量：1

8

作者 徐倩 田炎珅 +4 位作者 朱亚妮 赵久刚 李永念 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期530-533,538,共5页

目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK... 目的探讨白纹伊蚊特异性rAlb-34k2蛋白与登革病毒(DENV)多种靶细胞粘附后促进DENV-2感染作用。方法1)采用间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白24 h内对DENV-2感染BHK-21细胞的作用。2)Western blot和间接免疫荧光法检测rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞的粘附作用以及兔抗rAlb-34k2抗体的阻断效应。结果1)免疫荧光法检测结果显示,热灭活rAlb-34k2蛋白处理组感染比值为0.40±0.023,未灭活组0.54±0.029,差异有统计学意义(P=0.001 1)。2)Western blot和免疫荧光法检测显示rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2、HaCat细胞均可发生粘附,且与BHK-21细胞的粘附具有剂量依赖性;特异性抗体不能阻断rAlb-34k2蛋白与BHK-21、HepG2细胞的粘附效应。结论rAlb-34k2蛋白可与BHK-21等DENV多种靶细胞发生粘附作用,具有介导DENV-2吸附细胞,促进病毒入侵宿主的潜能。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 蚊唾液蛋白 宿主细胞 虫媒病毒 粘附作用

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微小膜壳绦虫感染对ICR小鼠小肠干细胞相关基因mRNA表达的影响 被引量：1

9

作者 杨汉蕾 赵敬 +4 位作者 张科 鄢宇航 门万琪 皮焕婷 牟荣 《贵州医科大学学报》 CAS 2021年第3期256-262,共7页

目的探讨微小膜壳绦虫(H.nana)感染对美国癌症研究所(ICR)小鼠小肠中干细胞相关基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法取野生小鼠小肠内获取的H.nana虫体于显微镜下观察其形态,同时利用保守引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增细胞... 目的探讨微小膜壳绦虫(H.nana)感染对美国癌症研究所(ICR)小鼠小肠中干细胞相关基因信使核糖核酸(mRNA)表达的影响。方法取野生小鼠小肠内获取的H.nana虫体于显微镜下观察其形态,同时利用保守引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增细胞色素C氧化酶亚基I基因(COX 1)部分序列(PCOX 1),并与GenBank中记录的H.nana的COX 1参考株核苷酸序列进行同源性比对分析;60只ICR雌鼠随机均分为实验组(灌胃H.nana虫卵500个)和对照组(灌胃等量生理盐水),灌胃处理后1~10 d分别取2组小鼠距离回盲部6~8 cm处小肠肠段,观察2组小鼠小肠组织内虫体检获情况,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测2组小鼠小肠组织内G蛋白偶联受体5基因(Lgr 5)、多梳复合蛋白基因(Bmi 1)、武藏RNA结合蛋白基因(Msi 1)及淋巴细胞抗原6复合物基因(Ly 6 a)的mRNA相对表达量。结果野生小鼠体内获取的虫体符合H.nana的形态学特征,PCOX 1基因与GenBank中记录的H.nana的COX 1参考株核苷酸序列同源性为99%;qRT-PCR结果显示H.nana发育的似囊尾蚴阶段Lgr 5和Bmi 1表达上调、Ly 6 a表达下调(P<0.05或P<0.01),成虫阶段Lgr 5和Bmi 1表达下调、Ly 6 a上调(P<0.05或P<0.01),Msi 1在虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段表达均下调(P<0.05)。结论H.nana感染可明显影响ICR小鼠Lgr 5、Bmi 1、Msi 1及Ly 6 a基因的mRNA水平,基因表达差异主要分2个阶段,分别对应H.nana虫体发育的似囊尾蚴阶段和成虫阶段。 展开更多

关键词 微小膜壳绦虫 小鼠 小肠 干细胞标志物 信使核糖核酸 实时荧光定量聚合酶链式反应

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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白对C6/36细胞内的DENV2早期抑制作用 被引量：1

10

作者 朱亚妮 金芮 +5 位作者 代薇露 李莹 陈玲玲 赵久刚 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2021年第2期167-170,176,共5页

目的探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用。方法采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6 h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western... 目的探讨白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白在DENV2感染C6/36细胞中的作用。方法采用RT-qPCR检测不同浓度rAlb-34k2蛋白作用6 h、60 h后C6/36细胞内DENV2 NS1核酸的变化;采用Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白与DENV2颗粒结合情况;采用ELISA及Western blot分别检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞膜蛋白结合的差异。结果rAlb-34k2蛋白作用6 h后,C6/36细胞内DENV2 NS1 RNA的相对表达被抑制,其中10、25、100μg/ml浓度组NS1 RNA的相对表达(2^(-ΔΔCT))值分别为(0.6778±0.04827)、(0.5972±0.06369)和(0.4704±0.05297),差异有统计学意义(P<0.05);rAlb-34k2蛋白作用60 h后,各蛋白组间差异无统计学意义。Dot-ELISA检测rAlb-34k2蛋白(71、118.3、177.5μg/ml)可与DENV2病毒颗粒结合。间接ELISA检测rAlb-34k2蛋白与C6/36细胞疏水性膜蛋白和亲水性膜蛋白结合的A值分别为(1.1±0.26)和(3.1±0.047),差异有统计学意义(P=0.0016),Western blot检测亲水性膜蛋白的阳性结合条带数显著多于疏水性膜蛋白。结论白纹伊蚊雌蚊唾液特异性rAlb-34k2蛋白体外能与DENV2病毒颗粒及C6/36细胞膜蛋白结合,并抑制DENV2病毒早期在C6/36细胞中增殖。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 rAlb-34k2蛋白 DENV2 亲水性膜蛋白

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白纹伊蚊rAlb-34k2蛋白诱导小鼠皮肤补体固有成分及CRIg的变化

11

作者 金芮 田炎珅 +7 位作者 朱亚妮 代薇露 卢涛 徐昊 朱俐兰 朱家洪 吴家红 商正玲 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第5期551-555,579,共6页

目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDN... 目的探讨白纹伊蚊唾液特异性34k2重组蛋白(rAlb-34k2)刺激(小鼠腹腔巨噬细胞)RAW264.7及C57BL/6小鼠后补体相关成分mRNA的变化。方法分别用不同浓度rAlb-34k2蛋白刺激RAW264.7细胞和C57BL/6小鼠足垫,采集样本,Trizol提取RNA,逆转录为cDNA后经实时荧光定量PCR方法检测刺激后不同时间各组标本中补体C3、C1q、CfB、CRIg的mRNA变化。结果rAlb-34k2诱导CfB、C3、C1q的mRNA表达上调,且皮肤组织上调幅度高于RAW264.7细胞,其中以CfB mRNA的上调幅度及持续更为显著,在诱导24h时各组(5μg、20μg)2-△△CT值分别是23.90±8.38、8.50±1.64(P<0.05);但刺激12-24h时高剂量组与低剂量组比较上调幅度差异无统计学意义(P>0.05)。在RAW264.7细胞,以刺激6h各种补体固有分成CfB、C3、C1q表达上调,但随时间延长均恢复至正常水平,各剂量组间差异不明显。在局部皮肤组织,rAlb-34k2刺激24h后CRIg表达上调,且呈浓度和时间依赖趋势;48h时,各组rAlb-34k2(5μg、20μg)2-△△CT值达到高峰,分别为8.67±2.44和32.98±9.74,有统计学差异(P<0.05)。在Raw264.7细胞,刺激6h时CRIg有上调表达趋势,但随时间延长而下调,各剂量组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论白纹伊蚊唾液rAlb-34k2蛋白参与调控巨噬细胞及皮肤补体重要成分的表达变化,在组织中尤为显著,且显著上调定居组织的巨噬细胞特异性膜受体CRIg。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 rAlb-34k2 皮肤局部 补体 CRIg 巨噬细胞

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微小膜壳绦虫感染对ICR小鼠小肠LY6A(Sca-1)及IFN-γ、STAT1表达的影响 被引量：1

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作者 赵敬 杨汉蕾 +1 位作者 陈素素 牟荣 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期611-617,共7页

目的探讨微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠组织中LY6A及IFN-γ、STAT1的表达情况。方法采集微小膜壳绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将ICR小鼠随机分为对照组和实验组,实验组以定量1 000个/只虫卵灌胃感染,于感染后第2 d和第8 d按照编号... 目的探讨微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠组织中LY6A及IFN-γ、STAT1的表达情况。方法采集微小膜壳绦虫成虫标本并收集虫卵制作悬液。将ICR小鼠随机分为对照组和实验组,实验组以定量1 000个/只虫卵灌胃感染,于感染后第2 d和第8 d按照编号处死小鼠获取小肠组织。采用HE染色进行小肠组织病理学观察,RT-PCR技术检测LY6A、IFN-γ和STAT1的mRNA相对表达量,免疫组织化学技术检测小肠中LY6A蛋白阳性细胞的表达,并用PRM技术对LY6A蛋白和STAT1蛋白进行相对丰度定量。结果 HE染色结果显示感染后第8 d在肠腔内发现成虫节片,并且虫体寄生处出现急性炎症反应。RT-PCR检测显示感染第2 d实验组LY6A(t=12.57,P<0.001)和STAT1(t=12.13,P<0.001)的mRNA相对表达量低于对照组,而IFN-γ的mRNA相对表达量高于对照组(t=7.78,P<0.01);感染后第8 d实验组LY6A(t=10.01,P<0.001)和STAT1(t=11.19,P<0.001)的mRNA相对表达量高于对照组;而IFN-γ的mRNA相对表达量低于对照组(t=26.47,P<0.001)。免疫组化结果显示感染后第2 d实验组LY6A阳性细胞百分比高于对照组(t=4.26,P<0.01),感染后第8 d实验组LY6A蛋白阳性细胞百分比高于对照组(t=8.18,P<0.001)。PRM检测结果显示感染后第2 d实验组LY6A蛋白相对表达量低于对照组(t=6.55,P<0.05),实验组STAT1蛋白与对照组相比无统计学差异,感染后第8 d实验组LY6A蛋白(t=4.95,P<0.05)和STAT1(t=2.91,P<0.05)蛋白的相对表达量均高于对照组。结论微小膜壳绦虫感染ICR小鼠小肠后LY6A(Sca-1)的mRNA水平和蛋白水平在幼虫侵入早期呈低表达,成虫期呈高表达;IFN-γ对LY6A的表达不起主导作用,而STAT1可能对LY6A(Sca-1)的表达起诱导作用。 展开更多

关键词 微小膜壳绦虫 LY6A/Sca-1 ICR小鼠 IFN-Γ STAT1

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白纹伊蚊唾液源34ku-1基因的克隆表达及鉴定

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作者 陈素素 吴家红 +4 位作者 程金芝 赵久刚 商正玲 聂映 牟荣 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第3期308-313,共6页

目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安... 目的克隆表达白纹伊蚊唾液腺34ku-1蛋白(Aalb_34 ku-1),并制备鼠抗34ku-1多克隆抗体,用于蚊唾液34ku-1蛋白的检测。方法根据白纹伊蚊罗马株(GenBank:AY826117.1)34ku去除信号肽后的基因序列设计特异性引物,采用RT-PCR技术从白纹伊蚊安顺株雌蚊体内扩增获得34ku-1基因。利用美国国家生物技术信息中心(NCBI)、瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统(ExPASy)等对该蛋白进行生物信息学分析。将该基因构建到原核表达质粒pET-32a(+)中,转染大肠埃希菌BL21(DE3)后经异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析表达结果。镍柱纯化34ku-1重组蛋白,采用Western blot验证纯化蛋白的免疫反应性。用纯化的34ku-1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备免疫血清,采用间接ELISA法检测血清抗体效价,采用Western blot方法对抗体的特异性进行鉴定。收集雌蚊唾液,采用Western blot方法用制备的多克隆抗体检测蚊唾液34ku-1蛋白。结果成功克隆获得34ku-1基因,生物信息学分析该基因全长888 bp,编码295个氨基酸。编码蛋白的理论分子质量单位为33.6 ku,等电点为5.54。重组质粒pET-32a(+)-34ku-1经PCR、双酶切及测序验证构建正确。经IPTG诱导的BL21重组菌表达产物主要以包涵体形式存在。经亲和层析法获得高纯度的34ku-1重组蛋白,浓度为0.71 mg/mL。Western blot显示重组蛋白可被抗6-His tag抗体识别,制备的鼠抗34ku-1血清抗体效价为1∶625000,且特异性良好,用34ku-1多克隆抗体Western blot可检测到蚊虫唾液中的34ku-1蛋白。结论成功克隆并表达了白纹伊蚊34ku-1原核蛋白,制备了高效价、高特异性的鼠抗34ku-1多克隆抗体,应用该抗体可检测到雌蚊唾液中的34ku-1蛋白。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 唾液腺 34ku-1重组蛋白 原核表达 多克隆抗体

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常用调料、酒精饮品和饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴体外作用的实验研究

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作者 张科 杜娟 +1 位作者 牟荣 包怀恩 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2018年第3期127-132,共6页

为了观察常用调料、酒精饮品和饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴的体外作用,研究组自亚洲带绦虫孕节收集虫卵,体外孵化至六钩蚴阶段,同时以地塞米松皮下注射昆明鼠30 d后,按5 000个六钩蚴/只对昆明鼠进行感染,于感染后60 d剖杀小鼠获取活囊尾蚴,... 为了观察常用调料、酒精饮品和饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴的体外作用,研究组自亚洲带绦虫孕节收集虫卵,体外孵化至六钩蚴阶段,同时以地塞米松皮下注射昆明鼠30 d后,按5 000个六钩蚴/只对昆明鼠进行感染,于感染后60 d剖杀小鼠获取活囊尾蚴,将常用调料(食醋、10%食盐水、30%食盐水、酱油、100%生姜汁、100%大蒜汁、10%辣椒水和100%柠檬汁)、酒精饮品(白酒、啤酒和红酒)和饮料(鲜橙多、营养快线和可乐)于常温下按不同作用时间分别体外作用活囊尾蚴,将囊尾蚴与猪胆汁于37℃培养48 h观察头节翻出情况,测定并比较调料、酒精饮品和饮料在各时间点作用后对亚洲带绦虫囊尾蚴的死亡率。结果显示,食醋和30%食盐水,酒精饮品中的白酒均可在作用5 min内杀灭全部囊尾蚴(P<0.05),酱油处理需15 min杀死全部囊尾蚴(P<0.05),10%辣椒水需30 min导致囊尾蚴全部死亡(P<0.05),100%蒜汁、100%姜汁和100%柠檬汁分别处理10、30和40 min后囊尾蚴死亡率达100%(P<0.05),而常用饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴影响不显著。因此得出结论,食醋、食盐水、食用酱油、生姜汁、大蒜汁、辣椒水和柠檬汁等常用调料于体外对亚洲带绦虫囊尾蚴均有杀灭作用,其中以食醋和食盐水对亚洲带绦虫囊尾蚴杀灭作用最佳;酒精饮品中的白酒对亚洲带绦虫囊尾蚴具有最佳杀灭效果;而常用饮料对亚洲带绦虫囊尾蚴作用不显著。该研究为防治亚洲带绦虫感染导致的食源性寄生虫病提供了具有重要指导意义的基础资料。 展开更多

关键词 亚洲带绦虫囊尾蚴 调料 酒精饮品 饮料

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4种试剂盒提取病理组织切片中裂头蚴DNA效果的比较 被引量：1

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作者 蒙兴慧 陈艳 +3 位作者 李金福 胡月 刘巧霞 刘鉴 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期635-638,642,共5页

目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物... 目的筛选一种快速、简单、高效、价格合理的从病理组织切片中提取猬裂头蚴DNA的试剂盒。方法用4种不同的试剂盒提取病理组织切片(含虫白片/HE染色片)中裂头蚴DNA,通过比较所提取DNA的浓度、纯度、提取率、提取时间、提取价格及PCR产物的亮度,评价4种市售商品试剂盒提取DNA的效果。结果 4种试剂盒提取裂头蚴有虫组织白片DNA的结果:试剂盒1提取DNA的浓度、纯度及提取率最高,提取成本也最高且耗时较短;试剂盒2的提取效果与试剂盒1相近,提取成本较低且时间最短;试剂盒3的提取效果介于试剂盒2与试剂盒4之间,成本最低但时间长达26h;试剂盒4提取效果最低,PCR产物条带也最暗,提取成本较低但耗时较长。4种试剂盒提取HE染色片DNA的结果:试剂盒1与试剂盒2提取的效果相近,两者成本较高耗时较短,试剂盒3与试剂盒4的提取效果相近,两者成本低耗时长,试剂盒3与试剂盒4的提取效果均低于试剂盒1和试剂盒2的提取效果。结论 4种商品试剂盒均能满足裂头蚴感染有虫组织的DNA提取,其中试剂盒2更适用于快速提取。 展开更多

关键词 猬裂头蚴 DNA提取 病理组织切片 商品试剂盒

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虫种特异性基因检测小鼠无虫病理组织裂头蚴感染的可行性研究 被引量：1

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作者 胡月 陈艳 +3 位作者 李金福 蒙兴慧 刘巧霞 刘鉴 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期357-360,365,共5页

目的研究用细胞色素C氧化酶1基因(cox1)及内转录间隔区1(ITS-1)特异性序列检测小鼠无虫病理组织中裂头蚴感染的可行性。方法 6~8周龄昆明小鼠20只,采用随机抽签法分为感染组(15只)和未感染组(5只),感染组小鼠经口感染蛇源裂头蚴(5条/只)... 目的研究用细胞色素C氧化酶1基因(cox1)及内转录间隔区1(ITS-1)特异性序列检测小鼠无虫病理组织中裂头蚴感染的可行性。方法 6~8周龄昆明小鼠20只,采用随机抽签法分为感染组(15只)和未感染组(5只),感染组小鼠经口感染蛇源裂头蚴(5条/只),未感染组不作任何处理。感染后第14天剖杀小鼠,取感染组小鼠皮下含裂头蚴肌肉组织(含虫组织)、去除裂头蚴肌肉组织(无虫组织)及未感染组小鼠相应部位肌肉,制作组织切片,苏木精-伊红染色法(HE)染色后观察。用改良的蛋白酶K消化法提取未染色肌肉组织切片的DNA,PCR扩增cox1(2对引物,对应cox1-1和cox1-2片段)和ITS-1序列。选取从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1进行克隆并测序,与Gen Bank中猬裂头蚴序列(KJ418421、KF990161、GQ999947)进行比对。以猪囊尾蚴感染的小鼠肌肉组织同法制作切片并提取DNA,评价cox1和ITS-1 PCR扩增的特异性。结果感染组含虫组织DNA经1次PCR即可扩增出414 bp(cox1-1)、151 bp(cox1-2)、822 bp(ITS-1)的条带。感染组无虫组织DNA第1次PCR未扩增出条带,以第1次PCR产物为模板再次PCR,扩增出相同大小的3条条带。未感染组DNA第1次和第2次PCR均未扩增出条带。序列比对结果显示,从感染组无虫组织DNA扩增的cox1-1序列与KJ418421、KF990161、GQ999947序列的同源性分别为98.2%、99.1%、99.1%。猪囊尾蚴感染组织DNA没有扩增出条带。结论以cox1和ITS-1序列为靶序列进行重复PCR,能鉴定小鼠无虫病理组织裂头蚴感染。 展开更多

关键词 裂头蚴 无虫组织 基因检测 内转录间隔区1 细胞色素C氧化酶1 猬迭宫绦虫

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